HPLC法测定首乌延寿片中大黄素的含量

2014-09-19

中国民族民间医药 2014年23期

河南省桐柏县油田双河医院，河南桐柏 474780

HPLC法测定首乌延寿片中大黄素的含量

吴红

河南省桐柏县油田双河医院，河南桐柏 474780

目的：建立高效液相色谱法测定首乌延寿片中大黄素含量的方法。方法：采用Ulitimate 3000检测，安捷伦反相C18柱(250mm×4.6mm)，流动相:甲醇-0.2%磷酸溶液(82:18)；流速：1ml/min；检测波长:254nm；柱温：25℃。结果：在0.03736～0.5136μg/ml的检测范围内，对照品的浓度与峰面积积分值呈良好的线性关系，回归方程Y=3887X-1687(r=0.9997)，方法学考察符合要求。结论：本方法简便、准确、重复性好，可用于该制剂的质量控制和评价。

HPLC;首乌延寿片；大黄素；含量测定

首乌延寿片为制何首乌的单味浸膏片剂，具有补肝肾、养精血的功效[1]，主要用于肝肾两虚，精血不足而致的头晕目眩、耳鸣健忘、腰膝酸软等症。此药物在现行《卫生部药品标准》中并无含量测定标准。已有文献报道对制何首乌中的2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷进行测定[2]。大黄素作为其主要成分之一，目前在此类物质中没有相关报道，故提出建立高效液相色谱法测定首乌延寿片中大黄素含量测定的方法，以期为此药物的含量测定、质量控制提供一定参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器梅特勒XS-105型型电子分析天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)；Synergy UV型超纯水仪(密理博(上海)贸易有限公司)；DZF-6050型真空干燥箱(上海一恒科技有限公司)； Dionex UltiMate3000型液相色谱仪(Dionex(中国)有限公司)。

1.2 试药大黄素对照品(批号：20140308-20140708，国家药品生物制品检定所)；首乌延寿片(批号：130702、130308、130401);甲醇为色谱纯;水为超纯水;其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 对照品和供试品制备

2.1.1 对照品溶液的制备取大黄素对照品，精密称定10.15mg，置100ml容量瓶中，加甲醇置刻度，摇匀后精密量取5ml置25ml量瓶中，加甲醇稀释置刻度，摇匀，同法稀释若干次即得(每1ml含大黄素21.38μg)。

2.1.2 供试品溶液的制备取本品1.50g，精密称定，转移置具塞锥形瓶中，用50ml移液管转移甲醇50ml，称重，置水浴中加热回流3h，放置室温后，再称定重量，补足失重，摇匀，滤过，精密吸取续滤液5.0 ml，于50ml圆底烧瓶中，加盐酸溶液(1→10)10ml，加两倍体积氯仿，置水浴中加热回流1h，放置至室温，分液漏斗萃取若干次，取氯仿层，酸液再用氯仿提取2次，每次加两倍体积氯仿，合并氯仿液，以无水硫酸钠2g脱水，再用少量的氯仿洗涤容器及滤器，洗液并入氯仿液中，挥去氯仿，残渣用甲醇溶解并定量转移至25ml容量瓶中，补足甲醇至刻度，摇匀后用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，做供试品溶液。

2.2 色谱条件采用安捷伦反相C18柱；流动相：甲醇-0.2%磷酸溶液(82∶18)；流速：1.0ml/min；检测波长： 254nm；柱温：25℃。理论板数符合标准，且主峰分离明显，分离度R>1.5。见图谱1。

2.3 系统适应性试验

2.3.1 线性关系考察将上述大黄素对照品溶液按一定比例稀释，共得不同浓度对照品五份，按上述色谱条件分别进样测定，纵坐标为峰面积，横坐标为大黄素的浓度(μg/ml)，绘制标准曲线，得回归方程为：Y=3887X-1687(r=0.9997)。结果表明在0.03736～0.5136μg范围内，线性关系良好。

2.3.2 方法学考察根据药典标准以及本品供试品制备过程，得到精密度RSD为0.56%，重复性RSD为1.69%，12h的稳定性RSD为0.54%，且阴性对照实验显示其他成分对本方法测定大黄素的含量无干扰。结果提示，此方法符合要求。

2.3.3 加样回收率试验参考“2.1.2”，取供试品1.5 g，精密称定，按照高中低浓度加入大黄素对照品溶液，依法测定，计算回收率。结果见表1。