微生态制剂噬菌28对金鲫鱼血液指标的影响
2014-09-10陈景明
陈景明
摘要：利用不同剂量的微生态制剂（噬菌28）添加在饲料中饲养金鲫鱼8 d、16 d、24 d，测定其与鱼体生长和健康相关的血液指标。结果显示：试验组红细胞压积、红细胞数、血红蛋白含量等血液指标相对于对照组均有明显变化，且随着微生态制剂添加量的增加和饲喂时间的延长而提高，表明噬菌28能改善金鲫鱼的血液指标，提高新陈代谢，促进鱼类健康生长。
关键词：微生态制剂；金鲫鱼；血液指标
20 世纪中叶，抗生素的发现以及化学抗菌物质合成的成功，作为饲料添加剂被广泛利用，特别在畜牧生产和动物保健中发挥了重要作用。随着使用率的增多，弊端也越来越得到了人们广泛的认识，世界各国科学家正在努力寻求和开发无毒副作用的新型饲料添加剂。微生态制剂，又名活菌制剂或生菌剂［1］，具有无毒副作用、无残留污染、不产生抗药性和成本较低等特点，是理想的抗生素替代品［2-3］。微生态制剂以其绿色安全、无毒副作用、无残留的优点逐步成为抗生素类添加剂替代品，已广泛应用于猪、鸡、鸭、牛、羊、兔以及水产养殖等各个方面，在畜牧业生产中的作用越来越凸显。
最早对益生菌(Probiotics)定义的是1974年Parker［4］，认为益生菌是“有助于肠道菌群平衡的微生物和物质(可能含有抗生素)”。而首次将益生菌应用于水产养殖的则是Kozasa［5］，他用了1株芽孢杆菌(从土壤中分离的)处理日本鳗鲡，发现能抑制或杀灭爱德华氏菌，从而降低了死亡率。此后，有关益生菌的研究开始引起人们的兴趣，越来越多的成果见诸报端，对益生菌的理解也得到了相应的发展。Moriarty把益生菌的含义扩展为“一类添加到养殖水体中的有益微生物”［6］。“微生态制剂”［7］、微生态调节剂等新的名词不断出现。某些微生态制剂如噬菌蛭弧菌微生物生态制剂，具有独特的“寄生”和“溶解”有害细菌的生态效应［8］。有关微生态制剂对鱼类血液指标影响的研究少见报道。本试验旨在了解添加微生态制剂喂养金鲫鱼后血液生理指标的变化情况，为合理配制饲料，改善鱼的体质，实现鱼类的健康养殖积累一些基础资料。
1材料与方法
1.1试验材料
1.1.1试验鱼将48尾体重相近的金鲫鱼（购买于泉州东街鱼类市场），随机分为3个试验组和1个对照组，各组分别放养12尾，各组均使用规格相同的塑料养殖箱养殖。并配有供氧设施。
1.1.2噬菌28主要成分：噬菌蛭弧菌＞5.6×107puf/mL，单胞菌噬菌体＞4.7×108puf/mL，净水因子＞5 mg/L，促生长因子＞4 mg/L。由南京巨豹生物工程有限公司生产。
1.1.3试验试剂赫姆氏液、白细胞稀释液、0.1 mol/L盐酸、氯化钠溶液、抗凝剂（3.8%的柠檬酸钠）。
1.1.4饲喂方法将微生态制剂按饲料重的比例量取，对照组不加，试验组1（5 mL/kg）、试验组2（10 mL/kg）、试验组3（20 mL/kg）喷于饲料上，晾干投喂，每天早上10：00、傍晚18：00左右投喂两次。投饵量为金鲫鱼体重的2%，以鱼0.5 h内吃完并略有剩余为标准，试验时间8 d为一个间段，共三个间段，试验总时间为24 d。
1.2试验方法
1.2.1样本处理在试验的第8 d、16 d、24 d，分别采用鳃部取血，进行红细胞压积、白细胞数、红细胞数、血红蛋白含量、红细胞渗透脆性等5个血液指标的测定。
1.2.2测定指标与方法
白细胞数：用白细胞稀释液，将血样稀释20倍后，用血细胞计数板计数。
红细胞数：以赫姆氏液为稀释液，将血样稀释200倍后，用血细胞计数板计数。
血红蛋白含量：沙利氏法。
红细胞压积：将抗凝血装入带刻度的离心管中，再以3 000 r/min的速度离心30 min，最后计算红细胞压积之百分数。
红细胞渗透脆性：试管稀释法［9］。
1.2.3数据处理原始数据经EXCEL处理后，再制作数据表。
2结果与分析
2.1噬菌28对血液指标的影响情况
表1、2、3显示，添加不同浓度的噬菌28均能使金鲫鱼的血液指标得到优化，特别是血红蛋白含量、红细胞数、红细胞压积等指标影响较大，而且量效关系明显，而红细胞的脆性随着噬菌28在饲料中添加量的增加，则逐渐降低。
