云厚朴大紫丹参清除DPPH·的作用

魏泽英，孙海林，杨文标，李丽梅

摘要：目的采用DPPH·法，测定云厚朴SFE-CO2萃取液、乙醇提取液和大紫丹参水提取液清除DPPH·自由基的活性。方法通过在样品中加入DPPH·，测定吸光度的改变，计算清除率%和C50。结果云厚朴SFE-CO2萃取液C50=4.83μg/mL，云厚朴乙醇提取液C50=4.17μg/mL；尚未达到C50时，大紫丹参水提取液的清除曲线就趋于平缓。结论云厚朴SFE-CO2萃取液、乙醇提取液和大紫丹参水提取液都具有清除DPPH·自由基的活性，大紫丹参水提取液清除DPPH·自由基的作用较弱。

关键词：DPPH·；抗氧化；云厚朴；大紫丹参

中图分类号：R285.5文献标志码：A文章编号：1007-2349（2014）04-0057-03

EffectofMagnoliaOfficinalisandRadixSalviaeMiltiorrhizaeonDPPH·Scavenging

WEIZe-ying，SUNHai-lin，YANGWen-biao，etal.

（SchoolPharmacy，YunnanUniversityofTraditionalChineseMedicine，Kunming650500，Yunnan）

【Abstract】Objective：DPPHmethodwasusedtomeasuretheDPPHradicalscavengingactivityofSFE-CO2extractandethanolextractfromMagnoliaOfficinalisandwaterextractfromRadixSalviaeMiltiorrhizae.Methods：DPPHwasaddedintothesampletomeasureabsorbancechangesandtocalculateclearancerateandC50.Results：TheSFE-CO2extractC50=4.83μg/mLandtheethanolextractC50=4.17μg/mL.WhennotyetreachingC50，theclearancecurveofthewaterextractfromRadixSalviaeMiltiorrhizaewasinclinedtobeflat.Conclusion：TheSFE-CO2extractandtheethanolextractfromMagnoliaOfficinalisandthewaterextractfromRadixSalviaeMiltiorrhizaehavethefreeradicalactivityofscavengingDPPHandthewaterextractfromRadixSalviaeMiltiorrhizaehasaweakfreeradicalofscavengingDPPH.

【Keywords】DPPH，antioxidant，MagnoliaOfficinalis，RadixSalviaeMiltiorrhizae

中药厚朴为木兰科植物厚朴（MagnoliaofficinalisRehd.etwils）的干燥干皮、根皮及枝皮[1]，是我国重要的传统中药。厚朴性温，味苦辛，入脾、胃、肺、大肠经，具有燥湿化痰、下气除满的功能，主治湿滞伤中、脘痞吐泻、食积气滞、腹胀便秘、痰饮喘咳等症[2]。厚朴酚与和厚朴酚是厚朴中的活性成分，对自由基引起的感染、癌症、老化、白内障及自身免疫障碍等疾病的治疗有益，厚朴酚与和厚朴酚具有的抗氧化活性，可抑制细胞中产生的H2O2，O2-，OH-[3]。云厚朴来源于木兰科植物滇缅厚朴（MagnoliarostrataW.W.Smith）的干燥干皮、根皮及枝皮，活性成分与正品厚朴类似。云厚朴对DPPH·的清除研究未见报道。

丹参为我国传统常用中药，药典收载品为唇形科植物丹参（SalviamiltiorrhizaBge.）的干燥根和根茎。丹参味苦，微寒，入心、心包、肝经。具有活血化瘀、凉血消痈及养血安神的功效，多用于治疗冠心病、心绞痛、心肌梗塞、心动过速、脑血栓等。原儿茶醛、咖啡酸为水溶性丹酚酸类的主要成分，隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮ⅡA为脂溶性的丹参酮类的主要组成[4]。大紫丹参为褐毛甘西鼠尾草（SalviaprzewalskiiMaxim.var.mandarinorum（Diels）Stibal）的干燥根和根茎，是云南省习用丹参药材之一，主产于滇西北，活性成分与正品丹参类似。大紫丹参对DPPH·的清除研究未见报道。

