小檗碱含量测定方法的研究进展

蒋红艳，杨元娟，刘晓颖，邓庆华，顾群

（重庆医药高等专科学校 药学院，重庆 400030）

小檗碱含量测定方法的研究进展

蒋红艳，杨元娟Δ，刘晓颖，邓庆华，顾群

（重庆医药高等专科学校 药学院，重庆 400030）

小檗碱是中药黄连中的主要有效成分，测定小檗碱含量可以为其质量评价提供依据。通过查阅相关专业文献，对测定小檗碱含量的方法进行了归纳，主要有薄层扫描法（thin layer chromatography，TLC）、紫外分光光度法（ultraviolet specterphotometry，UV）、高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）、高效毛细管电泳法（high performance capillary electrophoresis，HPEC）和荧光法等。其中高效液相色谱法分离效率高，专属性好，灵敏度高，在质量控制中应用较广泛。

小檗碱；薄层扫描法；紫外分光光度法；高效液相色谱法；高效毛细管电泳法；荧光法

2 紫外分光光度法

紫外分光光度法（ultraviolet specterphotometry，UV）灵敏度高、实验操作简单，易于普及。徐宁［5］测定黄柏中盐酸小檗碱含量，检测波长λ＝420 nm。结果显示：盐酸小檗碱浓度在2.0～10.0mg／mL与吸光度线性关系良好，平均回收率为97.62%，RSD＝2.90%（n＝5）。匡菊香等［6］测定了自制的苦柏痔瘘栓中小檗碱含量。以盐酸小檗碱为对照品，在420 nm处测定其吸收度，绘制标准曲线。取3批自制的复方苦柏痔瘘栓样品，制备样品溶液，按拟定的实验方法测定、记录、计算。3批栓剂中小檗碱平均含量分别为 26.078mg／g，27.479mg／g，26.851mg／g，且 RSD＝2.6%（n＝3），说明制剂工艺和检测方法比较稳定。罗国平等［7］采用V-160A型紫外可见分光光度计测定了自制的小陷胸颗粒中盐酸小檗碱的含量，检测波长为345 nm，结果表明，在此波长处，盐酸小檗碱质量浓度在2～10μg／mL范围内与吸光度线性关系良好。王丽峰等［8］采用紫外可见分光光度计测定自制的盐酸小檗碱鼻用凝胶中小檗碱的含量，检测波长为344 nm，结果表明盐酸小檗碱在1.96～15.68μg／mL范围内呈良好线性关系。

3 高效液相色谱法

因其具有高效、灵敏、快速等优点，高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）广泛应用于各个科学领域［9］。黄燕萍［10］测定炎可宁片中盐酸小檗碱的含量，色谱柱为shimpack VP-ODS（4.6mm×250mm，5μm）；流动相为甲醇 －乙腈－0.1%磷酸溶液（三乙胺 pH 3.0），梯度洗脱；流速为0.8m L／min，检测波长为265 nm。结果显示，盐酸小檗碱的线性范围为 3.838～115.1 mg／L（r＝0.9998），方法回收率均为101.29%，RSD为2.34。测定小檗碱含量常用的色谱条件见表 1、表 2。

表1 以乙腈－磷酸系统为流动相的色谱条件Tab.1 Acetonitrile-phosphoric acid system

表2 以甲醇－水系统为流动相的色谱条件Tab.2 Methanol-water system

4 高效毛细管电泳法

高效毛细管电泳法（high performance capillary electrophoresis，HPEC）具有高效、快速，操作简便，毛细管柱不易被污染等优点，可用于药品中小檗碱的质量控制。蔡梅超等［22］测定黄柏不同部位中盐酸小檗碱的含量，电泳条件如下，缓冲液为50mmol／L硼砂（醋酸调 pH＝7.0）－甲醇（85∶15）；毛细管（内径75μm，长度57 cm，有效长度50 cm）为分离通道，压力进样，温度为25℃，分离电压为14 kV，检测波长为254 nm，小檗碱为内标。结果显示，盐酸小檗碱在0.03328～0.1664 g／L之间线性良好，r＝0.99973，样品回收率为98.79%，RSD为1.93%。黄玉芝等［23］利用毛细管区带电泳法，采用熔融石英毛细管柱（47 cm×75μm），有效长度40 cm，缓冲溶液为pH 3.0的60mmol／L磷酸盐溶液－甲醇（65∶35），分离电压为30 kV，进样时间为5 s，毛细管柱温为25℃，紫外检测波长为200 nm，建立了测定清胃黄连丸中盐酸小檗碱含量的高效毛细管电泳法。房娟娟等［24］采用毛细管电泳法测定清胃黄连丸、黄连上清丸、清热化毒丸、一清软胶囊等含黄连成药中盐酸小檗碱的含量，电泳条件如下：缓冲液为60mmol／L磷酸二氢钠∶甲醇（65∶35），用磷酸调pH值为3.5；分离电压30 kV，检测波长为200 nm。毛细管电泳法测定含黄连成药中盐酸小檗碱含快速、准确、经济。王晓可等［25］采用用未涂层弹性融硅石英毛细管柱毛细管（60 cm×75μm ID，有效长度52 cm），缓冲液为0.2mol／L磷酸二氢钠溶液＋无水乙醇（50∶50，pH5.5），分离电压为21 kV，重力进样10 s，检测波长为265 nm，建立了测定栀子金花丸中盐酸小檗碱含量的毛细管电泳法。

