MMP－11在食管鳞状细胞癌组织中的表达水平及临床意义分析＊

张晓伟，唐启明，刘春华，肖 锋，胡建功（.泰山医学院，山东泰安 7000 ；.重庆市大足区人民医院 40360）

全球范围内，因食管癌死亡的患者例数在恶性肿瘤患者中占第6位，且其发病率迅速增加［1］。国内最常见的食管癌类型是食管鳞状细胞癌（ESCC）。由于食管癌患者早期症状不典型，多数食管癌患者就诊时已进展至中晚期，极易因癌组织浸润和转移导致预后不良，甚至死亡。基质金属蛋白酶（MMPS）是一组参与细胞外基质降解和组织重构的内肽酶，也具有抑制细胞凋亡和刺激癌细胞浸润的作用［2－3］。MMP－11是 MMPS家族成员之一，在基质降解、组织重构和肿瘤浸润等方面具有重要作用。本研究对ESCC癌组织、癌旁组织和正常食管组织进行了MMP－11蛋白检测，分析了 MMP－11与ESCC的关系，旨在探讨MMP－11在ESCC发生、发展中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2012年11月至2013年11月接受手术治疗的ESCC确诊患者36例，术前未接受放化疗及其他免疫治疗，无其他部位肿瘤；年龄40～76岁，男20例、女16例。按照第6版TNM分期标准，分为Ⅰ～Ⅱ期13例、Ⅲ～Ⅳ期23例，T1～T2期16例、T3～T4期20例，淋巴转移21例、无淋巴转移15例［4］。同期胃镜下采集正常食管组织的患者9例纳入本研究。

1.2 主要试剂 鼠抗人 MMP－11单克隆抗体（美国Santa Cruz公司）。即用型免疫组织化学（简称免疫组化）EliVisionTMsuper试剂盒（福州迈新生物技术开发有限公司），包括试剂A（放大剂）、试剂B（多聚酶结合物）。

1.3 方法 采集ESCC确诊患者癌组织、癌旁组织（无肿瘤细胞浸润）及正常食管组织标本，经10%甲醛溶液固定后石蜡包埋，以厚度5μm制作组织切片，用于苏木精－伊红（HE）染色和免疫组化检测。操作步骤：切片脱蜡及水化，高压修复，依次加入 MMP－11抗体（1∶50稀释）、试剂A、试剂B、新鲜配制的二氨基联苯胺（DAB），苏木精复染，盐酸酒精分化，自来水冲洗，碳酸锂返蓝，梯度酒精脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封固，由2名病理科专家在不知标本对应患者临床病理特征情况下，显微镜下观察并作出判断。以已知阳性的切片为阳性对照，磷酸盐缓冲液（PBS）代替 MMP－11抗体作为空白对照。参照Yoshikawa等［5］方法，将胞核和（或）胞浆出现黄或棕黄色颗粒的细胞视为阳性细胞。阳性细胞所占比例小于5%判为阴性表达，阳性细胞所占比例大于或等于5%判为阳性表达。

1.4 统计学处理 采用SPSS18.0软件进行数据处理和统计学分析。计数资料以百分率表示，组间比较采用卡方检验。P＜0.05为比较差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 MMP－11蛋白在不同组织中的表达情况 MMP－11蛋白主要在胞浆中表达（见图1）。ESCC癌组织染色结果见图1，其 MMP－11蛋白阳性表达率为69.4%（25／36）；ESCC癌旁组织染色结果见图2，其 MMP－11蛋白阳性表达率为25.0%（9／36）；正常食管组织染色结果见图3，其MMP－11蛋白阳性表达率为22.2%（2／9）。癌旁组织和正常食管组织 MMP－11蛋白阳性表达率低于癌组织（P＜0.05），癌旁组织与正常食管组织MMP－11蛋白阳性表达率比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