2.2噬菌28在不同天数对血液指标的影响情况
表1、2、3同时也表明，同一试验组添加相同浓度的噬菌28在饲喂时间增加时，也能使金鲫鱼的血液指标得到进一步优化，血红蛋白含量、红细胞数、红细胞压积等指标受影响较明显。并且随着饲喂噬菌28的时间延长，时效关系明显，而红细胞的渗透脆性随着饲喂噬菌28时间的延长，也逐渐降低。
表1噬菌28在饲喂8 d后对金鲫鱼血液生理指标的影响
测定项目
对照组
试验组1
试验组2
试验组3
红细胞数/万·mm-3
104
111
114
118
白细胞数/万·mm-3
5.6
5.2
5.0
4.8
血红蛋白/g·100 mL-1
5.2
5.3
5.5
5.8
红细胞脆性/NaCl%
开始溶血
0.48～0.45
0.47～0.44
0.45～0.43
0.42～0.40完全溶血
0.36～0.33
0.35～0.33
0.32～0.29
0.31～0.28
红细胞比容/%
26
28
31
34
表2噬菌28在饲喂16 d后对金鲫鱼血液生理指标的影响
测定项目
对照组
试验组1
试验组2
试验组3
红细胞数/万·mm-3
105
112
115
123
白细胞数/万·mm-3
5.8
5.2
5.1
4.7
血红蛋白/g·100 mL-1
5.2
5.5
5.9
6.8
红细胞脆性/NaCl%
开始溶血
0.48～0.44
0.46～0.44
0.44～0.42
0.40～0.38完全溶血
0.36～0.32
0.34～0.32
0.33～0.28
0.31～0.26
红细胞比容/%
27
29
31
35
表3噬菌28在饲喂24 d后对金鲫鱼血液生理指标的影响
测定项目
对照组
试验组1
试验组2
试验组3
红细胞数/万·mm-3
105
114
117
126
白细胞数/万·mm-3
6.0
5.3
5.2
4.8
血红蛋白/g·100 mL-1
5.1
5.7
6.1
7.1
红细胞脆性/NaCl%
开始溶血
0.48～0.44
0.46～0.42
0.44～0.40
0.40～0.34完全溶血
0.36～0.32
0.34～0.30
0.32～0.26
0.30～0.24
红细胞比容/%
26
30
33
37
3结论与讨论
3.1噬菌28与血液生理指标
鱼类血液学指标受多种因素的影响而有较大的差异，因此被广泛地用来评价鱼类的健康状况、营养状况以及对环境的适应状况，是重要的生理、病理和毒理学指标。鱼类血液与机体的代谢、营养状况以及疾病有着密切的关系。雌鲫鱼饥饿半个月，红细胞数下降，但当饵料充足，营养条件好时血红蛋白含量明显增高［10］。沈晓民等在研究“团头鲂血液指标与水环境的关系”时发现，鱼类缺氧代偿能力的获得主要靠增加红细胞和血红蛋白的数量［11］。
本试验在金鲫鱼的饲料中添加了微生态制剂噬菌28，试验鱼的血液中的红细胞数、血红蛋白含量、红细胞压积等指标的量效关系明显（见表1、2、3）。
3.2噬菌28与鱼类健康生长
本试验结果也证明：当噬菌28进入鱼体肠道后，改善了鱼体内环境以及消化和吸收的状态，明显改善了试验鱼的血液指标，特别是血红蛋白含量和血细胞数的增加，保证了鱼体组织对二氧化碳的排除和氧气的需求，促进了试验鱼的健康生长。
同时，噬菌28杀菌力强，可以清除动物体内及水中的假单胞菌、气单胞菌、弧菌等多种细菌，裂解率可达97%以上。有报道称将不同数量的蛭弧菌投放于水族箱中，用浸泡法对鲤鱼进行人工感染嗜水气单胞菌试验，蛭弧菌对嗜水气单胞菌有较强的裂解和净化作用，对水中的氨氮有一定的降解作用［12］。张梁、周维禄［13］用添加蛭弧菌的饲料喂养草鱼，能够显著降低饵料系数，加快草鱼的生长发育。同时明显影响各项免疫指标，免疫力增强。
本试验结果表明，噬菌28能使鱼体血液指标得到改善，红细胞脆性明显降低，这对于改善红细胞膜的组成成分和膜的流动性，调节机体微生态平衡，促进新陈代谢具有积极意义，在维持机体正常生理功能及正常代谢水平方面有非常重要的作用。
参考文献：
