咸阳市2012年手足口病病原学监测结果分析＊

张俊君，成 翔，秦 龙，魏战峰（陕西省咸阳市疾病预防控制中心 712000）

手足口病（HFMD）好发于5岁以下儿童，可由多种病原体感染所致，包括柯萨奇病毒 A组（CoxA）的16、4、5、7、9、10型，B组（CoxB）的3、7型，以及埃可病毒和肠道病毒（EV）71型（EV71）等，其中以 CoxA16和 EV71最为常见［1］。近年来，HFMD病原体虽然仍以CoxA16和EV71为主，但其他EV型别的检出率有所上升。多数HFMD患者症状轻微，以发热和手、足、口腔等部位的皮疹或疱疹为主要。少数患者可出现无菌性脑膜炎、脑炎、急性弛缓性麻痹、神经源性肺水肿和心肌炎等。个别重症患者则病情进展快，最终死亡。目前，HFMD尚无特异性治疗方法，也缺乏特异性的疫苗［2］。陕西省咸阳市自2011年在陕西省HFMD防治项目专项资金的支持下，开展了HFMD病原学监测工作，以了解HFMD病原体的分布变化以及影响病原学检测结果的因素。现将咸阳市2012年HFMD病原学监测结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料 以县为单位，由县级疾病预防控制中心采集咽拭子标本，包括常规监测标本、重症病例标本、聚集性疫情标本、重症密切接触者标本和死亡病例标本。

1.2 仪器与试剂 四通道实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）扩增仪（西安天隆科技有限公司）；掌式离心机（珠海黑马医学仪器有限公司）；微量振荡器（常州市华普达教学仪器有限公司）；自动核酸提取仪及配套 MagMAX－96病毒核酸抽提试剂盒（美国ABI公司）；实时荧光逆转录PCR（RT－PCR）试剂盒（江苏硕世生物科技有限公司、上海之江生物科技有限公司）；cDNA合成试剂盒（美国Promega公司）

1.3 方法

1.3.1 核酸提取 所有标本采集后浸入装有3.5mL病毒保存液的采样管中，冷藏送至咸阳市疾控中心综合实验室检测。取50μL标本，使用自动核酸提取仪及配套核酸抽提试剂盒提取病毒核酸。同时提取试剂盒阴性对照品和阳性对照品核酸。

1.3.2 EV通用型、CoxA16和EV71型核酸检测 按照HFMD预防控制指南（2009年版）附件1的要求，采用EV通用型、CoxA16和EV71型病毒基因特异性引物和Taqman探针，以及实时荧光RT－PCR试剂盒进行检测，操作步骤严格参照说明书［2］。

1.3.3 其他型别病毒核酸检测 取4μL病毒核酸提取液，使用cDNA合成试剂盒合成cDNA，选用CoxA6和CoxA10特异性引物和VP1区通用引物，参照文献［3－6］的方法，通过RTPCR扩增、核酸序列分析进行病毒分型。PCR反应条件：50℃30min；94℃3min；94℃30s，51℃30s，72℃30s，循环30次；72℃8min。

1.4 统计学处理 采用Microsoft Excel 2003软件进行数据整理，采用SPSS12.0软件进行数据统计学分析。计数资料以百分率表示，组间比较采用卡方检验。P＜0.05为比较差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 疫情概况 2012年咸阳市13个县、市、区共报告HFMD病例8 762 例，发病率约为179.03／10万，重症278例，死亡13例，死亡率约为0.27／10万。患者以散居儿童（6 936例）和幼托儿童（1 462例）为主，占病例总数的95.85%。散居儿童占79.16%。8 762 例报告病例中，7 467 例为0～5岁儿童，占病例总数的85.22%。所有病例中，男5 460例、女3 302例，男女性别比例为1.65∶1。

2.2 总体检测结果 2012年咸阳市疾病预防控制中心共计检测临床确诊HFMD病例咽拭子标本549份，EV阳性126份，阳性检出率22.95%，其中EV71阳性77份（占61.11%）、CoxA16阳性10份（占7.94%）、CoxA10阳性9份（占7.14%）、其他未分型 EV 阳性30份（占23.81%），未检出CoxA6阳性标本。