DPPH·（1，1-二苯基-2-三硝基苯肼，分子式C18H12N5O6，分子量394.32）是暗紫色大棱柱晶体，其醇溶液呈深紫色，其稳定性主要来自3个苯环的共振稳定作用及空间位阻。其分光光度法测定原理是依据DPPH·在乙醇溶液中最大吸收波长在517nm处，当有自由基清除剂存在时，由于与其单电子配对而使其吸收逐渐减弱、消失，其褪色程度与配对电子数成化学计量关系，在最大光吸收波长处的吸光度值下降，且下降程度呈线性关系，因此可以评价实验样品的抗氧化能力。DPPH·法于1958被提出，是用以评价天然抗氧化剂抗氧化活性的一种快速、简便、灵敏可行的方法[5]。

厚朴、丹参的治疗作用与其抗氧化活性有关。云厚朴、大紫丹参是云南省的习用药材，其抗氧化活性的研究可以进一步探明云厚朴、大紫丹参及其制剂的药用机理。本文研究了云厚朴的SFE-CO2（CO2超临界流体萃取）萃取液和乙醇提取液、大紫丹参（丽江产、会泽产）水提液在无水乙醇介质中清除DPPH·的活性。

1仪器与材料

1.1仪器UV-2450紫外-可见分光光度计（日本岛津）），SFE-CO2装置（型号：HA221-50-06，江苏南通华安超临界萃取有限公司），CO2气体（昆明氧气厂，食品级纯度99.9%），MettlerToledoAl204电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）。endprint

1.2材料云厚朴药材购于昆明菊花村中药材市场，经云南中医学院杨树德教授鉴定为木兰科植物滇缅厚朴（MagnoliarostrataW.W.Smith）的干燥干皮；丽江产大紫丹参购于丽江，会泽产大紫丹参购于会泽，两个产地的大紫丹参经云南中医学院杨树德教授鉴定为甘西鼠尾草（SalviaprzewalskiiMaxim.var.mandarinorum（Diels）Stibal）的干燥根。

DPPH·（BR.）（上海凯洋生物技术有限公司）；无水乙醇（AR.）（天津大茂化学试剂厂）；厚朴酚对照品购于中国药品生物制品检定所（批号：110729-200411）；芦丁（自制）。

2方法与结果

2.1云厚朴提取物的制备及含量测定

2.1.1标准曲线的制备精密称取厚朴酚对照品3.0mg，置50mL容量瓶中，用无水乙醇溶解，定容，得浓度为60μg/mL的对照品溶液。精密量取厚朴酚对照品溶液1、2、3、4、5、6mL，分别置于10mL容量瓶中，用无水乙醇定容，在293nm处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，得标准曲线为A=0.03414c+0.01765（R2=0.9996）。

2.1.2云厚朴提取物的制备云厚朴SFE-CO2萃取物的制备：取云厚朴药材适量，粉碎过10目筛备用。按萃取压力30MPa，萃取温度45℃，分离压力7MPa，分离温度35℃，85%乙醇为夹带剂，CO2为20L/h，提取时间2.5h条件下进行萃取[6]。萃取液稀释3倍，测定吸光度，按标准曲线法进行计算，得出该萃取液的总酚含量为46μg/mL。

云厚朴乙醇提取物的制备：取云厚朴药材适量，粉碎过10目筛，加80%乙醇加热回流提取2次，提取时间依次为1.5、1h，溶媒用量依次为10倍量，8倍量。合并滤液，回收乙醇，氯仿萃取，旋干，无水乙醇定容[7]，测定吸光度，得出该提取液的总酚含量为49μg/mL。

2.2大紫丹参水提取物的制备取大紫丹参（丽江产、会泽产）适量，粉碎过40目筛，加蒸馏水回流提取2次，提取时间依次为1.5、1h，溶媒用量依次为15倍量、20倍量。合并滤液，得大紫丹参水提取液。

2.3DPPH·溶液的制备精密称取DPPH·26.1mg，无水乙醇为溶剂，超声溶解后，定容至100mL，配制成浓度261μg/mL的储备液，密封于冰箱存放，用时将储备液稀释。

2.4芦丁溶液的制备精密称取芦丁4.7mg，无水乙醇为溶剂，超声溶解后，定容至100mL，配制成浓度47μg/mL的储备液，密封于冰箱存放，用时将储备液稀释。

2.5波长-吸光度之间的关系扫描DPPH·无水乙醇溶液，考察其紫外吸收情况，测定结果显示，在无水乙醇介质中，DPPH·的最大吸收在516nm附近，与文献报道一致，故选择测定波长为516nm。

