吉林省不同产地五味子中木质素类成分含量的差异性

张红岩，王中汉，韩大庆，唐 岩

(1.吉林省中医药科学院，长春130012;2.中南大学湘雅医学院，长沙410013)

吉林省不同产地五味子中木质素类成分含量的差异性

张红岩1，王中汉2，韩大庆1，唐 岩1

(1.吉林省中医药科学院，长春130012;2.中南大学湘雅医学院，长沙410013)

目的 比较不同产地五味子中木质素类成分含量差异性，探讨其与产地相关性，为确定我省五味子道地药材的主产区及规范化种植基地的药材品质评价提供依据。方法 采集吉林省不同产地五味子药材，采用高效液相色谱法，色谱柱为Apollo-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相为乙腈(A)-水(B)，梯度洗脱(0～15 min，50% ～60%A;15～50 min，60% ～75%A);检测波长为220 nm;流速为1.0 mL/min;柱温为30℃，分别测定其中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素含量。结果 五味子药材中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素含量在产地间差异性显著。结论 初步选择旺起镇、万良镇、松江镇、长白镇、泉阳镇为五味子品质优良产地。

五味子;木质素;质量控制;高效液相色谱法

本实验以吉林省五味子药材产地为研究重点，选择9个不同产地药材为研究对象，研究建立五味子药材中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素3种成分HPLC测定法，同时采用该方法测定不同产地五味子中3种木脂素成分的含量，并对不同产地间五味子木质素类成分含量差异性进行了分析研究，以期选出优质药材产地及建立五味子药材中木脂素类成分含量测定方法，为五味子药材的质量控制提供依据［1-4］。

1 仪器与试药

LC-10AT型高效液相色谱仪(日本岛津);SPD-10Avp紫外检测器(日本岛津);LC solution色谱工作站;XS-105梅特勒-托利多电子分析天平(梅特勒-托利多上海仪器有限公司);KQ-250超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。五味子甲素对照品(批号:110764-200408)、五味子乙素对照品(批号:110765-200609)、五味子醇甲对照品(批号:110857-200709)均购自中国药品生物制品检定所。五味子药材(分别采自吉林省内9个不同产地:二道白河镇、松江镇、旺起镇、丰满区胜利村、柳洞林场、长白镇、万良镇、泉阳镇、囉江乡)。甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适应性试验 色谱柱为Apollo-C18柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm);流动相为乙腈(A)-水(B)，梯度洗脱(0 ～15 min，50% ～60%A;15～50 min，60% ～75%A);波长为 220 nm;流速为1.0 mL/min;柱温为30℃;进样量为10 μL。在此条件下，样品中五味子醇甲、甲素、乙素峰和其他组分色谱峰可达基线分离，理论塔板数按五味子醇甲计算不低于4 000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 分别精密称取五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素对照品适量，加甲醇溶解制成每1 mL各含0.1，0.04，0.06 mg的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液 取五味子药材粉末0.5 g，精密称定，置25 mL量瓶中，加甲醇20 mL，超声处理(功率250 W，频率40 kHz)40 min，取出，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系考察 分别精密称取五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素对照品适量，加甲醇溶解制成每1mL各含0.2，0.048，0.12 mg的溶液，作为对照品储备液。精密量取上述对照品储备液各1，2，3，4，5 mL，分别置5 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为系列对照品溶液。精密吸取上述系列对照品溶液各10 μL。注入液相色谱仪，依法测定。以对照品进样量(μg)为横坐标X，峰面积(A)为纵坐标Y，绘制标准曲线，得回归方程。五味子醇甲:Y=6 628 959.67X+220 612.7，r=0.999 6;五味子甲素:Y=6 419 208.96X+65 981.2，r=0.999 6;五味子乙素:Y=6 292 839.40X+95 274.0，r=0.999 6。结果表明:五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素分别在0.399 2～1.996 2，0.160 8 ～0.804 0，0.241 6 ～1.248 0 μg 范围内，对照品溶液进样量与峰面积呈良好的线性关系。

2.3.2 稳定性试验 取供试品溶液于室温放置，精密吸取同一供试品溶液各 10 μL，分别于 0，2，4，8，16，24 h依法测定，记录峰面积。结果:五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素峰面积RSD分别为0.3%、0.2%、0.6%，表明供试品溶液在24 h内均较稳定。

2.3.3 精密度试验 精密量取“2.2.1”项下混合对照品溶液10 μL，按2.1项下色谱条件进行检测，连续进样6次，记录峰面积。结果，五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素峰面积 RSD分别为0.35%、0.32%、1.19%，表明仪器精密度良好。

2.3.4 重复性试验 取同批次药材粉末6分，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件进行检测。结果:五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素含量的RSD分别为1.2%、1.07%、1.74%，表明该方法的重复性良好。

2.3.5 加样回收率实验 取已知含量的五味子药材粉末(二道白河镇样品，五味子醇甲含量4.1 mg/g、五味子甲素含量1.2 mg/g、五味子乙素含量2.1 mg/g)6分，每分0.25 g，精密称定，分别加入上述3种对照品混合溶液(五味子醇甲含量0.997 mg/mL、五味子甲素含量0.31 mg/mL、五味子乙素含量0.531 mg/mL)1 mL，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件进行检测，计算回收率。结果，五味子醇甲平均回收率为99.19%，RSD为1.6%(n=9);五味子甲素的平均回收率为98.56%，RSD为1.5%(n=9);五味子乙素的平均回收率为99.31%，RSD为1.9%(n=9)。

