抑癌基因PTEN在三阴性乳腺癌中的表达及其判断预后的价值

陈 亮 戴殿禄 崔国忠 丁明剑

(沧州市中心医院肿瘤外二科，河北 沧州 061001)

三阴性乳腺癌(TNBC)是一种特殊类型的乳腺癌，其雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和人表皮生长因子受体2(Her-2)表达均为阴性，内分泌治疗和Her-2的靶向治疗对于TNBC治疗无效，因此极易出现复发转移，恶性度高，预后很差。目前影响TNBC预后的分子指标逐渐成为研究的焦点。新发现的抑癌基因PTEN是继P53基因之后在人类肿瘤细胞中缺失和突变率最高的抑癌基因。乳腺癌中存在抑癌基因PTEN突变或缺失〔1〕，PTEN不但可抑制肿瘤细胞生长，而且能促进肿瘤细胞凋亡。本研究探讨PTEN蛋白在TNBC这一特殊类型乳腺癌中的表达，并分析其与TNBC预后的关系。

1 材料与方法

1.1临床材料 收集2000年8月至2005年7月沧州市中心医院住院治疗的130例TNBC患者的蜡块及随访材料，乳腺癌患者均为女性；年龄21～75岁，平均46.3岁；临床分期：Ⅰ期34例，Ⅱ期56例，Ⅲ期40例；组织学分级：Ⅰ级36例,Ⅱ级50例，Ⅲ级44例；腋下淋巴结转移患者72例；乳腺癌家族史45例。并选取48例癌旁乳腺组织作为对照。所有患者均接受手术治疗并根据患者情况给以放化疗等综合治疗。

1.2随访 所有乳腺癌患者均进行了随访。随访起始时间为抗癌治疗开始日，观察终止时间为2010年7月。随访采用门诊定期复查和电话相结合的方式。预后评价指标为患者的5年无病生存时间(DFS)及总生存时间(OS)。

1.3免疫组化 采用免疫组化SP法。以SP免疫组化试剂盒说明书为依据操作。PTEN单克隆抗体购于美国UCL公司。以PBS代替一抗作阴性对照，用已知PTEN阳性结肠癌组织作为阳性对照。

1.4结果判定 PTEN的判断：PTEN蛋白主要表达于细胞质，以棕黄色颗粒为特征。采取以每一切片中随机选取10个高倍镜视野及每个高倍镜视野计数100个细胞的方法判定。染色强度等级：浅黄染为1分，中度黄染为2分，强度黄染为3分；阳性细胞的百分率：阳性细胞<5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，>50%为3分；将两者的结果综合分析：0分计为阴性(-)，1～2计为弱阳性(+)，3～4计为中度阳性()，5～6计为强阳性()；将PTEN蛋白的(-)、(+)组计为低表达组，将PTEN蛋白的()、()组计为高表达组。

1.5统计学方法 采用SPSS16.0软件。计数资料应用χ2检验，用Kaplan-Meier法描述生存曲线，组间比较采用Log-rank法进行，用Cox模型进行多因素分析。

2 结 果

2.1PTEN蛋白在癌旁组织及癌组织中的表达 PTEN蛋白在TNBC和癌旁乳腺组织中的表达率差异显著(χ2=34.8,P=0.000)。见图1，表1。

图1 乳腺癌中PTEN的阳性表达(SP,×200)

表1 PTEN蛋白在乳腺不同组织中的表达〔n(%)〕

2.2PTEN蛋白表达与TNBC临床病理特征之间的关系 在TNBC中，PTEN的表达与临床分期及腋下淋巴结转移均显著相关(P<0.05)，而与年龄、肿瘤大小、乳腺癌家族史及组织学分级无显著相关(P>0.05)。见表2。

表2 PTEN蛋白在TNBC中的表达与临床病理特征的关系〔n(%)〕

2.3各临床因素对TNBC患者预后的影响 影响DFS的单因素分析显示，年龄、临床分期、腋下淋巴结转移及PTEN的蛋白表达与TNBC预后有关(P<0.05)。影响OS的单因素分析显示，临床分期、腋下淋巴结转移及PTEN的蛋白表达与TNBC预后有关(P<0.05)。见表3。

表3 影响TNBC患者预后的单因素分析(%)

2.4影响生存期的Cox模型多因素分析 把Log-rank检验筛选到的对TNBC生存有影响的各个因素再进行多因素Cox模型分析，入选条件为P<0.1。结果显示：年龄、临床分期、PTEN的蛋白表达及腋淋巴结转移情况四项指标是影响患者DFS的独立危险因素。临床分期及腋淋巴结转移情况两项指标是影响患者OS的独立危险因素。见表4，表5。

