ERK-1和CylinD1在子宫内膜癌中的表达及其相关性

席 丰 时志民 张素芬 杨华英 沈艳峰

(河北工程大学医学院，河北 邯郸 056001)

子宫内膜癌为女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，在我国位于女性恶性肿瘤的第二位。本研究拟用免疫组化S-P检测正常子宫内膜、子宫内膜癌组织中ERK-1和CylinD1蛋白表达情况，分析这两种蛋白表达与子宫内膜癌生物学行为的关系，探讨它们在子宫内膜癌中发生、发展及生物学行为，为临床治疗和预后提供科学依据。

1 材料与方法

1.1材料 2008年1月至2011年12月河北河北工程大学附属医院病理科子宫内膜癌手术切除子宫标本60例，平均年龄52.22岁，所有子宫内膜癌患者术前均未行放、化疗及激素治疗；取因子宫肌瘤或子宫脱垂而手术切除子宫的正常子宫内膜标本32例，平均年龄48.25岁。按2000年FIGO标准进行临床病理分期及组织分级:Ⅰ期15例，Ⅱ期24例，Ⅲ期12例，Ⅳ期9例；G1级36例，G2级13例，G3级11例。病灶局限于黏膜层及浸润≤1/2肌层44例，浸润>1/2肌层16例。

1.2试剂与方法 常规免疫组化试剂盒S-P、二硝基联苯胺(DAB)显色液及ERK-1和CylinD1 (北京中杉金桥生物技术有限公司)。采用SP免疫组化法，方法操作按试剂盒说明书进行，取已知切片作为阳性对照，以PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。

1.3结果判断 ERK-1阳性定位于细胞质和细胞核，CylinD1阳性表达主要定位于细胞核(见图1)，以各种抗体在细胞核或胞质内出现棕黄色颗粒为阳性信号。参照Parenti等〔1〕的标准，每张切片均随机观察5个高倍视野(×400)，阳性细胞数<5%为(-)，5% ～25%为(+)，26% ～50%为()， >50%为()。以+～均视为阳性表达，-视为阴性表达。

1.4统计学分析 应用SPSS12.0软件，计数资料采用χ2检验。相关性采用等级相关分析。

2 结 果

2.1ERK-1和CylinD1在各种子宫内膜组织中的表达 32例正常子宫内膜组织中ERK-1阳性表达8例，CyclinD1阳性表达0例，而60例子宫内膜癌组织中ERK-1阳性表达35例，CyclinD1阳性表达31例；两种组织中两种基因阳性率差异显著(均P<0.05)。

2.2ERK-1和CylinD1在子宫内膜癌中的表达与临床病理指标的关系 见表1。ERK-1阳性表达与子宫内膜癌组织学分级、病理分期、浸润深度密切相关；CylinD1阳性表达与组织学分级、病理分期、有无淋巴结转移、浸润深度密切相关。

图1 子宫内膜癌ERK-1、CylinD1的表达情况(SP，×400)

表1 ERK-1和CylinD1在正常子宫内膜及子宫内膜癌中的表达与临床病理指标的关系

2.3ERK-1和CylinD1在子宫内膜癌组织中的相关性 60例子宫内膜癌组织中24例ERK-1及CylinD1阳性，18例双阴性，ERK-1(+)、CylinD1(-)11例，ERK-1(-)、CylinD1(+)7例。ERK-1和CylinD1在子宫内膜癌组织中的表达呈明显正相关(r=0.400，P=0.002)，表明二者在子宫内膜癌的发生、发展中起到协同作用。

3 讨 论

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)是细胞内广泛存在的一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，活化前的MAPK位于胞质，一旦活化即进入核内激活靶基因。MAPK通路信号的传送是通过MAPKKK、MAPKK和MAPK连续的磷酸化作用实现的〔2〕。已发现4条MAPK信号通路：ERK、JNK、BMK及P38MAPK。ERK途径是MAPK中一条主要的和经典的并且与人类癌症关系最为密切的途径〔3〕。ERK-1作为是MAPK通路中的代表激酶，通过接受外界刺激，ERK-1可被多种生长因子(EGF、NGF、PDGF等)有丝分裂原激活，进入细胞核内，促进多种癌基因及细胞周期调节相关基因的转录与表达，促进细胞增殖，抑制细胞凋亡〔4〕。本研究结果提示ERK-1蛋白的过表达可能在子宫内膜癌的恶性转化及其发生发展中起促进作用，ERK-1的过度表达与子宫内膜癌的侵袭及不良预后密切相关。