2.6DPPH·溶液显色稳定性考察精密吸取DPPH·溶液1.0mL置10mL量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，放置0.5、1、1.5、2h，以无水乙醇为空白对照，在516nm处测定吸光度，发现放置1h内，DPPH·溶液吸光度基本不变。

精密吸取DPPH·溶液1.0mL置10mL量瓶中，加入样品，用无水乙醇定容至刻度，放置0.5、1、1.5、2h，以无水乙醇为空白对照，在516nm处测定吸光度，发现吸光度随时间增长呈线性降低，但30min后，吸光度的变化已经很小，故确定反应30min后，迅速测定吸光度，保证在5min内测完。

2.7DPPH·溶液浓度-吸光度之间的关系精确吸取DPPH·溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL置10mL量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，放置30s后，以无水乙醇为空白对照，在516nm处测定吸光度，以吸光度A为纵坐标，DPPH·浓度为横坐标进行线性回归分析，得出线性方程为A=0.5825c-0.0023（R2=0.9991）。说明DPPH·浓度与吸光度之间有线性关系，可据此了解加入样品反应后剩余DPPH·的含量。

2.8测定方法精密吸取1mLDPPH·溶液，加入一定量的提取液，定容至10mL，放置30min，测定吸光度，实验设置3个平行组，取平均值计算。以芦丁溶液的抗氧化实验与提取液进行比较，以下式计算清除率：

清除率%=（1-AiA0）×100%

A0：1mLDPPH·溶液定容为10mL的吸光度平均值

Ai：1mLDPPH·溶液加入提取液定容为10mL的吸光度平均值

清除率越大，抗氧化活性越高。将清除50%DPPH·所需样品量定义为C50，C50越小，抗氧化能力越强。

2.9测定结果按2.8项的方法进行测定，云厚朴SFE-CO2萃取液、云厚朴乙醇提取液、芦丁溶液清除DPPH·实验结果见图1。

图1云厚朴SFE-CO2萃取液、乙醇提取液、

芦丁溶液清除DPPH·曲线

由图计算出：C50（云厚朴SFE-CO2萃取液）=4.83μg/mL，C50（云厚朴乙醇提取液）=4.17μg/mL，C50（芦丁）=4.70μg/mL。

按2.8项的方法进行测定，丽江产大紫丹参、会泽产大紫丹参清除DPPH·实验结果见图2。

图2大紫丹参（丽江、会泽）水提取液清除DPPH·曲线

由图可见，尚未达到C50时，曲线就趋于平缓。

3小结与讨论

云厚朴SFE-CO2萃取液清除DPPH·的作用与芦丁相当，云厚朴乙醇提取液清除DPPH·的作用强于SFE-CO2提取液，可能是由于乙醇提取液总酚含量较高。酚类化合物抗氧化的活性，主要是由于它们的还原特性，这种还原特性在中性自由基消除单线态和三线态氧或是分解过氧化物中具有重要作用。厚朴酚与和厚朴酚清除DPPH·的作用机理已有初步研究[3]，但云厚朴提取液的清除机理与纯品溶液是否一致，其机理如何尚有待进一步研究。

大紫丹参水提取液清除DPPH·的作用较弱，还没有达到C50，曲线就趋于平缓。丽江产大紫丹参与会泽产大紫丹参清除DPPH·的作用没有明显区别。丹参及其制剂治疗心脑血管疾病的作用与其提取物具有抗氧化活性有关，通过抑制自由基的产生从而保护心脏免受伤害[8]。夏华鑫等研究认为丹参水提取液中，丹酚酸B的抗氧化作用最强，丹酚酸B可能是丹参通过清除氧自由基治疗心血管疾病的重要活性成分[9]。大紫丹参的抗氧化活性有待进一步研究。

参考文献：

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S]（一部）.北京：中国医药科技出版社，2010﹕235-237.

[2]高学敏.中药学[M].北京：中国中医药出版社，2007：206-210.

[3]保志娟，杨雪琼，邹永明，等.厚朴酚与和厚朴酚清除DPPH·的作用[J].云南大学学报（自然科学版），2005，27（1）：60-63.

[4]郑国墀.丹参化学成分的研究概况[J].中国药学杂志，1989，24（1）：69-73.

