多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统在临床中的应用分析

张培良 张焕珍

蛋白芯片检测技术是新研究领域的一种高灵敏度、高通量、高特异性且微型化的蛋白质分析技术［1］。本研究采用上海数康公司的HD2001A型生物芯片, 对已经确诊的100例恶性肿瘤患者和100例良性患者进行相关分析, 探讨在肿瘤临床诊断检测肿瘤标记物(TM)的联合应用价值, 为肿瘤患者的早期诊断和治疗提供精准的依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 恶性肿瘤患者为本院2012年8月～2013年10月住院患者100例, 其中男62例, 女38例, 年龄34～79,平均年龄(53.2±7.8)岁, 其中胃癌25例, 胰腺癌15例, 乳腺癌10例, 肺癌11例, 肝癌21例, 直肠癌8例, 结肠癌10例。对照组100例, 其中肝脏疾病32例, 肺部疾病20例, 消化道疾病26例, 妇科疾病14例, 前列腺疾病8例, 两组患者的一般资料差异无统计学意义(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 方法 在患者空腹时采集外周血2 ml 对其离心分离血清, 分离后在4℃冰箱保存, 4 d左右取出检测。检测时将芯片的小方格内放入待测血清或标准品100 μl；恒温37 ℃, 30 min,100 rpm 摇床振荡, 振荡后取出芯片弃去孔内液体；清洗后将芯片放入洗盒, 继续洗液, 37℃摇床, 250 rpm, 10 min振荡洗涤, 将弃去盒内液体；重复洗涤4次；芯片小方格内加100 μl 反应液, 同样重复洗涤 4次；等体积将检测液 A 和 B混合, 加入 20 μl 混合的检测液在膜表面, 通过蛋白芯片检测仪进行检测, 60 s后拍摄图像, 进行反应数据分析。

1.3 结果判定［2］根据C-12 检测系统12种肿瘤标志物的参考范围:神经元特异性烯醇化酶(NSE)＜13.0 ng/ml, 癌胚抗原 (CEA)＜5.0 ng/ml, 糖类抗原 125(CA125)＜35.0 U/ml, 糖类抗原 242(CA242)＜20.0 U/ml, 铁蛋白 (ferritin)＜219.0 ng/ml(女 )、＜322.0 ng/ml(男 ), 糖类抗原 199(CA199)＜35.0 U/ml, 糖类抗原153(CA153)＜35.0 U/ml, 前列腺特异性抗原 (PSA)＜5.0 ng/ml, 甲胎蛋白(AFP)＜20.0 ng/ml, 人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)＜3.0 ng/ml, 游离性前列腺特异性抗原(F-PSA)＜1.0 ng/ml, 生长激素(HGH)＜7.5 ng/ml。实验排除溶血、脂血标本。其他具体步骤要严格按照C-12上的使用说明书进行操作。

1.4 统计学方法 采用统计学软件SPSS16.0对实验数据进行总结、处理, 计数资料采用χ2检验, P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

良性疾病组与恶性肿瘤组的阳性率比较, 恶性肿瘤组的阳性率明显比良性疾病组高(P＜0.05)。C-12 蛋白芯片对恶性肿瘤检测的阳性率85%, 灵敏度为82%。见表1。

表1 C-12蛋白芯片对各组的检测阳性率(n, %)

3 讨论

生物芯片是近年来医学界一个备受瞩目的医疗成果,可以将人体的各项检测变得非常集中化, 而且可对人体内的细胞进行简单快速地解读。生物芯片主要就是采用了微细加工［3,4］。双抗体夹心法的化学发光检测方法是多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统是基础, 12种肿瘤标志物的抗体被固相基质上包被, 将血清中对应的肿瘤标志物进行捕捉, 与第二抗体结合, 对其催化使其产生化学反应的光信号, 将芯片采取专门的芯片阅读仪对肿瘤标志物进行定量检测。

本研究对卵巢癌使用多肿瘤标志物蛋白芯片进行分析和检测, 蛋白芯片是一种应用较为广泛生物芯片, 蛋白芯之所以发光主要就是利用了抗体和抗原特异性的结合通过催化化学反应来进行检测的。然后利用计算机来判断荧光的强弱结果。蛋白芯片技术避免了过去分析方法的弱点, 具有快速读取、高通量和样本量少的优势, 对于原始蛋白的提取物和血液中的蛋白质快速进行分析, 而且可以对于血液, 提取多种组织和细胞中的蛋白质信息, 所以广泛的运用于检测癌症,经过医学研究, 该技术对于检测肿瘤蛋白质水平的变化已经成熟, 比起其他的检测能够对肿瘤特征进行反映。虽然生物芯片已经成熟但是不可能达到百分百的效果, 仍会有一些患者由于病情原因被误诊。毕竟肿瘤患者在不断地变化之中,很难预测。蛋白芯片检测技术的特异性和敏感性在所有目前存在的检测手段中相对较高, 尽管达不到百分百的成功率,但是对肿瘤做出合理而科学的检测成功率相对还是很高的。

目前在医学界倡导肿瘤标志物联合检验的方法的人占的比率还是较大的, 因为肿瘤诊断这种方法可以提高敏感度和特异性, 在适合肿瘤临床检测的同时, 在临床上对肿瘤高危患者的体检筛查也具有显著的意义, 在临床诊断上C-12芯片法的基本价值也是显著的。对阳性血清肿瘤标志物的检验因为有了12 项指标的联合所以更加精确。目前所有肿瘤的标志物的指标会有所显示。而对于单项肿瘤标志物如肺癌、乳腺癌、 胃癌阳性比例不高的, 通过C-12芯片法的联合检测可以发现多项肿瘤标志物呈阳性, 这不仅为临床治疗提供有效的监测指标还有助于提高临床诊断的灵敏度。多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统在临床中的应用具有一定价值。

［1］ 程建平, 张建明, 金跃.多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统在肿瘤诊断与筛查中的应用研究.中国实验诊断学, 2008, 1(3):1370-1371.

［2］ 陈莉彭, 剑雄, 周细国.多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统在临床中的应用.中国医药导报, 2006, 3(29):29-30.

［3］ 胡兴荣, 徐先早, 崔显念, 等.多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统的应用分析.检验医学与临床, 2007, 4(10):929-930.

［4］ 潘振华.多肿瘤标志物蛋白芯片检测技术在卵巢癌临床应用中的评价.现代预防医学, 2012, 39(24):6399-6340.