酸性黄显现深色渗透性客体上潜血鞋印解析

李 贺，罗亚平

(中国人民公安大学，北京 100038)

潜血鞋印一般是暴力、凶杀等恶性犯罪案件现场的常见物证之一，对现场的潜血鞋印进行显现，不仅有助于分析犯罪嫌疑人的个人信息(如身高、年龄、体态等)、作案人数，而且有助于分析案情、判断案件性质、为侦查破案提供科学的依据①罗亚平，郭威，史海清.痕迹检验教程.北京:中国人民公安大学出版社，2004.72.。

目前，对于渗透性客体上的血迹显现一般采用氨基黑10B、四甲基联苯胺 (TMB)等，但是由于显现出的血迹都呈深色，所以遇到深色客体时就无法通过上述方法显现出反差明显的印迹。

Acid Yellow7(酸性黄)作为一种蛋白质染色剂能够与血液中的蛋白质发生灵敏反应，其生成的荧光物质在多波段光源激发下呈亮黄色。2005年，英国内政部首次将Acid Yellow7引进刑事科学技术领域，应用于非渗透性客体上潜血手印的显现。2011年，Lydia C.A.M.Bossers等人对Acid Violet17、氨基黑10B、匈牙利红、二氧化钛等几种显现潜血手印的方法进行了对比实验。②水晶晶，罗亚平，王明超.酸性黄显现非渗透性客体上血潜手印初步探究.刑事技术.2012(5):35-37.但是笔者通过查阅文献，发现针对于Acid Yellow7的应用基本上只限于非渗透性客体，如果能够利用酸性黄显现深色渗透性客体上潜血印迹，那么就可以弥补氨基黑10B、四甲基联苯胺(TMB)等方法的不足，解决犯罪现场遗留的大量深色客体上血足迹、潜血作案工具印痕、车辆轮胎印痕的显现问题，从而能够为暴力、凶杀、交通肇事逃逸等案件的侦查提供有价值的技术支持。

一、材料与方法

(二)材料

标记特征的胶底鞋、小刀、剪刀、镊子、脱脂棉、新鲜血液 (人血)、烧杯、

量筒、玻璃皿、玻璃棒、电子天平、滤纸、警用多波段光源、单反相机、翻拍架、橙色滤光片、比例尺、不同质地的织物、Acid Yellow7(如图1)、5-磺基水杨酸、乙醇、乙酸、蒸馏水。

图1 本实验所使用的Acid Yellow7

(二)试剂配制

Acid Yellow7试剂包括固定液、染色液和漂洗液，其配置方法如下:

1.配置固定液

步骤一:称取40g 5-磺基水杨酸，放置于干净、干燥的容量为2.5L的玻璃烧杯中;

步骤二:量取2L蒸馏水加入到步骤一的烧杯当中，并用磁力搅拌器进行搅拌至充分溶解，这样就制成了固定液。

2.配置染色液

步骤一:称取1g Acid Yellow7，放置于干净、干燥的容量为2.5L的大玻璃烧杯中:

步骤二:量取50ml乙酸加入步骤一的烧杯之中;

步骤三:再量取250ml无水乙醇加入烧杯;

步骤四:最后，量取700ml蒸馏水加入烧杯之中并用磁力搅拌器搅拌至完全溶解，这样就制成了染色液。

3.配置漂洗液

步骤一:量取100ml乙酸倒入干净的容量为2.5L的玻璃烧杯之中;

步骤二:再量取500ml无水乙醇加入到乙酸之中;

步骤三:最后量取1400ml蒸馏水加入烧杯之中并用玻璃棒搅拌均匀，这样就制成了漂洗液。

(三)样本制作

1.选取生活中常见的衣物布料三种 (蓝色棉布、黑色毛料、黑色棉布)，用剪刀裁剪成长15cm、宽14cm的布块，每种布料各30块，分为A、B两组，每组中每种布料各15块。

2.用小刀在选取的胶底鞋鞋底做出8个缺损痕迹特征 (如图2)。

3.本实验选用的血液为六个月内采集的保存于4℃—6℃环境中的人血。首先将血液从冰箱冷藏环境中取出，在室温条件下放置10min左右，待其温度与室温相同后摇匀倒入烧杯。用镊子夹取脱脂棉，蘸取纯血均匀地涂抹在鞋底前半掌，并以行走姿势在A组的每块布料上制作潜血鞋印;为检验Acid Yellow7与血液反应生成荧光物质的灵敏性，再以1:5的比例将纯血与蒸馏水进行混合，以相同的方法在B组的每块布料上制作潜血鞋印。

图2 标有缺损特征的胶底鞋鞋底细节特征

4.将制作完成的样本至于阴凉、干燥处晾干。

(四)方 法

Acid Yellow7试剂显现潜血鞋印按照固定、染色、漂洗的步骤进行，实验中为了避免溶液浓度变化对结果产生的影响，将固定液、染色液、漂洗液等分为两份，对A、B两组分别处理。