[5]勾明玥，刘梁，张春枝.采用DPPH法测定26种植物的抗氧化活性[J].大连工业大学生物与食品工程学院学报，2010，36（3）：148-150.

[6]邓义德，指导：梁晓原.乙醇对超临界CO2萃取云厚朴总酚影响的研究[J].云南中医学院学报，2008，31（4）：31-34.

[7]邓义德，刘海周，曹玮娟，等.云厚朴两种提取方法的比较研究[J].云南中医学院学报，2009，32（2）：32-38.

[8]唐忠志，唐瑛.丹参对自发性高血压大鼠左心室心肌病变及血液流变学的影响[J].第四军医大学学报，2004，25（2）：9-12.

[9]夏华鑫，刘梅，张志敏.丹参水溶性成分体外抗氧化活性研究[J].中华中医药学刊，2009，27（5）：1086-1087.

（收稿日期：2014-02-12）endprint

1.2材料云厚朴药材购于昆明菊花村中药材市场，经云南中医学院杨树德教授鉴定为木兰科植物滇缅厚朴（MagnoliarostrataW.W.Smith）的干燥干皮；丽江产大紫丹参购于丽江，会泽产大紫丹参购于会泽，两个产地的大紫丹参经云南中医学院杨树德教授鉴定为甘西鼠尾草（SalviaprzewalskiiMaxim.var.mandarinorum（Diels）Stibal）的干燥根。

DPPH·（BR.）（上海凯洋生物技术有限公司）；无水乙醇（AR.）（天津大茂化学试剂厂）；厚朴酚对照品购于中国药品生物制品检定所（批号：110729-200411）；芦丁（自制）。

2方法与结果

2.1云厚朴提取物的制备及含量测定

2.1.1标准曲线的制备精密称取厚朴酚对照品3.0mg，置50mL容量瓶中，用无水乙醇溶解，定容，得浓度为60μg/mL的对照品溶液。精密量取厚朴酚对照品溶液1、2、3、4、5、6mL，分别置于10mL容量瓶中，用无水乙醇定容，在293nm处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，得标准曲线为A=0.03414c+0.01765（R2=0.9996）。

2.1.2云厚朴提取物的制备云厚朴SFE-CO2萃取物的制备：取云厚朴药材适量，粉碎过10目筛备用。按萃取压力30MPa，萃取温度45℃，分离压力7MPa，分离温度35℃，85%乙醇为夹带剂，CO2为20L/h，提取时间2.5h条件下进行萃取[6]。萃取液稀释3倍，测定吸光度，按标准曲线法进行计算，得出该萃取液的总酚含量为46μg/mL。

云厚朴乙醇提取物的制备：取云厚朴药材适量，粉碎过10目筛，加80%乙醇加热回流提取2次，提取时间依次为1.5、1h，溶媒用量依次为10倍量，8倍量。合并滤液，回收乙醇，氯仿萃取，旋干，无水乙醇定容[7]，测定吸光度，得出该提取液的总酚含量为49μg/mL。

2.2大紫丹参水提取物的制备取大紫丹参（丽江产、会泽产）适量，粉碎过40目筛，加蒸馏水回流提取2次，提取时间依次为1.5、1h，溶媒用量依次为15倍量、20倍量。合并滤液，得大紫丹参水提取液。

2.3DPPH·溶液的制备精密称取DPPH·26.1mg，无水乙醇为溶剂，超声溶解后，定容至100mL，配制成浓度261μg/mL的储备液，密封于冰箱存放，用时将储备液稀释。

2.4芦丁溶液的制备精密称取芦丁4.7mg，无水乙醇为溶剂，超声溶解后，定容至100mL，配制成浓度47μg/mL的储备液，密封于冰箱存放，用时将储备液稀释。

2.5波长-吸光度之间的关系扫描DPPH·无水乙醇溶液，考察其紫外吸收情况，测定结果显示，在无水乙醇介质中，DPPH·的最大吸收在516nm附近，与文献报道一致，故选择测定波长为516nm。

2.6DPPH·溶液显色稳定性考察精密吸取DPPH·溶液1.0mL置10mL量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，放置0.5、1、1.5、2h，以无水乙醇为空白对照，在516nm处测定吸光度，发现放置1h内，DPPH·溶液吸光度基本不变。

