灰树花菌丝体多糖的降血脂作用

， ，

(天津现代职业技术学院，天津 300350)

灰树花是担子菌亚门，多孔菌目，多孔菌科，树花属中的一种大型真菌，又名贝叶多孔菌、栗子蘑、佛菌等，是一种食、药兼用的珍稀食用菌。国内外大量灰树花药理药学科学研究证明，灰树花胞内胞外多糖具有显著的降血糖、抗肿瘤、抗HIV病毒、抗肝炎以及改善免疫系统功能等功效。而在降血脂方面只有袁德云等曾对其水溶性多糖进行过研究。本文对灰树花菌丝体进行了提取水溶性多糖进行小鼠的降血脂实验研究。

1材料与方法

1.1 材料

昆明种雄性健康小鼠,体重20 g左右；灰树花菌丝体干粉；高脂饲料(以质量分数计):小鼠基础饲料添加 1% 胆固醇、0% 蛋黄粉、0.2% 胆酸盐、10% 猪油、15% 蔗糖。

葡聚糖凝胶 Sephadex G200，北京欣经科生物技术公司；总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇试剂、高密度脂蛋白胆固醇，中生北控生物科技股份有限公司。

SP-2102PC分光光度计，上海光谱仪器有限公司；酶标仪(Fcc)。

1.2 方法

1.2.1 灰树花菌丝体多糖制备

取灰树花菌丝体干粉加蒸馏水，至菌丝体的质量分数为 60%，在冰水浴下超声波破壁 10 min，然后加水稀释到质量分数为 4%，水浴 6 h，80 ℃。上清液加3倍体积95%乙醇，12h，4℃。离心得到沉淀物Sevage法去蛋白，大孔树脂吸附超滤，冷冻干燥得到白色絮状物质水溶性多糖(灰树花菌丝体多糖) 。将样品(灰树花菌丝体) 配制成10 mg/mL 溶液，微孔过滤后上Sephadex G200柱层析(2×35)，超纯水洗脱，流速0.3 mL/min，1.5 mL/管分部收集，苯酚-硫酸法检测菌丝体多糖含量。

苯酚硫酸法的测定原理：利用多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物，再以比色法测定。已糖在490 nm处有最大吸收，吸收值与含量在一定范围内呈线性关系。

葡萄糖标准曲线制备：

葡萄糖溶液浓度为0.1%，按下表1-1配标准曲线待测液，添加顺序为先在试管中加葡萄糖溶液，再添加蒸馏水，5%苯酚，最后添加浓硫酸。在100℃水浴锅加热20分钟，冷却，利用分光光度计在490 nm处测定吸光度，根据葡萄糖浓度和对应吸光度绘出标准曲线(图1-1)，计算其标准曲线回归方程：Y=88.998x-0.4815(R2=0.999，n=7)

表1-1 葡萄糖标准曲线检测液配比

图1-1 葡萄糖标准曲线图

1.2.2 降血脂实验

高血脂动物模型的建立及实验分组：将30只小白鼠随机分为5组，每组6只，这5组分别是阴性对照组、高脂对照组、高剂量给药组、中剂量给药组、低剂量给药组。阴性对照组用普通饲料喂养，高脂对照组、高剂量给药组、中剂量给药组、低剂量给药组用高脂饲料喂养，经过14天的有效喂养后分析各组别小鼠血样，确定高血脂建模成功。接下来高脂对照组、高剂量给药组、中剂量给药组、低剂量给药组继续用高脂饲料，阴性对照组用普通饲料喂养。同时高剂量给药组、中剂量给药组、低剂量给药组，利用不同剂量的灰树花菌丝体多糖灌胃，高脂对照组、阴性对照组用生理盐水灌胃，见表1-1。再经过14 天后摘小鼠眼球取血,测定小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)。采用组间t检验法。