图1 ESCC癌组织MMP－11蛋白表达检测（免疫组化染色，×100）

图2 ESCC癌旁组织MMP－11蛋白表达检测（免疫组化染色，×100）

图3 正常食管组织MMP－11蛋白表达检测（免疫组化染色，×100）

2.2 MMP－11蛋白与ESCC的相关性 MMP－11蛋白阳性表达率与ESCC患者年龄、性别、分化程度、肿瘤直径和位置无关（P＞0.05），但Ⅰ～Ⅱ期患者阳性表达率低于Ⅲ～Ⅳ期患者、T1～T2期患者低于T3～T4期患者、无淋巴转移患者低于淋巴转移患者（P＜0.05），见表1。

表1 MMP－11蛋白表达与ESCC的相关性

3 讨 论

肿瘤的侵袭、转移涉及肿瘤细胞黏附分子减少、肿瘤细胞与基底膜黏附力增加、细胞外基质降解等因素，其中基底膜黏附力增加和细胞外基质降解是关键因素。肿瘤侵袭、转移是导致肿瘤患者预后不良的重要因素，而MMPS是引起基底膜黏附力增加和细胞外基质降解的主要物质之一，因此与肿瘤发生、发展密切相关。

Sharma等［6］的研究结果显示，ESCC癌组织 MMP－11蛋白阳性表达率为78%，高于不典型增生组织及正常食管组织，且表达水平与淋巴转移相关。也有研究证实MMP－11蛋白高表达与食管癌患者预后不良密切相关［7］。Zhao等［8］的研究结果显示，胃癌组织MMP－11mRNA表达水平高于癌旁组织，且超过50%的进展期胃癌患者高表达 MMP－11。Jones等［9］对胰腺导管腺癌和正常胰腺组织的研究结果显示，二者MMP－11蛋白阳性表达率分别为69%和20%，且其表达水平与淋巴转移相关，阳性表达患者总体生存时间明显短于阴性表达患者。Skoglund等［10］对原发性结、直肠腺癌的研究结果显示，其MMP－11蛋白阳性表达率为72%，且 MMP－11蛋白表达水平与肿瘤生长方式、患者性别有关，但与患者年龄、Dukes分期和分化程度无关。由此可见，消化系统肿瘤中普遍存在MMP－11蛋白异常表达，说明MMP－11蛋白在肿瘤发生、发展过程中起着较为重要的作用，与癌组织的浸润、转移及患者的预后密切相关。

本研究结果显示，ESCC癌旁组织和正常食管MMP－11蛋白表达水平低于ESCC癌组织，且其表达水平与ESCC临床分期、TNM分期、淋巴转移有关，随着分期的增高，表达水平升高，有淋巴转移的患者表达水平高于无淋巴转移的患者，提示MMP－11蛋白表达水平越高，肿瘤组织侵袭能力越强，患者预后越差。因此，可以通过检测ESCC癌组织 MMP－11蛋白水平判断患者的预后。

综上所述，MMP－11蛋白参与了ESCC的发生、发展，与肿瘤浸润转移有关；检测其在ESCC癌组织中的表达水平有助于判断疾病恶性程度，也可为临床诊治提供一定的理论依据。至于MMP－11蛋白参与肿瘤浸润转移的机制尚有待进一步研究。

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［5］Yoshikawa R，Nakano Y，Tao L，et al.Hedgehog signal activation in esophageal cancer patients undergoing neoadjuvant chemoradiotherapy［J］.Brit J Cancer，2008，98（10）：1670－1674.

［6］Sharma R，Chattopadhyay TK，Mathur M，et al.Prognostic significance of stromelysin－3and tissue inhibitor of matrix metalloproteinase－2in esophageal cancer［J］.Oncology，2004，67（3／4）：300－309.

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［9］Jones LE，Humphreys MJ，Campbell F，et al.Comprehensive analysis of matrix metalloproteinase and tissue inhibitor expression in pancreatic cancer increased expression of matrix metalloproteinase－7predicts poor survival［J］.Clin Cancer Res，2004，10（8）：2832－2845.

［10］Skoglund J，Emterling A，Arbman G，et al.Clinicopathological significance of stromelysin－3expression in colorectal cancer［J］.Oncology，2004，67（1）：67－72.