高效液相色谱法检测老年ICU患者血清美罗培南的浓度及药代动力学变化

冯锦华

(无锡市第九人民医院，江苏 无锡 214062)

美罗培南是一种广谱性的人工半合成碳青霉烯类抗生素，其抗菌机制是抑制细菌细胞壁的合成〔1〕，作用于革兰阳性菌和阴性菌，在临床上用于肺炎等呼吸道感染、脑膜炎、尿路感染、皮肤软组织感染、妇科感染、败血症等疾病〔2〕。常用美罗培南治疗老年ICU患者，但老年ICU患者体内代谢常常与普通健康人存在巨大差异，因此研究美罗培南在老年ICU患者的药代动力学特征具有重要意义。高效液相色谱(HPLC)常用于研究药物药代动力学特征〔3〕。本文采用HPLC法检测老年ICU患者血清中美罗培南的浓度及其药代动力学特征。

1 材料与方法

1.1药品与试剂 注射用美罗培南〔纯度≥90%，批准文号：国药准字H20065284，中诺药业(石家庄)有限公司〕，氢氯噻嗪对照品〔纯度≥90%，研域(上海)化学试剂有限公司，批号：100309-200702〕，甲醇、乙腈均为色谱纯，天津康科德科技有限公司生产；其他试剂均为分析纯。

1.2仪器 岛津Agilent1200HPLC系统和紫外检测器SP-20A，LC软件色谱工作站；1810B型自动双重纯水蒸馏器、美国热电ST16R台式冷冻离心机、XW-80A型涡旋混匀机。

1.3一般资料 8例ICU老年患者，男3例，女5例，年龄65～75岁；血压<90/60 mmHg；呼吸频率>30次/min；血氧分压(PaO2)/吸入氧分压(FiO2)<300，PaO2<60 mmHg，需行机械通气治疗；社区获得性肺炎或胸片显示双侧或多肺叶受累〔4〕。

1.4液相色谱条件 色谱柱Phenosphere C18柱，5 μm(50 mm×4.6 mm)；柱温:37.5℃，流动相为10 mmol/L磷酸缓冲液(pH7.4)：乙腈(92:8，V/V)，流速：1 ml/min，进样量：20 μl，检测波长295 nm。

1.5血清样品预处理 取200 μl血浆样品，加入一定量美罗培南和内标氢氯噻嗪，涡旋混匀，加入到预先处理好的Bond Elut固相萃取柱，用0.6 ml浓度为5 mmol的磷酸二氢钾溶液(pH6.4)冲洗杂质，然后用0.6 ml甲醇-0.1%甲酸(16∶84)洗脱，收集洗脱液，6 000 r/min离心，取上清液进样〔5〕。

1.6标准曲线的制备 精确吸取一定量美罗培南的对照品溶液和50 μl内标氢氯噻嗪溶液，用200 μl空白血浆稀释美罗培南浓度为0.5、1.0、1.5、2.0、5.0、10.0、50.0 μg/ml的血浆系列溶液。经上述血浆样品预处理步骤进液相分析。

1.7血清样品采集及处理 静脉滴注给予美罗培南0.8 g，滴注30 min，在给药前即刻、给药后0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0 h采集患者静脉血1 ml，置于肝素离心管中,离心(1 500 r/min×15 min)，分取血清，于-70 ℃低温冰箱中保存待测。取出冰箱中样品，依次按照“1.5”步骤进行血浆样品预处理，处理进液相分析。

1.8药动学参数计算方法 以3P97程序经计算机拟合测得的血药浓度-时间数据 ,用WinNonlon 5.0软件计算药代动力学参数。

2 结 果

2.1色谱行为 美罗培南和内标氢氯噻嗪的保留时间分别为5.3、6.8 min。

2.2标准曲线及系统性实验 以美罗培南峰面积比内标氢氯噻嗪面积(Y)为纵坐标，美罗培南浓度X为横坐标，进行回归计算，得标准曲线回归方程:Y=0.1342C-0.0423,r=0.998 9。线性范围为0.5～50.0 μg/ml，日内变异系数均<5%；日间变异系数均<5%；相对回收率均在95%～105%；样品处理回收率均>80%。

