离子色谱法测定合成多肽类药物中醋酸的含量

邓锋++林向华

[摘要] 目的 探索采用离子色谱法测定合成多肽药物中醋酸的含量。 方法 以DIONEX IonPac AS19（4 mm×250 mm）为色谱柱，淋洗液为3.2 mmol/L的碳酸钠和1.0 mmol/L碳酸氢钠混合溶液，流速为0.8 ml/min，抑制电流为70 mA，电导检测器进行检测。 结果 醋酸含量在14.2～142.2 μg/ml范围内线性相关系数为0.9997，回收率在98.1%～100.7%，RSD为1.0%。 结论 离子色谱法简便快捷，结果准确，可替代高效液相色谱法用于测定合成多肽药物中醋酸的含量。

[关键词] 离子色谱；合成多肽类药物；醋酸

[中图分类号] R927 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）08（a）-0056-03

Content of acetic acid in synthetic polypeptide drugs determined by ion chromatography

DENG Feng1 LIN Xiang-hua2

1.Food and Drug Control Institute in Guangdong Province，Guangzhou 510180，China；2.Sun Yat-Sen Memorial Hospital，Sun Yat-Sen University，Guangzhou 510120，China

[Abstract] Objective To explore the content of acetic acid in synthetic polypeptide drugs determined by ion chromatography. Methods Analytical column was DIONEX IonPac AS19 （4 mm×250 mm），the leacheate was a solution of 3.2 mmol/L sodium carbonate mixed with 1.0 mmol/L sodium bicarbonate，flow velocity was 0.8 ml per minute，the curb was 70 mA，and electrical conductivity detector was applied for determination. Results The linearly dependent coefficient was 0.9997 when the content of acetic acid ranged from 14.2 μg/ml to 142.2 μg/ml.The recovery rate was from 98.1% to 100.7% and percentage of relative standard deviation （RSD） was 1.0%. Conclusion Ion chromatography is simple，convenient and fast with accurate result，which can replace high performance liquid chromatography in determining the content of acetic acid from synthetic polypeptide drugs.

[Key words] Ion chromatography；Synthetic polypeptide drug；Acetic acid

《中国药典》2010年版第一增补本二部附录Ⅶ N合成多肽中醋酸测定法[1]以冰醋酸为对照品，采用高效液相色谱法，梯度洗脱30 min测定醋酸含量。操作过程中冰醋酸味道刺鼻，分析时间较长。本文以醋酸钠作为对照品，采用离子色谱法，尝试以更简便安全的方法检测多肽药物中醋酸的含量。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药

离子色谱法仪器为戴安（DIONEX）ICS1000，高效液相色谱仪为WATERS 2690/996，Mettler AE240电子天平，MILLIPORE 超纯水仪。

三合水醋酸钠（分析纯，广州化学试剂厂，批号20090401-2，99.0%），冰醋酸（分析纯，广州化学试剂厂，批号20101101-2，99.5%），碳酸氢钠、碳酸钠均为分析纯。

样品为2家不同企业生产的合成多肽类药物醋酸曲普瑞林各1批。

1.2 溶液配制

1.2.1 对照品溶液 取三合水醋酸钠适量，精密称定，加水溶解并稀释至约2500 μg/ml，作为对照品储备液；精密吸取适量，加水稀释至约80 μg/ml。

1.2.2 样品溶液 取样品约100 mg，精密称定，加水10 ml溶解。

1.3 色谱条件

3 讨论

离子色谱是在离子交换色谱法的基础上建立起来的一种离子分离分析液相色谱技术[2]，目前已成为分析化学领域中发展最快的分析方法之一，被广泛地用于无机阴阳离子和有机离子的测定，具有快速方便、灵敏度高、选择性好、可同时分析多种离子化合物、分离柱的稳定性好、容量高、样品用量少、易实现自动化等优点，在环境检测[3-4]、食品[5]乃至药品[6-7]及疫苗[8]等领域得到了广泛的应用。特别是《美国药典》31版和《欧洲药典》6.0版对妥布霉素等个氨基苷类抗生素品种应用离子色谱法检测，标志着其作为法定检验方法在药品标准中收载和应用。《中国药典》2010年版附录也新增了离子色谱法并用于测定帕米膦酸二钠注射液含量[9]。endprint