［1］ Sal minen S, OuweSand A,BennoYeta1.Probiotics:How Should bfined［J］.Trends Food Sci- teeh ,1999,10 :107-110
［2］ 何明清.我国动物微生态制剂的起源、发展战略及应用前景［J］.中国微生态学杂志，2001(3)：166-167
［3］ 王建业，王永坤.微生物分类及益生菌必备条件.动物微生态研究进展［M］.北京：中国农业大学出版社，2000：1-24
［4］ Parker R B. Probiotics-The other half of the antibiotics story［J］. Anim Nutr Heal,1974,29:4-8.
［5］ Kozasa M. Toyocerin(Bacillus toyoi) as growth promoter for animal feeding［J］. Microbiol Aliment Nutr,1986, 4:121-135
［6］ Moriarty D J W.Control of lu minous vibrio species in penaeid aquaculture ponds［J］.Aqua,1998,164(1/4):351-358
［7］ 薛恒平.微生态制剂浅析［J ］.饲料工业，1996，17(1)：30-34
［8］ 秦生巨. 噬菌蛭弧菌及其微生物生态制剂在水生动物养殖上的应用［J］.水产科技情报, 2007, 34 (2)：79-81.
［9］ 解景田，赵静.生理学实验（第2版）［M］.北京：高等教育出版社，2002:62-65
［10］ 林浩然. 鱼类生理学［M］.广东：广东高等教育出版社，1999：82-87
［11］ 沈晓民，童合一，华苒. 团头鲂血液指标与水环境的关系［J］. 生态学报，1991，11(1)：92-94
［12］ 杨莉，王秀茹.蛭弧菌对鲤感染嗜水气单胞菌预防效果的观察［J］.大连水产学院学报，2000，15(4)：288-292
［13］ 张梁，周维禄.蛭弧菌对草鱼生长及免疫力的影响［J］.粮食与饲料工业，2005（4）：36-37
Effect of the Microbial ecological agents on the Blood Parameters of Carasslus auratus
CHEN Jing ming
（Quanzhou Preschool Education College,Quanzhou Fujian 362000）
Abstract：Carasslus auratus were fed different amounts of Microbial ecological agents(phage 28) as additive of the fodder 8 days,16 days,24 days,and the blood parameters related to their growth and health were measured. Red blood cell number (RBC), haemoglobin content(Hb), hemotocrit(Ht) in the treatment groups were superior to those of the control group and with increasing amount of the Microbial ecological agentsadditive and the fed time.Thus,the result demonstrated that Microbial ecological agents can improve blood parameters of Carasslus auratus, enhance their metabolism and expedite their healthy growth.