精密吸取DPPH·溶液1.0mL置10mL量瓶中，加入样品，用无水乙醇定容至刻度，放置0.5、1、1.5、2h，以无水乙醇为空白对照，在516nm处测定吸光度，发现吸光度随时间增长呈线性降低，但30min后，吸光度的变化已经很小，故确定反应30min后，迅速测定吸光度，保证在5min内测完。

2.7DPPH·溶液浓度-吸光度之间的关系精确吸取DPPH·溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL置10mL量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，放置30s后，以无水乙醇为空白对照，在516nm处测定吸光度，以吸光度A为纵坐标，DPPH·浓度为横坐标进行线性回归分析，得出线性方程为A=0.5825c-0.0023（R2=0.9991）。说明DPPH·浓度与吸光度之间有线性关系，可据此了解加入样品反应后剩余DPPH·的含量。

2.8测定方法精密吸取1mLDPPH·溶液，加入一定量的提取液，定容至10mL，放置30min，测定吸光度，实验设置3个平行组，取平均值计算。以芦丁溶液的抗氧化实验与提取液进行比较，以下式计算清除率：

清除率%=（1-AiA0）×100%

A0：1mLDPPH·溶液定容为10mL的吸光度平均值

Ai：1mLDPPH·溶液加入提取液定容为10mL的吸光度平均值

清除率越大，抗氧化活性越高。将清除50%DPPH·所需样品量定义为C50，C50越小，抗氧化能力越强。

2.9测定结果按2.8项的方法进行测定，云厚朴SFE-CO2萃取液、云厚朴乙醇提取液、芦丁溶液清除DPPH·实验结果见图1。

图1云厚朴SFE-CO2萃取液、乙醇提取液、

芦丁溶液清除DPPH·曲线

由图计算出：C50（云厚朴SFE-CO2萃取液）=4.83μg/mL，C50（云厚朴乙醇提取液）=4.17μg/mL，C50（芦丁）=4.70μg/mL。

按2.8项的方法进行测定，丽江产大紫丹参、会泽产大紫丹参清除DPPH·实验结果见图2。

图2大紫丹参（丽江、会泽）水提取液清除DPPH·曲线

由图可见，尚未达到C50时，曲线就趋于平缓。

3小结与讨论

云厚朴SFE-CO2萃取液清除DPPH·的作用与芦丁相当，云厚朴乙醇提取液清除DPPH·的作用强于SFE-CO2提取液，可能是由于乙醇提取液总酚含量较高。酚类化合物抗氧化的活性，主要是由于它们的还原特性，这种还原特性在中性自由基消除单线态和三线态氧或是分解过氧化物中具有重要作用。厚朴酚与和厚朴酚清除DPPH·的作用机理已有初步研究[3]，但云厚朴提取液的清除机理与纯品溶液是否一致，其机理如何尚有待进一步研究。

大紫丹参水提取液清除DPPH·的作用较弱，还没有达到C50，曲线就趋于平缓。丽江产大紫丹参与会泽产大紫丹参清除DPPH·的作用没有明显区别。丹参及其制剂治疗心脑血管疾病的作用与其提取物具有抗氧化活性有关，通过抑制自由基的产生从而保护心脏免受伤害[8]。夏华鑫等研究认为丹参水提取液中，丹酚酸B的抗氧化作用最强，丹酚酸B可能是丹参通过清除氧自由基治疗心血管疾病的重要活性成分[9]。大紫丹参的抗氧化活性有待进一步研究。

参考文献：

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S]（一部）.北京：中国医药科技出版社，2010﹕235-237.

[2]高学敏.中药学[M].北京：中国中医药出版社，2007：206-210.

[3]保志娟，杨雪琼，邹永明，等.厚朴酚与和厚朴酚清除DPPH·的作用[J].云南大学学报（自然科学版），2005，27（1）：60-63.

[4]郑国墀.丹参化学成分的研究概况[J].中国药学杂志，1989，24（1）：69-73.

[5]勾明玥，刘梁，张春枝.采用DPPH法测定26种植物的抗氧化活性[J].大连工业大学生物与食品工程学院学报，2010，36（3）：148-150.

[6]邓义德，指导：梁晓原.乙醇对超临界CO2萃取云厚朴总酚影响的研究[J].云南中医学院学报，2008，31（4）：31-34.