细胞周期存在着两个重要的调控点G1/S和G2/M期调控点，其中G1/S期是关键，因为在G1期中存在一限制点(R点)，在R点之前，细胞周期的运行依赖于细胞外生长因子，而一旦细胞周期跨过R点，细胞周期即为一自主性的过程，不再依赖外界生长因子的存在，所以G1～S对于细胞周期的运行和完成是至关重要〔5〕。在生理状态下，细胞进入S期后CylinD1迅速分解，在正常组织中免疫组化表达常为阴性或弱阳性。如CylinD1基因激活，则CylinD1持续高表达，CylinD1是细胞周期调节的正性调控因子，其含量及活化程度在细胞增殖周期卡点G1/S转换过程中起限速作用，过度表达的CylinD1蛋白促进G1/S期的转换从而加速肿瘤的发生进程〔6〕，其表达越强，分化越差，临床分期愈趋向晚期。本研究结果提示在肿瘤多步骤、多阶段的发生进程中，过度表达的CylinD1蛋白促进G1/S期的转换从而加速肿瘤的发生进程，其表达越强，分化越差，临床分期愈趋向晚期。

细胞周期的进行依赖于ERK-1的持续激活和核内的滞留〔7〕，ERK-1被激活后迅速穿过核膜，进入细胞核内后，激活核转录因子NF-κB，使CylinD1增多，促进细胞分裂增殖，ERK-1结合成核转录因子激活蛋白-1(AP-1)，与myc基因旁的特异的DNA序列结合，从而启动转录。最终的目的是诱导Cylin D1的表达和活性，促进细胞周期由G1期向S期转化，导致细胞的异常增生〔8〕，两者在子宫内膜癌中的联合研究报道不多，本研究说明ERK-1也可能通过上述过程与CylinD1相互协同在子宫内膜癌的发生发展中起到作用。

总之，子宫内膜癌组织中ERK-1和CylinD1处于过表达状态，与子宫内膜癌的发生、发展和转移密切相关。二者表达呈正相关，说明其肿瘤侵袭转移过程中存在某种相互调节作用。联合检测子宫内膜癌组织中二者的表达情况有助于指导临床治疗，为子宫内膜癌防治探索新思路。

4 参考文献

1Parenti A，Leo G，Porzionato A,etal.Expression of survivin，p53，and caspase 3 in Barrett′s esophagus carcinogenesis〔J〕.Hum Pathol，2006;37(1):16-22.

2Katsuji Yoshioka.Scaffold proteins in mammalian MAP kinase cascades〔J〕.J Biochem，2004；135(6):657-61.

3鲍 伟,蔡 斌,杨懿霞,等.子宫内膜癌中ERK1/2信号转导通路与雌、孕激素受体的相关性〔J〕.上海交通大学学报(医学版)，2009；29(1):5-8.

4Rice Pl,Goldberg RJ,Ray EC,etal.Inhibition of extracellular signal-regulated kinase 1/2 phosphorylation and induction of apoptosis by sulindac metabolites〔J〕.Cancer Res，2001；61(4):1541-7.

5Blagosklonny MV，Pardee AB.The restriction point of the cell cycle〔J〕. Cell Cycle，2002；1(2):103-10.

6Krecicki T，Smigiel R，Fraczek M,etal.Studies of the cell cycle regulatory proteins P16，CylinD1 and retinoblastoma protein in laryngeal carcinoma tissue〔J〕.J Laryngol Otol,2004；118(9)：676-80.

7Ravenhall C,Guida E,Harris T,etal.The importance of ERK activity in the regulation of CylinD1 levels and DNA synthesis in human cultured airway smooth muscle〔J〕.Br J Phamacol，2000；131(1):17-28.

8Mizumoto Y，Kyo S，Mori N,etal.Activation of ERK1/2 occurs independently of KRAS or BRAF status in endometrial cancer and is associated with favorable prognosis〔J〕.Cancer Sci,2007；98(5):652-8.