Key words：Microbial ecological agents; Carasslus auratus; parameter
本试验在金鲫鱼的饲料中添加了微生态制剂噬菌28，试验鱼的血液中的红细胞数、血红蛋白含量、红细胞压积等指标的量效关系明显（见表1、2、3）。
3.2噬菌28与鱼类健康生长
本试验结果也证明：当噬菌28进入鱼体肠道后，改善了鱼体内环境以及消化和吸收的状态，明显改善了试验鱼的血液指标，特别是血红蛋白含量和血细胞数的增加，保证了鱼体组织对二氧化碳的排除和氧气的需求，促进了试验鱼的健康生长。
同时，噬菌28杀菌力强，可以清除动物体内及水中的假单胞菌、气单胞菌、弧菌等多种细菌，裂解率可达97%以上。有报道称将不同数量的蛭弧菌投放于水族箱中，用浸泡法对鲤鱼进行人工感染嗜水气单胞菌试验，蛭弧菌对嗜水气单胞菌有较强的裂解和净化作用，对水中的氨氮有一定的降解作用［12］。张梁、周维禄［13］用添加蛭弧菌的饲料喂养草鱼，能够显著降低饵料系数，加快草鱼的生长发育。同时明显影响各项免疫指标，免疫力增强。
本试验结果表明，噬菌28能使鱼体血液指标得到改善，红细胞脆性明显降低，这对于改善红细胞膜的组成成分和膜的流动性，调节机体微生态平衡，促进新陈代谢具有积极意义，在维持机体正常生理功能及正常代谢水平方面有非常重要的作用。
参考文献：
［1］ Sal minen S, OuweSand A,BennoYeta1.Probiotics:How Should bfined［J］.Trends Food Sci- teeh ,1999,10 :107-110
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［6］ Moriarty D J W.Control of lu minous vibrio species in penaeid aquaculture ponds［J］.Aqua,1998,164(1/4):351-358
［7］ 薛恒平.微生态制剂浅析［J ］.饲料工业，1996，17(1)：30-34
［8］ 秦生巨. 噬菌蛭弧菌及其微生物生态制剂在水生动物养殖上的应用［J］.水产科技情报, 2007, 34 (2)：79-81.
［9］ 解景田，赵静.生理学实验（第2版）［M］.北京：高等教育出版社，2002:62-65
［10］ 林浩然. 鱼类生理学［M］.广东：广东高等教育出版社，1999：82-87
［11］ 沈晓民，童合一，华苒. 团头鲂血液指标与水环境的关系［J］. 生态学报，1991，11(1)：92-94
［12］ 杨莉，王秀茹.蛭弧菌对鲤感染嗜水气单胞菌预防效果的观察［J］.大连水产学院学报，2000，15(4)：288-292
［13］ 张梁，周维禄.蛭弧菌对草鱼生长及免疫力的影响［J］.粮食与饲料工业，2005（4）：36-37
Effect of the Microbial ecological agents on the Blood Parameters of Carasslus auratus
CHEN Jing ming
（Quanzhou Preschool Education College,Quanzhou Fujian 362000）
Abstract：Carasslus auratus were fed different amounts of Microbial ecological agents(phage 28) as additive of the fodder 8 days,16 days,24 days,and the blood parameters related to their growth and health were measured. Red blood cell number (RBC), haemoglobin content(Hb), hemotocrit(Ht) in the treatment groups were superior to those of the control group and with increasing amount of the Microbial ecological agentsadditive and the fed time.Thus,the result demonstrated that Microbial ecological agents can improve blood parameters of Carasslus auratus, enhance their metabolism and expedite their healthy growth.