[7]邓义德，刘海周，曹玮娟，等.云厚朴两种提取方法的比较研究[J].云南中医学院学报，2009，32（2）：32-38.

[8]唐忠志，唐瑛.丹参对自发性高血压大鼠左心室心肌病变及血液流变学的影响[J].第四军医大学学报，2004，25（2）：9-12.

[9]夏华鑫，刘梅，张志敏.丹参水溶性成分体外抗氧化活性研究[J].中华中医药学刊，2009，27（5）：1086-1087.

（收稿日期：2014-02-12）endprint

1.2材料云厚朴药材购于昆明菊花村中药材市场，经云南中医学院杨树德教授鉴定为木兰科植物滇缅厚朴（MagnoliarostrataW.W.Smith）的干燥干皮；丽江产大紫丹参购于丽江，会泽产大紫丹参购于会泽，两个产地的大紫丹参经云南中医学院杨树德教授鉴定为甘西鼠尾草（SalviaprzewalskiiMaxim.var.mandarinorum（Diels）Stibal）的干燥根。

DPPH·（BR.）（上海凯洋生物技术有限公司）；无水乙醇（AR.）（天津大茂化学试剂厂）；厚朴酚对照品购于中国药品生物制品检定所（批号：110729-200411）；芦丁（自制）。

2方法与结果

2.1云厚朴提取物的制备及含量测定

2.1.1标准曲线的制备精密称取厚朴酚对照品3.0mg，置50mL容量瓶中，用无水乙醇溶解，定容，得浓度为60μg/mL的对照品溶液。精密量取厚朴酚对照品溶液1、2、3、4、5、6mL，分别置于10mL容量瓶中，用无水乙醇定容，在293nm处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，得标准曲线为A=0.03414c+0.01765（R2=0.9996）。

2.1.2云厚朴提取物的制备云厚朴SFE-CO2萃取物的制备：取云厚朴药材适量，粉碎过10目筛备用。按萃取压力30MPa，萃取温度45℃，分离压力7MPa，分离温度35℃，85%乙醇为夹带剂，CO2为20L/h，提取时间2.5h条件下进行萃取[6]。萃取液稀释3倍，测定吸光度，按标准曲线法进行计算，得出该萃取液的总酚含量为46μg/mL。

云厚朴乙醇提取物的制备：取云厚朴药材适量，粉碎过10目筛，加80%乙醇加热回流提取2次，提取时间依次为1.5、1h，溶媒用量依次为10倍量，8倍量。合并滤液，回收乙醇，氯仿萃取，旋干，无水乙醇定容[7]，测定吸光度，得出该提取液的总酚含量为49μg/mL。

2.2大紫丹参水提取物的制备取大紫丹参（丽江产、会泽产）适量，粉碎过40目筛，加蒸馏水回流提取2次，提取时间依次为1.5、1h，溶媒用量依次为15倍量、20倍量。合并滤液，得大紫丹参水提取液。

2.3DPPH·溶液的制备精密称取DPPH·26.1mg，无水乙醇为溶剂，超声溶解后，定容至100mL，配制成浓度261μg/mL的储备液，密封于冰箱存放，用时将储备液稀释。

2.4芦丁溶液的制备精密称取芦丁4.7mg，无水乙醇为溶剂，超声溶解后，定容至100mL，配制成浓度47μg/mL的储备液，密封于冰箱存放，用时将储备液稀释。

2.5波长-吸光度之间的关系扫描DPPH·无水乙醇溶液，考察其紫外吸收情况，测定结果显示，在无水乙醇介质中，DPPH·的最大吸收在516nm附近，与文献报道一致，故选择测定波长为516nm。

2.6DPPH·溶液显色稳定性考察精密吸取DPPH·溶液1.0mL置10mL量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，放置0.5、1、1.5、2h，以无水乙醇为空白对照，在516nm处测定吸光度，发现放置1h内，DPPH·溶液吸光度基本不变。

精密吸取DPPH·溶液1.0mL置10mL量瓶中，加入样品，用无水乙醇定容至刻度，放置0.5、1、1.5、2h，以无水乙醇为空白对照，在516nm处测定吸光度，发现吸光度随时间增长呈线性降低，但30min后，吸光度的变化已经很小，故确定反应30min后，迅速测定吸光度，保证在5min内测完。

