FGFR4蛋白表达与胃癌临床病理特征和预后的关系

陈 昊 沈艳莹 刘佳骅 张子臻 沈丹平 倪醒之*

上海交通大学医学院附属仁济医院普外科1(200127) 病理科2

胃癌是世界范围内病死率第二位的肿瘤[1]，目前胃癌的靶向治疗已取得一定成效。成纤维细胞生长因子受体4(fibroblast growth factor receptor 4, FGFR4)属酪氨酸激酶受体家族，与肿瘤生长、分化、迁徙相关[2]。在乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌等常见肿瘤中FGFR4蛋白过表达，且FGFR4基因上调与乳腺癌的化疗耐药有关，越来越多的研究证实成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor, FGF)途径是肿瘤靶向治疗的潜在靶点[3]。目前FGFR4在胃癌中的表达及其作用的研究相对较少。本研究通过回顾性分析182例可切除胃癌标本中FGFR4的表达情况，旨在探索其与胃癌临床病理特征和预后的关系，从而为FGFR4途径治疗胃癌提供一定理论依据。

对象与方法

一、标本来源

选取2006年8月～2009年2月于上海交通大学医学院附属仁济医院普外科行胃癌根治术的病例182例，术后病理确诊为胃腺癌，术前均未接受过放、化疗或分子靶向治疗。182例胃癌患者中，男131例，女51例；年龄28～85岁，中位年龄62岁；残胃癌7例，贲门癌32例，胃体癌71例，胃窦癌72例；低分化82例，高分化100例。根据美国癌症联合委员会胃癌TNM分期(第7版，2010年)，Ⅰ期37例，Ⅱ期47例，Ⅲ期73例，Ⅳ期25例。随访时间由术后起计，截止至2014年2月底。本研究方案由仁济医院伦理委员会审批通过，患者取得知情同意。

二、免疫组化法

石蜡包埋组织块4 μm厚切片，37 ℃干燥过夜，56 ℃焙烤30 min，二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化。然后99 ℃抗原修复液修复40 min，室温冷却20 min，过氧化物酶阻断剂作用5 min。每张切片滴加FGFR4 抗体sc-124(工作浓度1∶500，购自Santa Cruz)100 μL，室温孵育30 min，TBST洗涤5 min×2次；室温与二抗反应30 min，TBST洗涤5 min×2次；DAB染色，梯度乙醇脱水，二甲苯清洗，DPX封片。

结果判断：根据Ye等[4]提出的评分根据，细胞质中FGFR4染色评分可分为：0分，无染色；1分，浅染色；2分，中度染色；3分，高度染色。0～2分为FGFR4蛋白表达阴性，3分为阳性。FGFR4染色评分由两位经验丰富的病理科医师共同判定，如有异议，由第三位医师协助判定。

三、统计学分析

应用SPSS 19.0统计软件。不同临床病理特征组间FGFR4阳性率的比较采用χ2检验，生存分析采用Kaplan-Meier法，生存曲线的比较采用log rank检验，P<0.05为差异有统计学意义。

结 果

一、FGFR4蛋白表达

免疫组化结果显示，182例胃癌患者中81例FGFR4阳性(见图1)，101例为阴性，FGFR4阳性表达率为44.5%。

图1 免疫组化结果示FGFR4 阳性(×200)

二、FGFR4蛋白表达与临床病理特征的关系

不同性别、年龄、肿瘤部位、分化程度、大体分型、TNM分期、神经侵犯、血管侵犯亚组间FGFR4蛋白表达阳性率的差异均无统计学意义(P>0.05)(见表1)。

表1 FGFR4蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系n (%)

*7例残胃癌未统计在内

三、FGFR4与预后的关系

182例胃癌患者中，17例失访，随访率为90.7%。获随访者的中位生存期为44个月(0～60个月)。FGFR4阳性组中位生存期为31个月，5年生存率为37.8%；FGFR4阴性组中位生存期为49个月，5年生存率为41.9%，组间相比差异无统计学意义(P=0.324 0)。

在高分化胃癌中，FGFR4阳性组和阴性组5年生存率分别为47.0%和62.1%，组间差异有统计学意义(χ2=4.361 3,P=0.036 8)(见图2)；在T1+T2期胃癌中，FGFR4阳性组5年生存率显著低于阴性组(54.5%对78.6%；χ2=4.163 5,P=0.041 3)(见图3)；在伴有远处转移的胃癌中，FGFR4阳性组的中位生存期显著低于阴性组(5个月对15个月；χ2=4.195 6,P=0.040 5)(见图4)。表明在高分化、T1+T2期以及伴有远处转移的胃癌中，FGFR4阳性患者预后差于FGFR4阴性患者。而在不同性别、年龄、肿瘤部位、TNM分期、神经侵犯、血管侵犯亚组间，FGFR4阳性组的中位生存期和5年生存率与FGFR4阴性组相比差异均无统计学意义(见表2)。

