胃黏膜癌变过程中蛙皮素蛋白表达的变化

杨智航 李 楠 张 量 郭 丽 王 晶 张 忠

(沈阳医学院基础医学院，辽宁 沈阳 110034)

胃黏膜的癌变过程是多因素共同作用的结果。蛙皮素(BN)是具有生长因子样作用的脑肠肽，可以促进各类细胞特别是肿瘤细胞的增殖。然而，关于蛙皮素在胃黏膜的癌变过程中的动态变化规律及意义尚不清楚。本研究拟分析蛙皮素在胃黏膜癌变过程中不同阶段的变化规律。

1 材料与方法

1.1研究对象 收集沈阳医学院奉天医院2011年5月至2012年12月间内窥镜中心接受胃镜检查者和部分手术患者(术前均未进行放、化疗等特殊治疗)的胃黏膜组织94例，其中癌旁基本正常胃黏膜10例(对照组)，浅表性胃炎28例，萎缩性胃炎21例，胃黏膜不典型增生17例，胃癌18例。上述组织样品，均经HE染色，病理学诊断。全部病例中，男49例，女45例，平均年龄50.40岁(21～79岁)，各组间在性别及年龄构成差异均无统计学意义(P>0.05)。

1.2主要试剂与仪器 兔抗人BN抗体(Abcam公司)；PV超敏试剂盒和浓缩型DAB显色试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)；LeicaRM 2235切片机(Leicarm)。

1.3免疫组化染色 标本置于10%中性甲醛液中固定，石蜡包埋后制成切片。BN为即用型兔抗人抗体，稀释比1∶100，按PV超敏试剂盒程序染色，DAB显色。以PBS替换一抗作为阴性对照，以已知阳性切片作为阳性对照。

1.4统计学处理 采用SPSS13.0软件行单因素方差分析。

2 结 果

BN蛋白免疫反应阳性颗粒为棕黄色，主要表达在细胞膜和细胞质，细胞核无着色。在对照组、浅表性胃炎和萎缩性胃炎黏膜组织中，呈散在分布，着色浅，表达量低；在胃黏膜不典型增生组织和胃癌组织中，呈弥漫性或簇状分布，着色深，表达量高(图1)。各组平均光密度值分别为对照组(0.126±0.025，n=10)、浅表性胃炎组(0.132±0.037，n=28)，萎缩性胃炎组(0.111±0.019，n=21)，三组间差异无统计学意义(P>0.05)，不典型增生组(0.339±0.047，n=17)和胃癌组(0.395±0.062，n=18)均高于前三者，且两组差异显著(P<0.05)。

图1 胃黏膜组织BN的表达(DAB，×200)

3 讨 论

探讨胃癌发生发展规律，寻找新的胃癌早期筛查或诊断的标志物，实现早期发现、早期诊断和早期治疗的目的，对胃癌的防治及生存率的提高尤为重要。胃癌的发生过程中内分泌的变化起到不可忽视的作用。BN是与胃癌发生发展密切相关的重要的胃肠激素之一，能促进人胃癌细胞株SIIA细胞生长〔1〕。在体内，BN拮抗剂能抑制裸鼠的人胃癌细胞移植瘤生长〔2〕。在研究化学致癌剂N-甲基-N`-硝基-N亚硝基胍(MNNG)诱发人胃黏膜上皮永生细胞系GES-1癌变的过程中，BN可与MNNG协同作用，引起Cyclin D1过度表达，从而促进正常上皮细胞癌变〔3〕。叶序卷等〔4〕研究认为虽然蛙皮素在体内外能刺激胃癌细胞增殖，但与抗癌药丝裂霉素C联合后，可促进胃癌细胞的凋亡，提高抗癌药的疗效。徐秀英等〔5，6〕研究发现BN能促进BGC 823胃癌细胞的生长，且有剂量依赖性，此作用可以被特异性BN受体拮抗剂抑制。上述研究表明，BN可促进肿瘤细胞的增殖，对胃癌的发生发展起着重要的促进作用。

本研究结果提示，在胃黏膜癌变的过程中，BN的表达水平呈现前期平稳、后期明显增高的变化趋势，表明BN的确参与其中；BN表达水平的变化对于胃癌的诊断具有重要的意义。各组胃黏膜组织中BN表达水平发生上述变化的机制可能是生理状态下BN可在胃肠道内少量分泌。在浅表性胃炎、萎缩性胃炎等病理过程中，BN的分泌未受到明显影响。当胃黏膜上皮细胞发生不典型增生和发生癌变时，不仅细胞形态出现异常，而且细胞的功能和代谢也产生异常，结果导致BN分泌增多，并以自分泌方式促进癌变细胞增殖。已有研究发现，即使在不含有BN的无血清培养基中，特异性BN受体拮抗剂也可以直接抑制人胃癌细胞SGC 7901生长〔7〕。这提示，特异性受体拮抗剂可能是通过阻断BN在胃癌细胞的自分泌环路而抑制肿瘤细胞生长的，从而有力地证明了人胃癌细胞株具有通过自分泌作用产生BN的能力，并通过BN促进自身分化和增殖。近来香港大学和美国NIH的研究人员提出，癌细胞中某些特别蛋白的高表达水平是评价某些肿瘤是否进展的一个可靠指标〔8〕。本实验结果提示BN的监测及胃癌的诊断具有重要意义，BN是一种较好的胃癌诊断的生物学标志物。

4 参考文献

1Bold RJ，Lowry PS，Ishizuka J，etal.Bombesin stimulates in vitro growth of a human gastric cancer cell line〔J〕.J Cell Physiol，1994；161(3)：519-25.

2Uchida N，Okamur S，Kuwano H.Protein kinase C activity in human gastric carcinoma〔J〕.Oncol Rep，2000；7(4)：793-6.

3李景南，陈元方，钱家鸣，等.蛙皮素在人胃黏膜上皮永生细胞系化学癌变过程中的作用〔J〕.胃肠病学，2004；9(3)：141-4.

4叶序卷，王 立，宁敏曼.丝裂霉素C 联合蛙皮素增强抗胃癌作用的体外实验〔J〕.重庆医科大学学报，2006；31(1)：70-3.

5徐秀英，崔 巍，姜若兰，等.蛙皮素对胃癌细胞BGC-823的生长调控作用〔J〕.中国医科大学学报，2007；36(2)：203-5.

6徐秀英，赵金满，姜若兰，等.蛙皮素和生长抑素对人胃癌BGC-823细胞生长的影响受体后信息传递〔J〕.世界华人消化杂志，2006；14(27)：2684-90.

7孙 涛，钱家鸣，陆国钧，等.蛙皮素对人胃癌细胞生长的调节作用及机制探讨〔J〕.中华消化杂志，1994；14(增刊)：7-10.

8Lee TK，Murthy SR，Cawley NX，etal.An N-terminal truncated carboxypeptidase E splice isoform induces tumor growth and is a biomarker for predicting future metastasis in human cancers〔J〕.J Clin Invest，2011；121(3)：880-92.