2.7DPPH·溶液浓度-吸光度之间的关系精确吸取DPPH·溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL置10mL量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，放置30s后，以无水乙醇为空白对照，在516nm处测定吸光度，以吸光度A为纵坐标，DPPH·浓度为横坐标进行线性回归分析，得出线性方程为A=0.5825c-0.0023（R2=0.9991）。说明DPPH·浓度与吸光度之间有线性关系，可据此了解加入样品反应后剩余DPPH·的含量。

2.8测定方法精密吸取1mLDPPH·溶液，加入一定量的提取液，定容至10mL，放置30min，测定吸光度，实验设置3个平行组，取平均值计算。以芦丁溶液的抗氧化实验与提取液进行比较，以下式计算清除率：

清除率%=（1-AiA0）×100%

A0：1mLDPPH·溶液定容为10mL的吸光度平均值

Ai：1mLDPPH·溶液加入提取液定容为10mL的吸光度平均值

清除率越大，抗氧化活性越高。将清除50%DPPH·所需样品量定义为C50，C50越小，抗氧化能力越强。

2.9测定结果按2.8项的方法进行测定，云厚朴SFE-CO2萃取液、云厚朴乙醇提取液、芦丁溶液清除DPPH·实验结果见图1。

图1云厚朴SFE-CO2萃取液、乙醇提取液、

芦丁溶液清除DPPH·曲线

由图计算出：C50（云厚朴SFE-CO2萃取液）=4.83μg/mL，C50（云厚朴乙醇提取液）=4.17μg/mL，C50（芦丁）=4.70μg/mL。

按2.8项的方法进行测定，丽江产大紫丹参、会泽产大紫丹参清除DPPH·实验结果见图2。

图2大紫丹参（丽江、会泽）水提取液清除DPPH·曲线

由图可见，尚未达到C50时，曲线就趋于平缓。

3小结与讨论

云厚朴SFE-CO2萃取液清除DPPH·的作用与芦丁相当，云厚朴乙醇提取液清除DPPH·的作用强于SFE-CO2提取液，可能是由于乙醇提取液总酚含量较高。酚类化合物抗氧化的活性，主要是由于它们的还原特性，这种还原特性在中性自由基消除单线态和三线态氧或是分解过氧化物中具有重要作用。厚朴酚与和厚朴酚清除DPPH·的作用机理已有初步研究[3]，但云厚朴提取液的清除机理与纯品溶液是否一致，其机理如何尚有待进一步研究。

大紫丹参水提取液清除DPPH·的作用较弱，还没有达到C50，曲线就趋于平缓。丽江产大紫丹参与会泽产大紫丹参清除DPPH·的作用没有明显区别。丹参及其制剂治疗心脑血管疾病的作用与其提取物具有抗氧化活性有关，通过抑制自由基的产生从而保护心脏免受伤害[8]。夏华鑫等研究认为丹参水提取液中，丹酚酸B的抗氧化作用最强，丹酚酸B可能是丹参通过清除氧自由基治疗心血管疾病的重要活性成分[9]。大紫丹参的抗氧化活性有待进一步研究。

参考文献：

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S]（一部）.北京：中国医药科技出版社，2010﹕235-237.

[2]高学敏.中药学[M].北京：中国中医药出版社，2007：206-210.

[3]保志娟，杨雪琼，邹永明，等.厚朴酚与和厚朴酚清除DPPH·的作用[J].云南大学学报（自然科学版），2005，27（1）：60-63.

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[5]勾明玥，刘梁，张春枝.采用DPPH法测定26种植物的抗氧化活性[J].大连工业大学生物与食品工程学院学报，2010，36（3）：148-150.

[6]邓义德，指导：梁晓原.乙醇对超临界CO2萃取云厚朴总酚影响的研究[J].云南中医学院学报，2008，31（4）：31-34.

[7]邓义德，刘海周，曹玮娟，等.云厚朴两种提取方法的比较研究[J].云南中医学院学报，2009，32（2）：32-38.

[8]唐忠志，唐瑛.丹参对自发性高血压大鼠左心室心肌病变及血液流变学的影响[J].第四军医大学学报，2004，25（2）：9-12.

[9]夏华鑫，刘梅，张志敏.丹参水溶性成分体外抗氧化活性研究[J].中华中医药学刊，2009，27（5）：1086-1087.

（收稿日期：2014-02-12）endprint