1.固定:取玻璃皿，将已经配置好的固定液的一半 (1L)倒入其中，用镊子夹取A组布块浸泡在固定液中5min，然后取出在室温条件下充分晾干。以同样的方法，用配置的另一半固定液对B组的布块进行固定处理并在室温条件下充分晾干。

2.染色:取玻璃皿，将已经配置好的染色液的一半 (500ml)倒入其中，用镊子将已经固定处理过的A组布块进行浸泡5min，然后取出在室温条件下充分晾干。以同样的方法，用配置好的另一半染色液对B组的布块进行染色处理并在室温条件下充分晾干。

3.漂洗:取玻璃皿，将已经配置好的漂洗液的一半 (1L)倒入其中，用镊子将已经染色处理过的A组布块在染色液中漂洗5min，然后取出在室温条件下充分晾干以备观察。以同样的方法，用配置好的另一半漂洗液对B组的布块进行漂洗处理并在室温条件下充分晾干以备观察。

注意事项:因为布块较多，在固定、染色、漂洗过程当中可以适当摇晃玻璃皿使试剂与样本进行充分接触。

4.观察:将已经漂洗处理的A、B两组布块样本放置于自然光下进行观察，并用翻拍架配合单反相机进行拍照固定;其后，将A、B两组布块样本置于多波段光源下，以440nm光源通过橙色护目镜进行观察，并用翻拍架配合单反相机通过橙色滤光片在光圈为F5.6，曝光时间为6s的设置下 (可能会随着多波段光源的强度不同有所变化)进行拍照固定。但是在拍照过程中，笔者发现由于潜血鞋印的面积较大，而多波段光源要覆盖整个潜血鞋印会导致单位面积上的光强度不足，要想使潜血鞋印在光源的激发下产生最利于观察的荧光特征，可以借助于四周有遮光材料的移动式指纹荧光成像仪 (如下图3)。

5.评判标准:将显现出的潜血鞋印按照其反映的缺损特征数量分为三个等级，每个等级对应的细节特征见表1。

表1 潜血鞋印等级及细节特征对照表

(五)实验结果

表2 A、B两组的三种布料上显现出的潜血鞋印特征等级数量分布

表2中数据分析讨论如下:

1.A组中，Acid Yellow7处理黑色毛料、蓝色棉布、黑色棉布上的纯血潜血鞋印后，在自然光下有较弱的鞋印轮廓，不易观察，但是在440nm的光源激发下通过橙色护目镜观察有较明显的荧光特征。其中，可能由于黑色毛料表面较粗糙，潜血鞋印细节特征反映效果较蓝色棉布、黑色棉布上潜血鞋印稍差。(如图4蓝色棉布上的纯血潜血鞋印效果)

图3 移动式移动式指纹荧光成像仪

图4 蓝色棉布上的纯血潜血鞋印

2.通过观察，笔者发现虽然血液经过稀释，但是经过Acid Yellow7处理后大多数潜血鞋印在440nm光源下通过橙色护目镜仍能显现出清晰的荧光特征;通过对比，也不难看出稀释血潜血鞋印的细节特征表现稍差于纯血潜血鞋印的细节特征表现，稀释血潜血鞋印的荧光强度也要稍弱于纯血潜血鞋印的荧光强度。

二、讨 论

图5 Acid Yellow7的结构式

Acid Yellow7，又名酸性黄，分子式为C19H13N2NaO5S，分子量:404.37，化学结构式见下图8。其结构中含有磺酸基，遇水磺酸钠水解生成磺酸，因而酸性黄具有酸性物质的各种反应性质;另外其结构中还含有一个氨基，因而其又能与蛋白质发生反应，作为一种蛋白质染色剂，在生物上常用于蛋白质的定性和定量测试。从以上实验可以看到，Acid Yellow7可以用来显现一些深色渗透性客体上的潜血鞋印，与血液中的蛋白质发生反应生成荧光物质，并在440nm光源激发下通过橙色护目镜进行观察。但是，本文只是Acid Yellow7在显现深色渗透性客体上潜血鞋印的初步研究，比如在样本选取上，还可以进一步扩大样本种类范围;在试剂配方、操作步骤上还是采用国外显现非渗透性客体上潜血痕迹的方法，是否存在更利于显现深色渗透性客体上潜血鞋印的配方及操作方法;在实验条件上，还可以变换各项条件 (如实验温度、血液浓度、样本水中浸泡时间等)来对Acid Yellow7显现深色渗透性客体上的潜血鞋印进行深层研究。总之，Acid Yellow7作为一种灵敏的蛋白质染色剂，在与蛋白质反应后在440nm光源激发下通过橙色护目镜观察能够观察到明显的荧光特征，排除了深色以及复杂客体背景的干扰，弥补了现有的一些显现潜血足迹方法的不足，我们要充分总结并利用它的特点和优势，发挥它在侦查工作当中的作用。