酸枣仁汤对虚劳不眠小鼠脑内NO、SOD和Glu含量及学习记忆能力的影响

李家娣 范桂红 吴 迪 孙雨薇 韩 雪 张亚男

(齐齐哈尔医学院第一附属医院中药局,黑龙江 齐齐哈尔 161041)

目前失眠的发病率呈现逐年升高的趋势，已成为严重影响人们身心健康的主要疾患之一〔1〕。目前，临床对其治疗仍以药物为主，西药以镇静、催眠类药物为主，但需要长期服药，影响患者的依从性及出现戒断综合征〔2〕，且由于对失眠的发病机制尚不清楚，以致临床缺乏针对性的治疗措施。本研究拟探讨失眠经典方药酸枣仁汤对学习记忆能力的影响及干预机制。

1 材料与方法

1.1实验动物 8周龄SPF级SD小鼠80只〔动物合格证号：SCXK(津)2013-0002〕，雌雄各半，体质量(60±20)g，由天津实验动物中心提供。

1.2实验分组 依据随机数字表法进行分组，即空白对照组(简称空白组)、模型对照组(简称模型组)、中药酸枣仁汤治疗组(简称中药组)、西药安定治疗组(简称西药组)，每组20只。

1.3给药方法 每日固定时间进行灌胃，其中西药组胃饲安定0.2 mg·kg-1·d-1，中药组胃饲酸枣仁汤10 g·kg-1·d-1，模型组、空白组胃饲生理盐水2 ml/(kg·d)。

1.4实验仪器及试剂 紫外可见分光光度计(上海欣茂仪器有限公司，UV-7504型)；电热恒温水浴锅(上海仪表供销公司))；Y型迷宫(广州威佳科技有限公司)。氯苯丙氨酸(PCPA)购自Sigma公司；一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒(南京建成生物制剂研究所)；血糖(Glu)试剂北京博奥森公司。

1.5研究方法

1.5.1模型制备 采取大鼠跑台力竭训练+Y型迷宫十PCPA失眠的动物模型，跑台力竭实验主要是对除空白组之外的所有小鼠，每天进行20 min的跑台训练，5只/次，直到其力竭；而后进行Y型迷宫训练，即：将小鼠放入Y型迷宫的任一支臂之中，予以小鼠电击，直至其进入安全区后停止，而后熄灯结束测试，同时将小鼠所在支臂作为下一测试的起点，进行电击实验，以测试其走完迷宫所用时间、错误总数及首错前正确数，上述两项实验开始1 w后，对小鼠进行腹腔注射PCPA，剂量为350 mg/kg，至小鼠出现挛缩性疼痛，约持续60 min，疼痛缓解。72 h后对小鼠进行体表特征积分评定，检验模型。

1.5.2检测指标与方法 猝死动物，取出脑组织，将其称重，吸水纸洗尽水分后置于超低温冰箱中，NO、SOD 、Glu检测按照试剂盒中步骤进行。

1.6统计学方法 应用SPSS17.0统计软件进行分析。

2 结 果

2.1各组小鼠统计学描述 模型组小鼠在实验第4天因跑台力竭实验死亡1只，西药组小鼠在实验第7天因灌胃死亡1只，故共78只小鼠进入相关数据分析。

2.2各组小鼠NO、SOD和Glu含量比较 与空白组比较，模型组的SOD含量增加明显，Glu含量则降低明显(P<0.05)，NO含量无明显变化(P>0.05)；与模型组比较，西药组、中药组的NO、Glu含量升高明显，SOD含量降低明显(P<0.05)；中、西药组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 各组小鼠NO、SOD和Glu含量比较±s)

2.3各组小鼠学习记忆能力比较 与空白组比较，模型组的走完迷宫所用时间、错误总数均增加明显，首错前正确数降低明显(P<0.05)；与模型组比较，西药组、中药组的走完迷宫所用时间、错误总数均降低明显，首错前正确数增加明显(P<0.05)；中、西药组比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 各组小鼠学习记忆能力比较±s)

3 讨 论

失眠在中医学中根据其症状，将其隶属于“不寐”范畴，将其分为实证与虚证两种，其中实证多由于营卫不和，阳不入阴而引发，虚证则多与精血亏虚，脏不藏神有关〔3〕。本研究中所用酸枣仁汤为治疗失眠的经典方剂，出自仲景的《金匮要略》，方中以酸枣仁为君药，取其养血补肝、宁心安神之功，茯苓与知母共为臣药，一则辅助君药以加强安神除烦之功，再则取茯苓健脾利湿，知母滋阴清热，使其清热除烦之力强；以调畅气机、舒畅肝气之白芍为佐药，与君药相反相成，以达养血调肝之妙；甘草和中缓急为使药，且能与酸枣仁相合，增强酸甘化阴之能，补充肝血不足之征，全方养肝血以宁心神,清内热以除虚烦为组方原则，诸药相合，则失眠可望向愈。

有学者研究证实：酸枣仁汤可减少小鼠的自主活动次数，延长失眠小鼠的睡眠时间，其催眠效果与剂量具有相关性〔4〕；而通过酸枣仁汤的不同剂量进行研究，发现不同剂量均对于小鼠的活动具抑制作用，且可明显抑制中枢神经兴奋，延长睡眠百分率及睡眠持续时间，呈现量效关系〔5〕。亦有研究表明，安神药物可提高小鼠的学习记忆能力，尤其是记忆获得障碍及再现障碍〔6〕，纵观近年研究，对于本方的研究多针对镇静催眠效应机制而展开，对于失眠较容易导致的学习记忆能力的降低的改善及其机制研究鲜见。

SOD作为人体内最重要的自由基清除剂，模型组的SOD活性增高,则可能由于睡眠剥夺加重了自由基清除系统的反应性升高,过度的氧自由基会灭活SOD，使得SOD活性下降，进一步加重对脑组织的损害；Glu属于兴奋性神经递质，由于可改变兴奋性氨基酸浓度而导致机体产生兴奋性毒性，诱发失眠〔7〕。提示酸枣仁汤可调控NO、SOD和Glu水平，其功效与西药相似。

本研究结果显示，酸枣仁汤可有效改善虚劳不眠小鼠的学习记忆能力，其机制可能与调控NO、SOD和Glu水平有关。

4 参考文献

1袁拯忠，叶 人，项祖闯，等.913例失眠患者中医证型分布规律〔J〕.中华中医药学刊，2011；29(7)：1508-10

2徐劲松，刘继洪，余志映.加味酸枣仁汤治疗阴虚体质失眠症44例临床观察〔J〕.中国中医基础医学杂志，2013；19(12)：1491-3.

3张舜波，王 平，田代志，等.酸枣仁总皂苷对失眠老年大鼠脑氨基酸类神经递质及受体表达的影响〔J〕.中国实验方剂学杂志，2014；20(4)：124-7.

4王 慧，罗 坤，武 静.酸枣仁汤对失眠大鼠中脑中缝背核神经胶质细胞的影响〔J〕.中国实验方剂学杂志，2012；18(21):235-9.

5朱秀美，杨国松，李秀才.酸枣仁汤的药理学作用研究进展〔J〕.中医临床研究，2013；5(14) ：121-2.

6王守勇，谢 鸣.酸枣仁汤组分配方对高架十字迷宫大鼠海马单胺类递质及其代谢物的影响〔J〕.北京中医药大学学报，2012；35(2):117-20.

7张林挺.酸枣仁汤对虚劳失眠大鼠干预机理的研究〔D〕.广州中医药大学博士论文，2009.