2.3.6 样品含量测定 取“2.2.1”和“2.2.2”项下对照品溶液和供试品溶液依法测定，结果:吉林省不同产地五味子药材3种木质素类成分含量，以五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素3种成分总和作为总木质素含量，结果见表1。

表1 吉林省不同产地五味子药材中木质素含量测定结果%

3 小结

3.1 色谱条件筛选 文献记载检测波长为250 nm或220 nm，笔者分别在上述2个检测波长下进行了色谱条件筛选:在检测波长为250 nm下，分别采用Agilent-ZORBAX SB(150 × 4.6 mm，5 μm)、Diamonsil-C18柱(250 ×4.6 mm，5 μm)和 Apollo-C18柱(250 ×4.6 mm，5 μm)色谱柱和甲醇-水、甲醇-乙腈(3∶2)-水和乙腈-水梯度洗脱系统来分离测定3种成分，结果:五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素3种成分的分离度和重复性均不理想;在检测波长为220 nm下，采用 Apollo-C18(250×4.6 mm，5 μm)色谱柱和甲醇-乙腈(3∶2)-水及乙腈-水梯度洗脱系统来分离测定3种成分，结果表明，与250 nm比较，采用乙腈-水流动相进行梯度洗脱，灵敏度提高2～3倍，五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素3种成分均达到基线分离，重复性好。

3.2 提取溶剂的选择 选择甲醇、乙醇及80%甲醇3种不同溶剂，分别采用超声提取法提取，按2.1项下色谱条件测定五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素含量。结果:以甲醇作为提取溶剂，样品中3种成分含量为最高，故最终选用甲醇作为提取溶剂。

3.3 提取方法的选择 分别比较了超声提取40 min、放置30 min超声提取40 min及回流提取40 min 3种提取方法，结果3种提取方法提取五味子药材中木脂素类成分含量相近，实验结果与文献报道一致，故采用甲醇超声制备供试品溶液，方法最简便易行。

3.4 不同产地五味子药材中木质素类成分含量差异性及与产地相关性 实验结果表明，吉林省9个不同产地五味子药材中3种木质素成分含量存在很大差异性，并且无相关性，五味子醇甲含量0.4～0.63%，旺起镇含量最高0.63%，二道白河镇含量最低0.4%，变异值 57%;五味子甲素含量 0.07% ～0.16%，旺起镇含量最高0.16%，囉江乡含量最低0.07%，变异值128%;五味子乙素含量0.2% ～0.27%，旺起镇、丰满区胜利村含量最高0.27%，二道白河镇含量最低0.2%，变异值29%;木质素总和含量0.72% ～1.06%，旺起镇含量最高1.06%，二道白河镇含量最低0.72%，变异值45%，差异性大小顺序为:五味子甲素＞五味子醇甲＞五味子乙素，其中含量差异性最大的五味子甲素高低相差1倍以上。

本试验建立了五味子药材中3种木质素类有效成分的高效液相色谱测定方法，即在同一供试品条件下同时测定3种成分，具有准确、重复性好等特点，可用于五味子药材的质量控制［5-9］。

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Differences of the contents of lignans inSchisandra chinesisfrom different habitats in Jilin

ZHANG Hongyan1，WANG Zhonghan2，HAN Daqing1，TANG Yan1
(1.Jilin Academy of Traditional Chinese Medicine and Material Medical Sciences，Changchun 130012，China;2.Xiangya School of Medicine，Central South University，Changsha 410013，China)

Abstract:ObjectiveComparative studies on differences of the contents of lignans inSchisandra chinesisfrom different habitats，and exploring the correlation among habitats in order to provide the basis for determining the main producing areas of famous-region drug ofSchisandra chinesisand the quality evaluation of medicinal materials of the normalized planting base in our province.MethodsThe contents of schisandrin，deoxyschizandrin and schisandrin B inSchisandra chinesiscollected from different habitats in Jilin were determined by RP-HPLC，respectively.Using Apollo-C18column(250 ×4.6 mm，5 μm);Acetonitrile(A)-water(B)was used as gradient mobile phase(0 ～15 min，50%-60%A;15 ～50min，60%-75%A).The detection wavelength was 220 nm，the flow rate was 1.0 mL/min and the column temperature was 30 ℃.ResultsThe contents of schisandrin，deoxyschizandrin and schisandrin B inSchisandra chinesiswere different significantly among habitats.ConclusionsPreliminary experiments showed that the town of Wangqi，Wanliang，Songjiang，Changbai and Quanyang were selected as the good quality habitats ofSchisandra chinesis.

Key words:Schisandra chinesis;Lignans;quality control;HPLC

R284.1

A

2095－6258(2014)04－0606－03

10.13463/j.cnki.cczyy.2014.04.016

吉林省中医药管理局资助项目(2011-zd13)。

张红岩(1964－)，男，主任药师。研究方向:中药化学成分、质量及中药新药开发。

(

2014－04－30)