合成多肽药物多采用固相合成方法，出于工艺生产要求和需要，大部分多肽药物以醋酸盐形式存在[10]，醋酸作为合成多肽重要的质量指标在《中国药典》2010年版二部附录中专门对其测定作了规定，采用高效液相色谱方法，C18色谱柱，应用有机溶剂作为流动相进行梯度洗脱，分析一个样品需要约1 h。有研究采用离子色谱法，采用Ion-Pac AS14离子色谱柱测定盐酸氨溴索中醋酸残留量[11]，而采用Ion-Pac AS19离子色谱柱交换容量更高，适于复杂体系阴离子的分析[12]，无需采用有机溶剂，分离分析时间大为缩短，分析1个样品仅为10 min，而且干扰较小，操作简单，结果准确。此外，用醋酸钠替代冰醋酸作为对照品，可以降低腐蚀气体对人体的危害，同时保证结果准确可靠。该方法可作为合成多肽类药物醋酸含量指标控制方法的重要补充。

[参考文献]

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（第一增补本）[M].北京：中国医药科技出版社，2010：532.

[2] Small H，Stevens T，Baunann W.Novel ion exchange chromatographic method using conductimetric detection[J].Anal Chem，1975，47（11）：1801-1809.

[3] 孔瑾.简析离子色谱在饮用水监测工作中的应用[J].环境科学与管理，2012，7（2）：118-120.

[4] 王静.离子色谱在大气环境中的离线和在线应用[J].环境化学，2011，30（11）：1970-1972.

[5] 刘向红.离子色谱在食品分析中的应用[J].中国卫生检验杂志，2011，21（7）：1837-1840.

[6] 张培敏，周琰春，朱岩.离子色谱在制药分析中的新进展[J].药物分析杂志，2007，27（1）：151-155.

[7] 刘英，李茜.离子色谱在抗生素药物分析中的应用[J].药物分析杂志，2012，32（1）：179-185.

[8] 慕艳红，王晶.离子色谱在多糖疫苗及多糖蛋白结合疫苗质量控制中的应用[J].微生物学免疫学进展，2011，40（6）：78-82.

[9] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010.

[10] Chan WC，White PD.Fmoc solid phase and peptide synthesis[M].Oxford：Oxford University Press，2000：6.

[11] 晏菊姣.离子色谱法测定盐酸氨溴索中醋酸残留量[J].中国药品标准，2008，9（3）：203-205.

[12] 李国兴，施青红，朱岩.离子色谱固定相最新进展[J].化学分析计量，2005，14（6）：58.

（收稿日期：2014-05-26 本文编辑：郭静娟）endprint

合成多肽药物多采用固相合成方法，出于工艺生产要求和需要，大部分多肽药物以醋酸盐形式存在[10]，醋酸作为合成多肽重要的质量指标在《中国药典》2010年版二部附录中专门对其测定作了规定，采用高效液相色谱方法，C18色谱柱，应用有机溶剂作为流动相进行梯度洗脱，分析一个样品需要约1 h。有研究采用离子色谱法，采用Ion-Pac AS14离子色谱柱测定盐酸氨溴索中醋酸残留量[11]，而采用Ion-Pac AS19离子色谱柱交换容量更高，适于复杂体系阴离子的分析[12]，无需采用有机溶剂，分离分析时间大为缩短，分析1个样品仅为10 min，而且干扰较小，操作简单，结果准确。此外，用醋酸钠替代冰醋酸作为对照品，可以降低腐蚀气体对人体的危害，同时保证结果准确可靠。该方法可作为合成多肽类药物醋酸含量指标控制方法的重要补充。

[参考文献]

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（第一增补本）[M].北京：中国医药科技出版社，2010：532.

[2] Small H，Stevens T，Baunann W.Novel ion exchange chromatographic method using conductimetric detection[J].Anal Chem，1975，47（11）：1801-1809.

