胃癌组织中高尔基体磷酸化蛋白的表达及临床意义

谢若腾 黄荣富 庄雪瑜

(福建医科大学附属第二医院检验科，福建 泉州 362000)

高尔基体磷酸化蛋白3(GOLPH3)是一种位于高尔基体反面的基质蛋白，其主要功能是参与细胞内蛋白质的转运与分选，并且可以通过对雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的调控，影响多种实体肿瘤细胞的生长和分化〔1〕。虽然其具体机制尚不明确，但已有证据证明GOLPH3在细胞癌变中的囊泡转运和糖基化中起重要作用〔2〕。因此mTOR这一信号通路的调节可以通过组织中GOLPH3的水平来反映，检测GOLPH3在组织的表达水平可以预测肿瘤的预后。已有研究表明，GOLPH3在肾癌、乳腺癌、卵巢癌、食管癌、前列腺癌等多种恶性肿瘤中都有过表达〔3～9〕，且与其预后相关，但迄今为止，尚未有报道GOLPH3在人胃癌组织中的表达及临床意义。本研究拟探讨人胃癌组织中GOLPH3的表达及临床意义。

1 材料与方法

1.1标本来源 收集2009年5月至2012年7月在我院接受手术切除、并经病理证实为胃癌的组织标本，所有病例均未行术前化疗或放疗。入组病例共40例，年龄33～67岁，中位年龄56岁。癌旁组织定义为距离肿瘤组织超过2 cm以上的胃黏膜组织。取所有胃癌患者的癌组织和相应的癌旁组织，立即加入少许液氮，然后移至经DEPC水处理过的EP管，放入-20℃冰箱保存，供提取RNA备用。

1.2材料试剂 miRcute miRNA提取分离试剂盒、第一链合成试剂盒、荧光定量检测试剂盒及GOLPH3、miRNA检测引物等均由天根公司提供，7500Real-PCR仪购自Applied Biosystems公司，DU800型分光光度计购自Beckman公司。

1.3方法

1.3.1总RNA 的提取及逆转录 组织标本在液氮中研磨后，首先按Trizol试剂说明书抽提总RNA，cDNA的获取用逆转录试剂盒。

1.3.2Real-time PCR检测胃癌及癌旁组织中GOLPH3的表达 提取总RNA，参照AMV逆转录试剂盒说明进行逆转录，在20 μl体系中加2 μg总RNA进行cDNA的合成。Real-time PCR采用2×SYBR Green PCR Master Mix，引物浓度0.4 nmol/L，取适量cDNA作为模板，15 μl体系进行扩增。每个待测样本设置3个平行样。合成用于特异扩增GOLPH3的前后引物，以GAPDH作为内参，PCR反应在实时定量PCR反应仪上进行。

1.4统计学方法 应用SPSS16.0软件，计量资料采用t检验，计数资料采用χ2检验。

2 结 果

2.1GOLPH3在胃癌及癌旁组织中的表达 40例胃癌标本中有34例GOLPH3相对于癌旁组织表达升高，6例相对于癌旁组织表达降低。胃癌组织中GOLPH3 mRNA表达总体水平(7.634±1.476)明显高于相应的癌旁组织(1.113±0.458)(P<0.001)。

2.2GOLPH3表达水平与胃癌临床病理特征关系 GOLPH3的表达水平与肿瘤大小、分化程度、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期相关(均P<0.05)。见表1。

表1 GOLPH3表达水平与胃癌临床病理特征的关系(n)

3 讨 论

近10余年来，肿瘤的影像诊断、放化疗及手术技能等取得了很大的进步。尽管如此，肿瘤患者的预后及生活质量却未有太多的改善。传统的治疗方案效果不甚理想，人们开始把研究重点转移到肿瘤细胞分子方面，致力于开发肿瘤靶向药物或者肿瘤疫苗。已有研究证明GOLPH3在多种肿瘤组织高表达，说明GOLPH3的高表达参与了肿瘤的发生和发展，GOLPH3有望成为肿瘤治疗的一个新靶点。

GOLPH3是定位于高尔基体上的一个新的致癌基因，它与多种恶性肿瘤的发生发展、增殖、分化及凋亡有关。与其他癌基因不同的是它同时还参与调节癌细胞对抗肿瘤药物的敏感性。《自然》杂志上2009年6月发表了一篇关于GOLPH3在癌症中信号通路的研究进展，该研究在整个基因组范围内对多种实体肿瘤进行筛选，发现GOLPH3可能是一个新的致癌基因〔10〕。该研究采用基因敲除的方法，并且通过外源性增强基因的表达进行体内、外实验发现GOLPH3能与TOR信号通路上的靶位相互作用，促进正常细胞的异常生长和增殖；同时GOLPH3参与调控mTOR的信号通路，从而调节肿瘤细胞对雷帕霉素的敏感性。因此GOLPH3被推测有可能作为抗肿瘤药物的有效靶点。GOLPH3参与细胞癌变的机制可能是通过调控mTOR的信号通路，影响受体循环和糖基化作用位点及蛋白质转运等，从而影响细胞的正常生理代谢如生长、增值及凋亡，最终导致癌细胞的产生〔11,12〕。本研究发现GOLPH3在胃癌组织呈高表达，且与肿瘤的恶性程度有关，表明GOLPH3可能在胃癌的发生发展起重要作用，而且与胃癌的预后有关。

本研究尚有一些不足之处：(1)本研究为单中心、回顾性研究，病例数相对较少；(2)虽然收集胃癌组织和相应的癌旁组织，但并未包含正常健康个体的胃组织作进一步对照；(3)病例数较少，未作相应的预后生存分析。另外，本实验未能进一步从蛋白水平分析GOLPH3的表达差异，后续的研究将会完善补充这一点。

4 参考文献

1Hohenberger P, Gretschel S. Gastric cancer〔J〕. Lancet,2003;362(9380):305-15.

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6Ma Y, Ren Y, Zhang X,etal. High GOLPH3 expression is associated with a more aggressive behavior of epithelial ovarian carcinoma〔J〕. Virchows Arch,2014;464(4):443-52.

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8Hua X, Yu L, Pan W,etal. Increased expression of Golgi phosphoprotein-3 is associated with tumor aggressiveness and poor prognosis of prostate cancer〔J〕. Diagn Pathol,2012;7(1):127.

9Zhou J, Xu T, Qin R,etal. Overexpression of Golgi phosphoprotein-3 (GOLPH3) in glioblastoma multiforme is associated with worse prognosis〔J〕. J Neurooncol,2012;110(2):195-203.

10Scott KL, Kabbarah O, Liang MC,etal. GOLPH3 modulates mTOR signalling and rapamycin sensitivity in cancer〔J〕. Nature,2009;459(7250):1085-90.

11Li H, Guo L, Chen SW,etal. GOLPH3 overexpression correlates with tumor progression and poor prognosis in patients with clinically N0 oral tongue cancer〔J〕. J Transl Med,2012;10(1):168.

12Scott KL, Chin L. Signaling from the Golgi: mechanisms and models for Golgi phosphoprotein 3-mediated oncogenesis〔J〕. Clin Cancer Res,2010;16(8):2229-34.