5 荧光法

荧光分光光度法具有设备简单，操作方便的特点，可用于药品中小檗碱的质量控制。施群等［26］测定了盐酸小檗碱片中小檗碱的含量，条件如下，激发波长Ex＝365 nm，发射波长Em＝409 nm。

6 小结

目前，检测小檗碱含量已有较为成熟的测量方法，如薄层扫描法、紫外分光光度法、高效液相色谱法、高效毛细管电泳法等，由于高效液相色谱法具有高效、灵敏、快速等优点，其应用最为广泛。而高效毛细管电泳既可结合质谱技术建立复方制剂的指纹图谱又可进行多种有效成分的定量分析，还可用于体内药物分析开展有效成分研究，在分析药用植物成分的领域具有较广的发展前景。因此，在检测不同药品中的小檗碱含量时，可根据检测的要求采取适宜的方法，达到简便、快速、准确、灵敏的分析目的。

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（编校：吴茜）

Research on the progress of Berberine determ ination

JIANG Hong-yan，YANG Yuan-juanΔ，LIU Xiao-ying，DENG Qing-hua，GU Qun

（College of Pharmacy，Pharmacy of Chongqing Medical and，Chongqing 400030，China）

Berberine is the main active ingredients in Coptis.The content determination of berberine can provide the basis for its quality evaluation.Relevant provessinal literatures about determination methods of berberine were summarized，and the main methods included TLC，UV，HPLC，HPEC，fluorescence，and so on.HPLC was themostwidely used method because of its high separation efficiency，specificity and sensitivity.

Berberine；thin layer chromatography；ultraviolet specterphotometry；high performance liquid chromatography；high performance capillary electrophoresis；fluorescence

TN248.1

A

1005－1678（2014）03－0178－03

小檗碱（Berberine，Ber.）是一种异喹啉类生物碱，主要存在于小檗科等4科10属的植物中。小檗碱的抗菌谱广，对多种革兰阳性菌和革兰阴性菌有抑制作用，对阿米巴原虫也有抑制作用。临床上主要用于治疗细菌性痢疾、胃肠炎等［1］。本文对小檗碱的含量测定方法进行了综述，以期为其质量评价提供理论依据。

1 薄层扫描法

薄层扫描法（thin layer chromatography，TLC）方法简便快速，试验结果灵敏准确，专属性好。张剑等［2］测定了肝毒清胶囊中小檗碱含量，薄层色谱条件及扫描条件如下，薄层板为硅胶G板，厚500μm，粘合剂为0.5%的羧甲基纤维素钠溶液；展开剂为正丁醇∶乙酸∶水（7∶1∶5）；检测波长λ＝366 nm。彭小冰等［3］采用薄层扫描法测定栀子柏皮汤不同剂型中盐酸小檗碱的含量，在实验过程中考查了多种色谱条件，分别有正丁醇∶冰醋酸∶水（7∶1∶2，5∶1∶1，6∶6∶10，7∶3∶3），苯 －乙酸乙酯－异丙醇－甲醇－浓氨水（6∶3∶1.5∶1.5∶0.5），但都具有拖尾现象，而苯－乙酸乙酯 －异丙醇 －甲醇－水（6∶3∶1.5∶1.5∶0.3）展开色谱条件最好。确定的最佳色谱条件为：硅胶G薄层预制板（100mm×200mm），苯－醋酸乙酯－甲醇－异丙醇－水（6∶3∶1.5∶1.5∶0.3）为展开条件，于氨蒸气和展开剂等体积饱和层析缸内展开，取出，晾干，扫描波长340 nm，狭缝0.4mm×0.4mm。雷岚芬等［4］采用薄层扫描法测定二妙汤中盐酸小檗碱的含量，展开剂为苯－乙酸乙酯－异丙醇－甲醇－浓氨溶液（12∶6∶3∶3∶1），放置于用氨蒸气与展开剂同时预饱和15min的展开缸内，展开，取出，晾 干，进行荧光扫描，激发波长为365 nm。用薄层扫描法方法测定小檗碱含量准确、可靠。

重庆市教委立项课题（KJ102501）；重庆市卫生局立项课题（2012-1-093）；重庆市卫生局中医科研立项课题（2012-2-17）

蒋红艳，女，副教授，硕士，研究方向：中药药理学，E-mail：jianghy200568＠126.com；杨元娟，通信作者，女，教授，硕士，研究方向：天然药物，E-mail：yang_1889＠sina.com。