表4 影响TNBC患者DFS的多因素分析

2.5PTEN蛋白表达与生存期的关系 Kaplan-Meier法绘制的生存曲线可以看到PTEN蛋白高表达组患者的DFS及OS明显优于PTEN蛋白低表达组患者。见图2，图3。

表5 影响TNBC患者OS的多因素分析

图2 PTEN高表达组与低表达组DFS曲线的比较

图3 PTEN高表达组与低表达组OS曲线的比较

3 讨 论

TNBC在乳腺癌中属于特殊类型，其缺乏内分泌治疗及针对HER-2基因的分子靶向治疗，同时具有侵袭性强，复发早，进展快，生存时间短及易于侵袭转移等临床生物学行为。目前，化学治疗虽然是其主要治疗手段，但与其他类型乳腺癌相比预后更差。因此针对TNBC的基础研究、新治疗的探寻及临床预后等方面的研究引起越来越多的重视。PTEN基因是迄今为止发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因，其不但可抑制肿瘤细胞生长，也能促进肿瘤细胞凋亡。在许多肿瘤中PTEN基因区域有杂合性丢失和突变，抑制肿瘤作用减弱或消失，从而促进肿瘤的发生，发展及转移。同样，乳腺癌中也存在PTEN基因的缺失和突变，并且可以作为判断预后的指标，本研究探讨PTEN基因在TNBC这一特殊类型乳腺癌中的表达及其对预后的影响。

PTEN基因对于乳腺细胞正常功能的维持具有重要作用，其在正常乳腺组织中高表达，本研究说明癌旁组织中可能开始存在PTEN基因的丢失，从而影响了乳腺细胞的正常功能，其潜在的癌变的可能性增大；而PTEN蛋白表达在TNBC组织中进一步减弱，可能是由于抑癌基因PTEN出现了更多缺失和突变的结果。赵云霞等〔2〕应用免疫组织化学S-P法检测得出150例乳腺癌、20例不典型增生和30例良性增生性病变组织中PTEN蛋白在乳腺癌中失表达率分别为65.2%，50.0%和13.3%(P<0.05)。本研究结果还显示：PTEN蛋白表达水平与临床分期及腋下淋巴结转移呈负相关，提示随着肿瘤严重程度进展及侵袭能力的加强，PTEN蛋白丢失程度随之增加，而相关研究报道也发现，PTEN蛋白的丢失率随临床分期〔3〕增加及腋下淋巴结的阳性转移〔4，5〕而增加，说明PTEN表达的水平越低，肿瘤恶性度越高，越容易出现浸润和转移。

本研究中PTEN蛋白表达的单因素生存率分析显示，PTEN高表达组患者的5年的DFS及OS显著高于PTEN低表达组的患者，提示PTEN蛋白表达可能同样与TNBC的预后有关。李志雄等〔6〕通过免疫组化法检测食管鳞癌中PTEN的表达并行COX回归分析：PTEN的阳性患者的5年生存率明显高于PTEN阴性表达者，成为不良的预后因素。PTEN的表达在卵巢浆液性腺癌〔7〕、结直肠癌〔8〕、非小细胞肺癌〔9〕、胃癌〔10〕及肝内胆管细胞癌〔11〕中同样成为不良的预后因素，而Hager等〔12〕对肾细胞癌的预后分析显示，PTEN表达减少似乎是在肾细胞癌的早期步骤，PTEN基因的表达不能成为生存预后的指标。同样在膀胱癌〔13〕的预后研究中未能得出不良预后的结果。本研究通过影响三阴性乳腺癌患者DFS和OS的多因素分析显示，年龄、临床分期、PTEN的蛋白表达及腋淋巴结转移情况四项指标是影响患者DFS的独立危险因素，而仅有临床分期及腋淋巴结转移情况两项指标是影响患者OS的独立危险因素，说明PTEN的表达可能是影响三阴性乳腺癌预后的因素，但不是最为重要的预后因素。多因素分析：PTEN的回归系数为负数，表示随着PTEN表达的增加，患者死亡的危险度相对减少，而PTEN表达下调，则患者死亡的危险度相对增加。

综上，PTEN的缺失可能与TNBC的发生及发展有一定相关性，PTEN可能是影响TNBC预后的因素，检测PTEN蛋白在TNBC组织中的表达可以作为判断患者预后的分子标志。

4 参考文献

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12Hager M,Haufe H,Kemmerling R,etal.PTEN expression in renal cell carcinoma and oncocytoma and prognosis〔J〕.Pathology,2007；39(5):482-5.

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