RECK与MMP-2在口腔扁平苔藓的表达及意义

李 磊 周晓清 徐晓楠 孔大军 袁昌清

(1青岛大学口腔医学院 山东 青岛 266002，2济宁医学院附属济宁市第一人民医院，山东 济宁 272011)

口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)是口腔黏膜的一种慢性炎症性损害，发病率2%左右[1]，癌变率0.4%～3.3%[2]， 其主要病理学特点是基底膜破坏，此破坏过程由基质金属蛋白酶(MMPs)家族控制。抑癌基因 RECK(reversion-inducing cysteine-rich protein with kazal motifs)能在转录水平抑制各类MMP的生物活性[3]。本文采用Western blot印迹检测OLP中RECK及MMP-2蛋白的表达，探讨其在OLP发生及癌变过程中的作用。

1 资料和方法

1.1 临床资料

选取济宁医学院附属济宁市第一医院口腔科 2010年至2013 年门诊就诊的27 例疑似后经病理确诊的OLP患者，切取活检组织分2份，1份常规石蜡切片明确诊断，另1份立即放入液氮中，-80°冰箱保存。以 17 例正常口腔黏膜组织(来源于外伤患者)、24例口腔鳞癌组织作对照。

1.2 方法

1.2.1Western blot检测各组RECK及MMP-2的表达率 取出新鲜冷冻组织剪切成细小的碎片，按照每20mg组织加入150μl含1%PMSF的裂解液,置于冰上充分裂解后12000g离心15min,取上清，BCA法测定蛋白浓度,总蛋白加入1/4体积的上样缓冲液后，金属浴10 min，上样量均40 μg ，SDS-PAGE电泳蛋白质电泳分离后，电转移槽转移至PVDF膜， 5%的脱脂牛奶封闭PVDF膜1 h， 稀释RECK或MMP-2多克隆鼠抗人抗体4 ℃过夜，回收一抗后使用0.5% TBST室温下摇床上洗3次，每次10 min，将二抗用TBST稀释5000倍室温下孵育60 min后， TBST在室温下摇床上洗3次，每次10 min ，加入化学发光剂ECL显色， 凝胶成像系统摄像。

1.2.2结果判定 以内参GAPDH为参照，如GAPDH能正常显影，目标条带出现则为阳性(+)，无目标条带则为阴性(-)。

1.3 统计学方法

采用SPSS13.0统计软件进行统计学处理。

2 结果

2.1 MMP-2在正常口腔黏膜、扁平苔藓和口腔鳞癌中的表达

MMP-2在正常口腔黏膜、扁平苔藓和鳞癌中的表达分别为11.8%、51.9%、91.7%。在鳞癌组织大多有表达，且表达一般较强(见图1)，MMP-2在扁平苔藓中的表达相对于口腔正常黏膜组织及口腔鳞癌，差异具有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2.2 RECK在正常口腔黏膜、扁平苔藓和口腔鳞癌中的表达

RECK在正常口腔黏膜、扁平苔藓和鳞癌中的表达分别为94.1%、40.7%、4.2%，且在鳞癌组织中的表达强度较弱(见图1)，经统计分析，RECK在扁平苔藓中的表达相对于口腔正常黏膜组织及口腔鳞癌，差别具有统计学意义(P<0.01)。见表2。

图1 口腔正常黏膜、口腔扁平苔藓及口腔鳞癌中RECK及MMP-2的蛋白表达

注：▲与正常组织组比较，χ2=9.702，P<0.05；■与鳞癌组织比较，χ2=26.176，P<0.01。

表2 RECK在正常口腔黏膜组织、扁平苔藓组织和鳞癌组织中的表达及阳性率比较

注：▲与正常组织组比较，χ2=9.446，P<0.05；■与鳞癌组织比较，χ2=33.174，P<0.01。

3 讨论

OLP是一种常累计皮肤或黏膜慢性炎性病损，临床表现多种多样，其病因和发病机制尚无定论，但免疫机制在其发病中的作用受到了广泛的重视和认可。Torti 等[4]研究发现抗原特异性机制和非抗原特异性机制作用的结果都可以导致基底膜的损伤。MMPs家族是一组锌离子依赖性内肽酶，其中基质金属蛋白酶(MMP-2，MMP-9)是唯一能降解ECM和IV型胶原的酶,MMP-2是一种非糖化的明胶酶，可特异性水解Ⅳ型胶原，在肿瘤的侵袭和转移中起着重要作用。Cai 等[5]报道 MMP-2 和 MMP-9 在扁平苔藓恶变中表达上调，且 MMP-2 的表达与扁平苔藓恶变相关。本文结果显示MMP-2在正常口腔黏膜、OLP、鳞癌组织的表达依次增加，故推测其在扁平苔藓致病中起到一定的作用。

抑癌基因RECK是Takahashi 等[3]发现的一种新型抑癌基因。大量研究表明[6-7]RECK具有金属蛋白酶抑制剂的功能，可以抑制多种基质金属蛋白酶的生物活性，从而抑制多种恶性肿瘤的局部侵袭力及远处转移力[8-9]。本文采用Western blot方法，检测到RECK蛋白在正常口腔黏膜、OLP、鳞癌组织中的表达依次降低，且差别具有统计学意义，说明RECK蛋白表达的降低，可能与OLP癌变有关系。本文为扁平苔藓癌变的预测提供了新的可能，有利于我们进一步了解口腔扁平苔藓的生物学行为。

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