地骨皮中有效成分的提取及其降血糖调血脂作用研究

李春英，姜海霞，张晶，王洪波

(1.大庆医学高等专科学校，黑龙江大庆163312；2.大庆龙南医院)

地骨皮(Cortex Lycii)为枸杞的根皮，枸杞是茄科枸杞属的多分枝灌木植物，《本草纲目》记载：“春采枸杞叶，名天精草；夏采花，名长生草；秋采子，名枸杞子；冬采根，名地骨皮”。 多年来在中国民间被用于治疗肺炎、咳血、肢端坏疽及糖尿病等。本课题在建立高血糖、高脂大鼠模型的基础上，研究地骨皮对模型大鼠血糖、血脂的影响，旨在为研制降血糖、调血脂的天然药物提供理论依据。

1 材料与仪器

1.1 动物

采用清洁级大鼠。体重为180～220g，雄鼠。

1.2 饲料

基础饲料：高糖脂饲料：在刘浩[3]研究的基础上进行改进，为10%蔗糖、10%猪油、10%鸡蛋和70%基础饲料。

1.3 仪器及试剂

754分光光度计；SB2薄层色谱仪；胰岛素放射免疫分析仪；JPS-Ⅲ快速血糖测试仪；SS48DS1糖化血红蛋白仪；TL16G型高速冷冻离心机；TG、TC、HDL-C、LDL-C试剂盒；Dade Behring试剂等。

1.4 指标检测

空腹，断尾法采血测血糖、血脂各项指标。葡萄糖(GLU)、胰岛素(Ins)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇( LDL-C)、载脂蛋白A1(APO-A1)、载脂蛋白B(APO-B)等指标的检测。

2 方法

2.1 地骨皮总黄酮及牛磺酸的提取、分离及成分鉴定

2.1.1 总黄酮的提取、分离及成分鉴定：采用乙醇提取法，将地骨皮粗粉，经乙醇回流，过滤减压浓缩，得醇浸膏，加石灰水搅拌，得碱水液加酸，得粗品总黄酮，经乙醇重结晶，最后得总黄酮。并通过化学实验及薄层色谱法对其进行鉴别，分光光度法测定总黄酮含量。

2.1.2 牛磺酸的提取、分离及成分鉴定：将地骨皮粗粉加乙醇，加热回流，得醇溶液，回收乙醇得醇浸膏，用碳酸钠溶液调至pH 11.5，乙酸乙酯萃取得碱水液，盐酸调至pH 2.0，乙酸乙酯萃取，减压，回收乙酸乙酯，乙醇溶解，过滤，得乙醇液，然后上硅胶柱色谱分离，回收溶剂，干燥后，得牛黄散。并通过薄层色谱法鉴别，分光光度法测定牛磺酸含量。

2.2 降糖调脂机制研究

2.2.1 糖尿病模型建立及维持状态观察

清洁级Wistar大鼠100只，雄性，体重170±20g，在专用饲养笼中饲养，室温22℃，相对湿度65%，昼夜交替时间12h，自由摄食和饮水。适应环境1周后，将大鼠随机分成正常对照组(n=10)和实验组(n=90)。正常对照组饲以普通饲料，实验组饲以高脂饲料喂养4周后，腹腔注射链脲佐菌素(STZ)25mg/kg(溶于0.1mol/L枸橼酸缓冲液，pH4.5)建立动物模型。

2.2.2 动物分组及给药

注射STZ 72h后，测定空腹血糖，选择64只血糖水平超过16.5mmol/L作为糖尿病模型大鼠，随机分为8组，分别是模型对照组、优降糖(250mg/kg)组和牛磺酸高(400mg/kg)、中(200mg/kg)、低(100mg/kg)剂量组；总黄酮高(400mg/kg)、中(200mg/kg)、低(100mg/kg)剂量组。给药组每天一次给药灌胃，模型组灌胃给药生理盐水。连续给药6周后采血检测各组血糖血脂各项指标。

2.2.3 指标的观察及测定

大鼠断尾取血。处死动物，取胰腺做生化指标测定，测定胰岛素水平、糖化血红蛋白、空腹血糖值、餐后2h血糖值、总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白等。

2.3 数据处理结果分析

3 结果

3.1 高血糖血脂异常大鼠模型的建立

表1 模型大鼠与正常大鼠血糖比较±S)

由表1可得，空白组与模型组相比，P<0.01显著性差别，说明地骨皮对于正常小鼠有一定的降血糖作用。

3.2 地骨皮中有效成分的药理作用研究

3.2.1 总黄酮及牛磺酸对大鼠血清葡萄糖浓度的影响

表2 总黄酮组对大鼠血糖的影响± S)

表3 牛磺酸组对大鼠血糖的影响±S)

如表2、3所示，与正常对照组相比，2型糖尿病模型组大鼠的血糖值明显升高(P〈0.001)，与模型组相比，总黄酮大、中、小剂量组、牛磺酸大、中、小剂量组及优降糖组血糖值均有下降，说明总黄酮及牛磺酸均能降低2型糖尿病大鼠的血糖。

3.2.2 总黄酮及牛黄酸对大鼠血清胰岛素含量的影响

如表4、5所示，与正常对照组相比，糖尿病模型组血清胰岛素水平明显升高，P<0.05，与糖尿病模型组相比，总黄酮及牛黄酸大、中、小剂量组血清胰岛素均有降低。

表4 总黄酮对血清胰岛素的影响±S)

表5 牛磺酸对血清胰岛素的影响± S)

3.2.3 总黄酮及牛黄酸对大鼠血脂的测定

表7 牛磺酸对2型糖尿病大鼠血脂的影响

如表6、7所示，与正常对照组相比，糖尿病模型组实验结束后TC、TG明显升高，LDL-C明显降低。与糖尿病模型组比较，总黄酮及牛磺酸大、中、小剂量组TC、TG均有下降，HDL-C均有增高。下降趋势与剂量关系不大。

3.2.4 总黄酮及牛磺酸对大鼠肝糖原的影响

表8 总黄酮及牛磺酸对2型糖尿病大鼠肝糖元的影响

模型组与空白组比，大鼠糖代谢功能失调，糖异生能力下降，引起血糖升高，地骨皮治疗后肝糖元水平有所上升，地骨皮组与空白对照组相比无显著性差异，P>0.05因此总黄酮及牛磺酸在调解糖尿病大鼠糖代谢方面有着良好的效果。

4 讨论

糖尿病是一种常见的内分泌代谢性疾病，通常是由于胰岛素分泌发生障碍形成，糖代谢紊乱，同时还出现脂肪代谢紊乱以及蛋白质、水及电解质等多种代谢紊乱，产生严重的并发症。因此筛选开发具有降低血糖、调节血脂的生物资源对于糖尿病人的康复具有重要意义。

本实验结果表明，地骨皮中的总黄酮及牛磺酸具有降血糖作用，它的降糖机制是促进胰岛β细胞分泌胰岛素，提高血清胰岛素水平，使血清胰高血糖素水平降低。抑制肝糖原分解和促进肝糖原合成的作用，从而可减少血糖的来源，增加血糖的去路，降低血糖值。地骨皮还有降血脂的作用，降脂机制是总黄酮降低血胆固醇和三酰基甘油来调节血脂。

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