凋亡相关基因P53在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

史 江 蒋军广 刘瑞芬 田 蕊 安金路 楚玉洁 崔永亮 张艳梅

(郑州大学第一附属医院 河南省呼吸疾病研究所 河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室，河南 郑州 450052)

肿瘤的发生、发展及转移与凋亡过程的平衡被打破有着密切关系。促凋亡基因、抑凋亡基因、凋亡效应基因相互作用共同完成凋亡过程〔1〕。本文主要研究P53的临床生物学意义及在非小细胞肺癌(NSCLC)发生、发展中的作用，期望为NSCLC的预防、诊断、临床治疗和预后判断提供依据。

1 对象与方法

1.1对象 收集郑州大学第一附属医院2010～2012年由胸外科手术切除的手术标本，且这些标本已经病理证实为NSCLC，共60例作为实验组，女23例，男37例，年龄45～87〔平均(62.7±17.6)〕岁，腺癌29例，鳞状细胞癌31例；按组织学分级:高分化14例、中分化29例、低分化17例；按照2002年美国联合癌症分类委员会和国际抗癌联盟制定的TNM分期标准：Ⅰ期19例、Ⅱ期21例、Ⅲ期17例、Ⅳ期3例；伴淋巴结转移者34例，不伴淋巴结转移者26例；有胸腔积液者10例，无胸腔积液者50例。所选患者均为首次发现，之前未接受任何方式的抗癌治疗。对照组20例均为已经病理学证实为NSCLC的癌旁正常组织(即距肿瘤边缘超过3 cm)。

1.2方法

1.2.1主要试剂 兔抗人P53单克隆抗体购于北京博奥森生物技术公司；凋亡试剂盒购于美国罗氏公司；SP试剂盒、二氨基联苯胺(DAB)显色剂，购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.2.2检测方法 采用免疫组化染色检测P53表达。采用TUNEL法检测细胞凋亡。

1.2.3阳性结果判定 P53阳性为细胞核内出现棕黄色颗粒。①细胞显色程度：无棕黄色颗粒，颜色与背景无明显区别为0分；有棕黄色颗粒，颜色高于背景底色为1分；有染色较清晰的棕黄色颗粒，介于1分与3分之间为2分；深棕黄色颗粒多，颜色明显比背景颜色强的为3分。②阳性细胞比例：0分：无阳性细胞；1分：阳性细胞比例<10%；2分：阳性细胞比例10%～50%；3分：阳性细胞比例>50%。①+②结果所得分值综合判断阳性表达，最后得分≥4分为表达阳性，<4分为表达阴性。

1.2.4凋亡细胞的阳性结果判定及凋亡指数(AI)的计算 凋亡细胞经TUNEL法处理后，细胞核被染为棕黄色，使用光学显微镜，计数每1 000个肿瘤细胞中凋亡细胞的个数。AI的计算方法:在400倍视野下任意选取10个视野，计数所测的凋亡细胞，AI=凋亡细胞总数/计数总细胞的数×100%。

1.3统计学方法 应用SPSS17.0软件采用χ2检验及直线相关分析。

2 结 果

2.1P53阳性表达 P53在60例NSCLC中表达的阳性率为58.3%(35/60)，在正常肺组织中不表达(0/20)，两者差异具有统计学意义(χ2=20.741，P=0.000)。P53在伴有淋巴结转移者的表达阳性率高于不伴淋巴结转移者(χ2=4.848，P=0.028)。P53的表达与NSCLC患者的性别、年龄、是否吸烟以及肿瘤直径、分化程度、TNM分期、病理分型、有无胸膜转移无关。见表1。

2.2P53与细胞凋亡的关系 P53分值0、1～2、3～4、5～6分的患者AI分别为(4.65±1.68)%、(3.43±1.47)%、(2.22±0.83)%、(1.54±0.56)%,P53与AI呈负相关(r=-0.684,P=0.000)。

表1 NSCLC中P53的表达与临床病理特征的关系

3 讨 论

P53基因是重要的抑癌基因，主要通过调节细胞周期以及凋亡过程从而达到抑制肿瘤细胞无限增殖的功能。P53包括野生型、突变型，野生型P53半衰期短，稳定性较差，用免疫组化法(S-P法)不易检测〔2〕。而突变型P53是一种促癌基因，其丧失了特异性结合DNA的能力，并且可以和野生型P53结合形成结构稳定的四聚体，以致野生型P53失去促进可能发生癌变的细胞或肿瘤细胞失活或凋亡的作用。

突变型P53在肺癌、胃癌、食管癌等肿瘤中均有高表达，也是人类遗传病Li-Fraumeni综合征的重要病因〔3〕。王岸柳等〔4〕研究结果显示在人神经胶质瘤中的表达比在脑的正常组织中的表达高，且在Ⅲ、Ⅳ期的表达明显高于Ⅰ、Ⅱ期的表达。焦悦〔5〕研究发现P53在正常组织中无表达，卵巢癌中的表达较高，随分化程度降低表达升高，随临床分期升高表达升高。本实验对NSCLC及正常肺组织中表达差异性的研究结果与上述研究中的结果一致，在不同肿瘤中的表达均高于在正常组织中的表达，提示P53的表达与肿瘤的发生有关。在对临床病理特征关系的研究与杨锡贵等〔6〕的研究结果一致，即与伴或不伴淋巴结有关，与Uramoto等〔7〕的研究结果不一致，其认为P53的表达与组织分型有关(P=0.03)，而与有无淋巴结转移无关，这可能与病例的选择、种族差异等多种因素有关。有文献研究P53高表达更易产生化疗耐药或放疗不敏感〔8〕，有文献认为P53表达与NSCLC预后的有关系〔9〕，本实验尚未涉及关于治疗方面的研究，因此P53与NSCLC的治疗及预后的关系有待进一步研究证实。

综上所述，P53的表达与NSCLC的发生、发展关系密切，其表达异常可能作为临床检测NSCLC的指标，提高了单基因检测的准确率。P53表达的异常与不同的临床病理特征有关，可能作为判断预后的指标。

4 参考文献

1郑元元，蒋军广，赵 娜，等.γ-synuclein 在非小细胞肺癌中的表达〔J〕.中国老年学杂志，2011；31(24)：4771-3.

2Rogel A,Popliker M,Webb CG,etal.p53 cellular tumor antigen:analysis of mRNA levels in normal adult tissues,embros and tumors〔J〕.Mol Cell Biol,1985;5(10):2581-855.

3李大虎，张令强，贺福初，等.突变体p53研究进展〔J〕.遗传,2008；30(6):697-704.

4王岸柳，刘朝霞，李 光，等.p53和Ki67在人脑胶质瘤中的表达及意义〔J〕.河北医药,2010；32(22):3116-7.

5焦 悦.卵巢上皮性肿瘤中P27和P53蛋白的表达及其相关性研究〔D〕.河北医科大学硕士学位论文,2010.

6杨锡贵，张学德，崔立献.非小细胞肺癌组织COX-2和p53表达及其临床意义的探讨〔J〕.中华肿瘤防治杂志,2009；16(10):752-4.

7Uramoto H,Sugio K,Oyama T,etal.Expression of the p53 family in lung cancer〔J〕.Anticancer Res,2006；26(3A):1785-90.

8武珊珊，刘吉福，李 琳，等.人肺癌组织中Ki67核抗原、p53和MDR-1基因表达的临床病理特征观察〔J〕.实用医学杂志，2009；25(16):2677-9.

9王 艳，白淑平，王晓红，等.非小细胞肺癌组织中VEGF与P53蛋白的表达及意义〔J〕.现代生物医学进展,2007；7(11):1684-6.