2.3药代动力学参数 血药浓度-时间数据见图1，药代动力学参数Cmax/Dose(53.65±16.87)μg·ml-1·g-1、tmax(0.35±0.08)h、t1/2(2.53±0.14)h、清除率(CL)(8.76±3.76)L/h、V(27.86±17.43)L、AUC0～t(94.36±42.46)μg·h-1·ml-1、AUC0～∞(118.62±68.32)μg·h-1·ml-1、λZ(0.35±0.15)h-1。

图1 老年ICU患者静脉滴注给予美罗培南0.8 g后血药浓度-时间曲线

3 讨 论

文献报道采用HPLC-超滤法监测血液中美罗培南浓度的方法，其检测限(LOD)、定量限(LOQ)值分别为0.01和0.05 μg/ml，表明超滤法在除去杂质的同时能有效富集血液中的美罗培南，其回收率达90%以上，但考虑到采用超滤法所需成本较高，未采用此法〔6〕。

高效液相色谱法检测老年ICU患者血清中美罗培南浓度，专属性强，灵敏度高，分离效果良好，血浆中内源性物质无干扰，测定血液中美罗培南浓度的重要一步是处理血浆样品，文献报告，血浆中的蛋白含量对血浆处理效果影响不大，表明其与蛋白结合率较低〔7〕。故本文采用处理血浆后得到血清，测定血清中的药物含量。本实验同时考察了有机溶剂萃取和固相萃取两种方法，发现采用二氯甲烷萃取处理血清来除去杂质后，其水层进液相发现，杂质对测定有干扰，而固相萃取后杂质对测定无干扰，且回收率达80%以上。本文也选择多种内标，最终选用了氢氯噻嗪作为内标，结果发现其与主药有很好的分离度。对于血清保存温度已进行考察，发现在-20℃条件下保存时稳定性较差，同一样品经过同一步骤后峰性相差较大，这主要原因是美罗培南的稳定性较差，易分解或者氧化。考察了在-70℃条件下保存1个月后稳定性良好，故选择保存样品温度为-70℃。最终方案定为采用HPLC-UV检测、固相萃取处理样品、以氢氯噻嗪作为内标来测定血液中美罗培南浓度。

老年ICU患者半衰期与健康成年人相比明显延长，清除率也低于健康成年人〔CL11.3 L/h〕，表明其在体内代谢速度慢于健康成年人〔8〕。表观分布容积与其他文献报道的老年ICU患者药代动力学研究相近〔1〕。因此，对于老年ICU患者使用美罗培南时，应考虑其代谢慢的药代动力学特征，给药方案制定时应同时考虑治疗窗和给药量，在常规剂量治疗老年ICU患者时应实施临床药物监测，增加用药安全性。

4 参考文献

1孙亚欣，肇丽梅，朱 旭，等.RP-HPLC 法测定人血浆和尿液中美罗培南浓度〔J〕,广东药学院学报,2011；27(6):567-70.

2李晓燕，孔凡霞，王 莹，等.高效液相色谱法测定美罗培南侧链的含量〔J〕.中南药学,2013；11(7):553-5.

3Daillya E,Bouquiéa R,Deslandes G,etal.A liquid chromatography assay for a quantification of doripenem,ertapenem,imipenem,meropenem concentrations in human plasma:application to a clinical pharmacokinetic study〔J〕.J Chromatography B,2011；879(1):1137-42.

4张 弨， 周 勇，周庆涛，等.HPLC法测定美罗培南血清浓度及其在ICU老年患者中的药代动力学研究〔J〕.中国临床药理学杂志,2013；29(4):273-5.

5陈晓晶，梁海涛，覃韦苇，等.用HPLC法测定人血浆中美罗培南的浓度〔J〕.药学服务与研究，2013；12(4):316-8.

6Ikeda K,Ikawa K,Morikawa N,etal.High-performance liquid chromatography with ultraviolet detection for real-time therapeutic drug monitoring of meropenem in plasma〔J〕.J Chromatography B,2007；856(1)：371-5.

7倪桂芬.HPLC法测定人血清中美罗培南浓度〔J〕,中国药师,2005；8(7):577-8.

8Adnana S,Li JX,Wallis SC,etal.Pharmacokinetics of meropenem and piperacillin in critically ill patients with indwelling surgical drains〔J〕.Int J Antimicrobial Agents,2013；42(1):90-3.