图2 高分化胃癌中FGFR4阳性组与阴性组Kaplan-Meier生存曲线比较

图3 T1+T2期胃癌中FGFR4阳性组与阴性组Kaplan-Meier生存曲线比较

图4 伴有远处转移胃癌中FGFR4阳性组与阴性组Kaplan-Meier生存曲线比较

讨 论

FGFR4为FGF家族成员，在乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、肝癌等肿瘤中，FGFR4可在组织修复、胚胎发育等重要过程中发挥作用，从而影响肿瘤的血管生成和分化。体外细胞实验发现，FGFR4失活或FGFR4基因缺失，可导致肿瘤增殖减缓[5]。

Takaishi等[6]在人胃癌细胞中发现FGFR4表达。Ye 等[7]的实验进一步发现，胃癌组织FGFR4蛋白表达显著高于正常胃黏膜组织。FGFR4可通过调节细胞增殖和凋亡介导胃癌的发展[4]。

本研究发现，FGFR4阳性表达与性别、年龄、肿瘤部位、分化程度、TNM分期等常见临床病理特征均无明显关系。这与肝癌和结直肠癌中的研究[8-9]结果一致。但最近一项研究[7]表明胃癌中FGFR4蛋白表达与p21、人表皮生长因子受体2(human epidermal receptor 2, HER-2)以及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)的表达存在关联，而这些蛋白均与肿瘤增殖和侵袭相关，进一步提示FGFR4表达与胃癌的进展相关。

FGFR4蛋白表达对肿瘤预后的影响仍存在争议。Meijer等[10]认为FGFR4表达是影响乳腺癌患者预后的独立因素，并可能是靶向治疗的潜在靶点； Thussbas等[11]发现对于存在淋巴结转移的乳腺癌患者，FGFR4的Arg388变异与无病生存期以及总体生存期均相关。Gowardhan等[12]对前列腺癌和良性前列腺增生组织中FGFR4蛋白表达进行比较发现，FGFR4蛋白表达在前列腺癌中明显上调，并预示患者的预后相对较差。

表2 FGFR4蛋白表达与胃癌预后的关系

*7例胃癌未统计在内

而FGFR4对胃癌预后影响的研究相对较少。Ye等[7]对94例胃癌的研究发现FGFR4表达与胃癌预后无关。本研究对182例胃癌患者进行随访，并未发现FGFR4表达与胃癌的总体预后相关。

本研究还发现在高分化胃癌、T1+T2期胃癌或伴有远处转移的胃癌中，FGFR4阳性组的预后(5年生存率或中位生存期)均明显差于阴性组。其原因可能为胃癌预后由多方面因素决定，FGFR4对胃癌预后的影响较微弱，使FGFR4对预后的影响无法表现或表现得不够稳定，导致不同研究的结果相互矛盾；但在预后相对较好的胃癌亚组，如高分化以及T1和T2期胃癌中，FGFR4阳性表达更容易表现出对预后的不良影响。

胃癌中FGFR4蛋白表达和基因扩增均明显增加[4]。FGFR4信号通路开放后通过活化蛋白激酶上调下游主要的抗凋亡因子Bcl-xL的表达，导致肿瘤细胞生存时间的延长以及对化疗药物的耐药[13]。Turkington等[14]的研究发现，FGFR4表达与结直肠癌奥沙利铂和5-Fu的耐药相关；Roidl等[15]的研究结果显示FGFR4在乳腺癌阿霉素和环磷酰胺的耐药中亦发挥重要作用。近年胃癌的靶向治疗备受关注，自ToGA试验后，曲妥珠单抗开始用于HER-2阳性胃癌患者的一线治疗，更多靶向治疗的临床实验仍在进行中[16]。FGFR4是FGF通路中的重要蛋白，参与肿瘤细胞增殖和分化的调控，并且是部分胃癌亚组的预后影响因素，是胃癌靶向治疗的潜在靶点。

总之，FGFR4表达尚不能作为独立指标判断胃癌预后，但在高分化胃癌、T1+T2期胃癌或伴有远处转移的胃癌中，FGFR4阳性表达可能是影响预后的危险因素。但本研究结论尚需行进一步大规模前瞻性的研究证实。

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