Key words：Microbial ecological agents; Carasslus auratus; parameter
本试验在金鲫鱼的饲料中添加了微生态制剂噬菌28，试验鱼的血液中的红细胞数、血红蛋白含量、红细胞压积等指标的量效关系明显（见表1、2、3）。
3.2噬菌28与鱼类健康生长
本试验结果也证明：当噬菌28进入鱼体肠道后，改善了鱼体内环境以及消化和吸收的状态，明显改善了试验鱼的血液指标，特别是血红蛋白含量和血细胞数的增加，保证了鱼体组织对二氧化碳的排除和氧气的需求，促进了试验鱼的健康生长。
同时，噬菌28杀菌力强，可以清除动物体内及水中的假单胞菌、气单胞菌、弧菌等多种细菌，裂解率可达97%以上。有报道称将不同数量的蛭弧菌投放于水族箱中，用浸泡法对鲤鱼进行人工感染嗜水气单胞菌试验，蛭弧菌对嗜水气单胞菌有较强的裂解和净化作用，对水中的氨氮有一定的降解作用［12］。张梁、周维禄［13］用添加蛭弧菌的饲料喂养草鱼，能够显著降低饵料系数，加快草鱼的生长发育。同时明显影响各项免疫指标，免疫力增强。
本试验结果表明，噬菌28能使鱼体血液指标得到改善，红细胞脆性明显降低，这对于改善红细胞膜的组成成分和膜的流动性，调节机体微生态平衡，促进新陈代谢具有积极意义，在维持机体正常生理功能及正常代谢水平方面有非常重要的作用。
参考文献：
［1］ Sal minen S, OuweSand A,BennoYeta1.Probiotics:How Should bfined［J］.Trends Food Sci- teeh ,1999,10 :107-110
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［3］ 王建业，王永坤.微生物分类及益生菌必备条件.动物微生态研究进展［M］.北京：中国农业大学出版社，2000：1-24
［4］ Parker R B. Probiotics-The other half of the antibiotics story［J］. Anim Nutr Heal,1974,29:4-8.
［5］ Kozasa M. Toyocerin(Bacillus toyoi) as growth promoter for animal feeding［J］. Microbiol Aliment Nutr,1986, 4:121-135
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［7］ 薛恒平.微生态制剂浅析［J ］.饲料工业，1996，17(1)：30-34
［8］ 秦生巨. 噬菌蛭弧菌及其微生物生态制剂在水生动物养殖上的应用［J］.水产科技情报, 2007, 34 (2)：79-81.
［9］ 解景田，赵静.生理学实验（第2版）［M］.北京：高等教育出版社，2002:62-65
［10］ 林浩然. 鱼类生理学［M］.广东：广东高等教育出版社，1999：82-87
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［12］ 杨莉，王秀茹.蛭弧菌对鲤感染嗜水气单胞菌预防效果的观察［J］.大连水产学院学报，2000，15(4)：288-292
［13］ 张梁，周维禄.蛭弧菌对草鱼生长及免疫力的影响［J］.粮食与饲料工业，2005（4）：36-37
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CHEN Jing ming
（Quanzhou Preschool Education College,Quanzhou Fujian 362000）
Abstract：Carasslus auratus were fed different amounts of Microbial ecological agents(phage 28) as additive of the fodder 8 days,16 days,24 days,and the blood parameters related to their growth and health were measured. Red blood cell number (RBC), haemoglobin content(Hb), hemotocrit(Ht) in the treatment groups were superior to those of the control group and with increasing amount of the Microbial ecological agentsadditive and the fed time.Thus,the result demonstrated that Microbial ecological agents can improve blood parameters of Carasslus auratus, enhance their metabolism and expedite their healthy growth.
Key words：Microbial ecological agents; Carasslus auratus; parameter
