颈动脉粥样硬化患者外周血Th17水平研究

朱太卿 张莉峰 袁学谦 肖悠美 张存玲 王慧贞 王焕荣 王爱丽

郑州人民医院神经内科 郑州 450003

随着老龄化社会的到来，心脑血管动脉粥样硬化（ather-osclerosis，AS）的发病率越来越高。Th17细胞是近年新发现的一个CD4+细胞亚群，并以分泌细胞因子白细胞介素17（Interleukin-17，IL-17）为主要特征。Th17细胞及其分泌的IL-17具有促进炎症发生、发展的作用。本研究旨在观察颈动脉粥样硬化患者外周血Th17细胞及IL-17的水平，进一步探讨Th17细胞及细胞因子IL-17在颈动脉粥样硬化发病中的作用。

1 对象和方法

1.1 对象 （1）颈动脉粥样硬化组：来自2012-01-2012-12郑州人民医院神经内科就诊的颈动脉硬化患者36例，男20例，女16例，平均年龄（52±14）岁；所有患者经颈动脉彩超检查确诊为颈动脉粥样硬化，所有患者近3个月未发生心脑血管病。近4周无感染性疾病，近3周未服用抗炎药或免疫抑制剂。无自身免疫性疾病或恶性肿瘤，并排除血液病、严重的心、肝、肾等疾病。（2）正常对照组：系同期我院健康体检者36例。经颈动脉彩色多普勒超声检查排除颈动脉粥样硬化，各项体检指标正常，无自身免疫性疾病。2组年龄、性别差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 Th17细胞检测 所有患者均于住院第2天抽取清晨空腹肘静脉血。用淋巴细胞分离液常规密度梯度离心法获取外周单个核细胞。显微镜下计数，调整上机细胞浓度为1×105～1×106个／mL。将细胞液分成2份，均为500μL，做好标记，随后分别加入FITC标记抗人CD4抗体（作为T淋巴细胞标记），混匀后室温下避光反应30min。离心PBS洗涤2次，加入固定液500μL室温避光固定反应30min。再次离心PBS洗涤2次，加入破膜剂500μL行细胞打孔，室温避光固定反应15min。离心弃上清液后测定管加入PE标记抗人IL-17抗体，同型对照管加入IgG1-PE，室温下避光反应30min，PBS洗涤2次后上流式细胞仪检测。8h内上机检测。采用Cellquest软件获取分析细胞。带有荧光标记的淋巴细胞（%）结果以阳性细胞百分率表示。

1.3 IL-17检测 应用酶联免疫吸附实验（ELISA法）法对颈动脉粥样硬化患者及正常对照组血浆中的IL-17进行检测，操作步骤按试剂盒说明。

1.4 统计学方法 采用SPSS 17.0统计软件，计量资料用均数±标准差（）表示。两个独立样本均数间的比较用成组t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

颈动脉粥样硬化患者组与正常对照组外周血Th17细胞及血浆IL-17水平比较见表1。结果显示，与正常对照组比较，Th17细胞数量显著升高（P＜0.01），血浆IL-17水平也同样显著升高 （P＜0.05）。

表1 2组Th17细胞及血浆IL-17比较 （）

表1 2组Th17细胞及血浆IL-17比较 （）

注：▲P＜0.01，△P＜0.05

组别 n Th17／CD4+（%） IL-17（pg／mL）患者组 36 1.78±0.39▲ 18.57±1.91△对照组36 0.74±0.25 12.32±1.54

3 讨论

随着现有生活方式的改变及社会精神压力的加大，动脉粥样硬化所致的心脑血管病的发病率越来越高，并呈现出年轻化趋势。关于动脉粥样硬化发病机制的学说很多，影响较大的有脂质浸润学说、动脉平滑肌细胞增殖学说、血栓形成学说等。随着研究的进展，炎症免疫学说逐渐被大多数人接受。许多研究表明免疫细胞及它们分泌的细胞因子组成的炎症介质在动脉粥样硬化的发生、发展中都起到了重要作用，其中效应T细胞发挥着关键作用［1-2］。依据分泌细胞因子不同，将效应性T细胞分为Th1和Th2两个亚群，研究表明Th1亚群及其分泌的细胞因子具有促动脉粥样硬化进展的作用，而Th2及其分泌的细胞因子具有延缓动脉粥样硬化的作用。

2005发现了效应T细胞一种新的亚群，并以分泌细胞因子白细胞介素17为主要特征，因此被命名为Th17细胞。实验证明，Th17细胞亚群在多种自身免疫性疾病中存在异常，Th17细胞在机体的炎症免疫反应中起着重要调节作用［3］。Gao［4］研究发现，有动脉粥样硬斑块形成的小鼠动物模型动脉血管壁的IL-17水平比对照组明显升高，且Th17细胞增加的程度与斑块大小呈正相关，而阻断IL-17发挥作用后可以延缓斑块的发展。Wang等［5］研究发现急性冠脉综合征患者的外周血中Th17细胞数量及IL-17、IL-8水平都比对照组有明显升高。一系列的研究证实Th17细胞及IL-17会促使动脉粥样硬化形成及导致其相关疾病的发生。

与上述研究结果类似，本实验中，颈动脉粥样硬化患者组外周血中的Th17细胞及血浆IL-17水平显著高于正常对照组，这说明Th17细胞及其分泌的IL-17参与了颈动脉粥样硬化的发病过程。关于Th17细胞及其分泌的细胞因子如何促进颈动脉动脉粥样硬化斑块的发展有待进一步研究。

［1］ Lundberg AM，Hansson GK.Innate immune signals in atherosclerosis［J］.Clin Immunol，2010，134（1）：5-24.

［2］ Andersson J，Libby P，Hansson GK.Adaptive immunity and atherosclerosis［J］.Clin Immunol，2010，134（1）：33-46.

［3］ 吴凤英，胡静 .脑梗死与颈动脉粥样硬化斑块及相关因素分析［J］.中国实用神经疾病杂志，2010，13（1）：26-28.

［4］ Gao Q，Jiang Y，Zhang L，et al.A critical function of Th17 proinflammatory cells in the development of atherosclerotic plaque in mice［J］.Immunol，2010，5 （10）：5 820-5 827.

［5］ Wang Z，Lee J，Zheng Q，et al.Increased Th17cells in coronary artery disease are associated with neutrophili inflammation［J］.Scand Cardiovasc，2011，45（6）：54-61.