表 1-1 实验设计方案

2结果与分析

2.1 纯度鉴定

柱层析分析：葡聚糖凝胶层析，是使待分离物质通过葡聚糖凝胶层析柱，各个组分由于分子量不相同，在凝胶柱上受到的阻滞作用不同，而在层析柱中以不同的速度移动。分子量大的先流出来，分子量小的后流出来，最终可以分离出不同分子量的化学组分。葡聚糖凝聚层析具有稳定性好、吸附性小等优点。SephadexG200的分离范围5-60kDa。从图2-1可以看出，灰树花菌丝体多糖是一种分子量均一组分。

2.2 降血脂实验测定结果

如表2-1，灰树花菌丝体多糖 在中、高剂量给药下,具有较显著的调节小鼠血脂代谢的作用。高血脂症小鼠总胆固醇 (TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白胆固醇 (LDL-C)的指标明显降低，随着菌丝体多糖剂量的增加，高血脂症小鼠的总胆固醇 (TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白胆固醇 (LDL-C)的指标降低越明显。中剂量组中小鼠血清中总胆固醇(TC)与高脂对照组相比降低28.2%、甘油三脂(TG) 高脂对照组相比降低30.8%、低密度脂蛋白胆固醇 (LDL-C) 与高脂对照组相比53.0%，具有明显降低作用。中剂量组HDL-C/TC 值与高脂对照组相比升高9.9%，高剂量组HDL-C/TC 值与高脂对照组相比升高45.5%,都有显著升高作用。虽然高密度脂蛋白胆固醇 (HDL-C)变化不大，但是HDL-C：TC随着剂量的增加而增大，这个比值越大说明它的抗动脉能力越强。其中中剂量组(50 mg/kg·d)血脂各项指标最接近阴性对照组。

图3-6 菌丝体多糖Sephadex G200凝胶过滤图谱

组别cTC/(mmol L-1)cTG/ (mmol L-1)cHDL-C/ (mmol L-1)cLDL-C/ (mmol L-1)cHDL-C:cTC阴性对照4.28±0.341.87±0.211.63±0.211.65±0.140.376±0.011高脂对照8.13±0.942.66±0.332.45±0.143.13±0.230.312±0.034低剂量组7.54±0.652.66±0.242.24±0.322.23±0.40*0.311±0.023中剂量组5.84±0.82*1.84±0.45*2.21±0.331.47±0.19***0.343±0.065*高剂量组4.24±0.74**1.30±0.34***2.03±0.211.05±0.17***0.454±0.053**

注: 低、中、高剂量组：(25、50、100 mg/(kg·d)) 与阳性对照比较*P< 0. 05 ,**P< 0. 01***P< 0. 001.

3讨论

灰树花菌丝体多糖经过提取纯化，通过Sephadex G200凝胶柱层析，鉴定认为灰树花菌丝体多糖为均一组分。

灰树花菌丝体多糖之所以能调节血脂可能是由于多糖能够在加快肝胆循环，有效增强机体的免疫机制，使肝内生存的酮体和肝外组织所能利用的限度达到很好的一个平衡，从而降低了血脂在血液中的堆积。最终达到一种降血脂的作用。

参考文献：

[1]Kawagishi H, Nomura A, Mizuno T, et al. Isolation and characterization of a lectin from Grifola frondosa fruiting bodied[J]. Biochimica Et Biophysica Acta, 1990, 1034: 247-252.

[2]Suzuki I, Itani T, Ohno N, et al. Antitumor-activity of a polysaccharide fraction extracted from cultured fruiting bodied of Grifola frondosa[J]. Journal of Pharmacobio-dynam ,1984, 7: 492-500.

[3]Smith J E, Rowan N J, Sullivan R. Medicinal mushrooms: a rapidly developing area of biotechnology for cancer therapy and other bioactivities[J]. Biotechnology Letters, 2002, 24: 1839-1845.

[4]袁德云,章克昌.灰树花发酵液及其胞内纯化物的降血脂作用[J].中国药学杂志,2003,(07).