[3] 孔瑾.简析离子色谱在饮用水监测工作中的应用[J].环境科学与管理，2012，7（2）：118-120.

[4] 王静.离子色谱在大气环境中的离线和在线应用[J].环境化学，2011，30（11）：1970-1972.

[5] 刘向红.离子色谱在食品分析中的应用[J].中国卫生检验杂志，2011，21（7）：1837-1840.

[6] 张培敏，周琰春，朱岩.离子色谱在制药分析中的新进展[J].药物分析杂志，2007，27（1）：151-155.

[7] 刘英，李茜.离子色谱在抗生素药物分析中的应用[J].药物分析杂志，2012，32（1）：179-185.

[8] 慕艳红，王晶.离子色谱在多糖疫苗及多糖蛋白结合疫苗质量控制中的应用[J].微生物学免疫学进展，2011，40（6）：78-82.

[9] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010.

[10] Chan WC，White PD.Fmoc solid phase and peptide synthesis[M].Oxford：Oxford University Press，2000：6.

[11] 晏菊姣.离子色谱法测定盐酸氨溴索中醋酸残留量[J].中国药品标准，2008，9（3）：203-205.

[12] 李国兴，施青红，朱岩.离子色谱固定相最新进展[J].化学分析计量，2005，14（6）：58.

（收稿日期：2014-05-26 本文编辑：郭静娟）endprint

合成多肽药物多采用固相合成方法，出于工艺生产要求和需要，大部分多肽药物以醋酸盐形式存在[10]，醋酸作为合成多肽重要的质量指标在《中国药典》2010年版二部附录中专门对其测定作了规定，采用高效液相色谱方法，C18色谱柱，应用有机溶剂作为流动相进行梯度洗脱，分析一个样品需要约1 h。有研究采用离子色谱法，采用Ion-Pac AS14离子色谱柱测定盐酸氨溴索中醋酸残留量[11]，而采用Ion-Pac AS19离子色谱柱交换容量更高，适于复杂体系阴离子的分析[12]，无需采用有机溶剂，分离分析时间大为缩短，分析1个样品仅为10 min，而且干扰较小，操作简单，结果准确。此外，用醋酸钠替代冰醋酸作为对照品，可以降低腐蚀气体对人体的危害，同时保证结果准确可靠。该方法可作为合成多肽类药物醋酸含量指标控制方法的重要补充。

[参考文献]

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（第一增补本）[M].北京：中国医药科技出版社，2010：532.

[2] Small H，Stevens T，Baunann W.Novel ion exchange chromatographic method using conductimetric detection[J].Anal Chem，1975，47（11）：1801-1809.

[3] 孔瑾.简析离子色谱在饮用水监测工作中的应用[J].环境科学与管理，2012，7（2）：118-120.

[4] 王静.离子色谱在大气环境中的离线和在线应用[J].环境化学，2011，30（11）：1970-1972.

[5] 刘向红.离子色谱在食品分析中的应用[J].中国卫生检验杂志，2011，21（7）：1837-1840.

[6] 张培敏，周琰春，朱岩.离子色谱在制药分析中的新进展[J].药物分析杂志，2007，27（1）：151-155.

[7] 刘英，李茜.离子色谱在抗生素药物分析中的应用[J].药物分析杂志，2012，32（1）：179-185.

[8] 慕艳红，王晶.离子色谱在多糖疫苗及多糖蛋白结合疫苗质量控制中的应用[J].微生物学免疫学进展，2011，40（6）：78-82.

[9] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010.

[10] Chan WC，White PD.Fmoc solid phase and peptide synthesis[M].Oxford：Oxford University Press，2000：6.

[11] 晏菊姣.离子色谱法测定盐酸氨溴索中醋酸残留量[J].中国药品标准，2008，9（3）：203-205.

[12] 李国兴，施青红，朱岩.离子色谱固定相最新进展[J].化学分析计量，2005，14（6）：58.

（收稿日期：2014-05-26 本文编辑：郭静娟）endprint