2.3 不同年龄组病毒检出情况 在所有送检咽拭子标本的病例中，年龄小于或等于3岁者EV阳性检出率为25.41%，年龄大于3岁者阳性检出率为19.92%，阳性检出率组间比较差异无统计学意义（χ2＝2.317，P＞0.05）。两个年龄组间不同病毒阳性构成比比较差异无统计学意义（χ2＝1.70，P＞0.05），见表1。

表1 不同年龄组HMFD病原体阳性构成比

2.4 不同时期标本检测结果 2012年咸阳市HFMD发病出现2个高峰，分别在5～7月和9～10月。按照咽拭子标本送检时间，将549份标本分成高峰期组452份与非高峰期组97份，高峰期组检出EV阳性标本112份，阳性检出率24.78%，非高峰期组检出EV阳性标本14例，阳性检出率14.43%，阳性率比较差异有统统计学意义（χ2＝4.834，P＜0.05）。

2.5 不同病情病例病原体检出情况 普通病例和重症病例EV71阳性检出率分别为9.30%和21.16%，比较差异有统计学意义（χ2＝14.953，P＜0.05）。不同病情病例EV检测结果见表2。

表2 不同病情病例EV检测结果

2.6 不同试剂检测结果 2012年，共采用2个厂家的试剂进行检测，不同试剂阳性检出率比较差异无统计学意义（χ2＝2.499，P＞0.05），见表3。

表3 不同试剂阳性检出率［n或n（%）］

3 讨 论

自2008年起，卫生部将HFMD列入法定报告管理的丙类传染病。咸阳市自2011年起，开展了HFMD的病原学监测，为疫情监测和报告提供了及时的实验室数据，疫情信息更加准确。

咸阳市2012年HFMD疫情监测结果显示，HFMD病例以0～5岁为主。在送检咽拭子标本的549例病例中，年龄小于或等于3岁组与年龄大于3岁组EV阳性检出率比较差异无统计学意义，且不同年龄组间不同病毒的阳性构成比比较差异也无统计学意义（P＞0.05）。所有报告病例中，男性所占比例高于女性，与类似研究报道一致［7］。2012年咸阳市HFMD病原体构成情况显示，EV71阳性构成比高于CoxA16、Cox－A10和其他型别EV，但与2009～2011年咸阳市HFMD流行特征相比［8］，其他EV阳性构成比有所升高，并且在2012年首次检出CoxA10，说明将CoxA6和CoxA10纳入2013年HFMD监测范围十分必要。重症病例EV71阳性检出率高于普通病例（P＜0.05），与深圳等地重症病例的病原体检测结果一致［9－10］。5例死亡病例中，4例为 EV71阳性。由此可见，EV71阳性HFMD病例更易发展至重症病例或者死亡。这可能是因为EV71神经毒力强及存在高变异性，更易导致神经系统症状或肺水肿、肺出血，进而导致病情加重甚至死亡。对549份HFMD临床确诊病例咽拭子标本EV阳性检出率为22.95%，比类似研究报道的阳性检出率偏低［11］。这可能与采用的检测方法、检测试剂及标本类型等存在差异有关［12］。本文的分析结果表明：在使用同一类型标本、相同检测方法和仪器时，试剂种类对检测结果无影响。本文的分析结果也表明：是否在发病高峰期采样对检测结果有影响，发病高峰期采样标本阳性检出率高于非高峰期采样标本（P＜0.05）。有文献报道，粪便标本与咽拭子标本阳性检出率比较差异有统计学意义［13］。因此，在条件允许时，应尽可能采集粪便或肛拭子标本，以提高阳性检出率，尽早明确HFMD病原体型别，为制订针对性的防控措施提供依据。

［1］金奇.医学分子病毒学［M］.北京：科学出版社，2000：606－613.

［2］中华人民共和国卫生部.手足口病预防控制指南（2009年版）［M］.北京：中华人民共和国卫生部，2009.

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［12］周帅锋，张帆，黄威，等.2009年湖南省哨点医院手足口病病原学检测与分析［J］.南华大学学报：医学版，2010，38（4）：479－483.

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