毛细管气相色谱法测定甲磺酸伊马替尼中残留有机溶剂

严拯宇，刘新颖，王瑞，廖声华

（中国药科大学理学院，江苏 南京211198）

毛细管气相色谱法测定甲磺酸伊马替尼中残留有机溶剂

严拯宇*，刘新颖，王瑞，廖声华**

（中国药科大学理学院，江苏 南京211198）

目的：建立可同时测定甲磺酸伊马替尼原料药中甲醇、乙醇和N′N-二甲基甲酰胺（DMF）等3种残留有机溶剂的毛细管气相色谱法。方法：采用WondaCAP WAX毛细管柱为色谱柱，程序升温，N2为载气，载气流速为4.0 mL • min-1，氢火焰离子化检测器，检测器温度为250 ℃，进样口温度为200 ℃，进样量为1.0 μL。以正丁醇为内标，通过内标法计算样品中3种有机溶剂残留量。结果：甲醇、乙醇和DMF在所建立的色谱条件下均能完全分离，分别在2.94～44.11、4.91～73.68和0.084～12.60 mg • L-1的质量浓度范围内线性关系良好（r=0.9940～0.9985），进样精密度（RSD）均小于5.0%（n=6），平均回收率为104.8%～105.8%（RSD＜5.0%，n=9），定量限分别为0.20、0.33和0.08 ng（信噪比为10∶1），检测限分别为0.05、0.11和0.02 ng（信噪比为3∶1）。样品中未检出甲醇和DMF，乙醇含量低于有关限度规定。结论：该方法简便、准确、灵敏、重复性好，可用于甲磺酸伊马替尼原料药中残留有机溶剂的检测。

毛细管气相色谱法；甲磺酸伊马替尼；残留有机溶剂；甲醇；乙醇；N′N-二甲基甲酰胺

甲磺酸伊马替尼（imatinib mesylate，商品名：Glive，格列卫）是由瑞士Novartis（诺华）公司研发的第1代酪氨酸激酶抑制剂，为全球首个获批进入临床应用的肿瘤发生相关信号传导抑制剂[1]。其2001年5月首次在美国上市，用于治疗急变期、加速期或a-干扰素治疗失败的慢性髓性白血病（CML）患者，并于2002年2月又被批准用于治疗不能手术切除或转移的成人恶性胃肠道间质肿瘤(GIST)患者，2008年12月获准用于成人GIST患者肿瘤切除术后的辅助治疗。此外，本品还被美国FDA批准用于治疗费城染色体阳性的急性淋巴细胞白血病[2]。

甲磺酸伊马替尼在其合成和精制过程中，使用了甲醇、乙醇和N′N-二甲基甲酰胺（DMF）等有机溶剂，这些溶剂对人体和环境都具有一定的潜在毒性。按照人用药品注册技术要求国际协调会( ICH) 颁布的Q3C残留溶剂指导原则，DMF和甲醇为二类溶剂（应限制的溶剂），二者限度分别为0.088%和0.3%，而乙醇为三类溶剂（低毒溶剂），限度为0.5%[3]。本文在参照中国药典方法[4]及有关文献的有机溶剂残留测定方法[5-6]基础上，建立毛细管气相色谱法，同时测定甲磺酸伊马替尼原料药中甲醇、乙醇、DMF等残留有机溶剂，并进行方法学研究。

1 材料

1.1 仪器

GC-2014气相色谱仪[配置氢火焰离子化检测器（FID）]，GC solutions工作站（日本SHIMADZU公司）；BP211D 电子天平 (北京赛多利斯公司) 。

1.2 药品和试剂

甲磺酸伊马替尼原料药(中国药科大学医化所提供，批号：20140703、20140705、20140707)；甲醇、乙醇、DMF 、正丁醇均为分析纯，实验用水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：岛津聚乙二醇毛细管柱WondaCAP WAX（30.0 m×530 μm×1.00 μm）；检测器： FID；柱温：初温40 ℃（保持5 min），以30 ℃ · min-1升温至220 ℃（保持4 min）；进样口温度：200 ℃；检测器温度：250 ℃；载气：高纯氮气；流速：4.0 mL · min-1；分流比：5∶1；进样量：1.0 μL。

2.2 溶液制备

各溶剂储备液的配制：取甲醇0.15 g、乙醇0.25 g和DMF 0.044 g，精密称定，分别置于50 mL量瓶中，用水稀释至刻度，即得甲醇、乙醇和DMF储备液。

混合储备液的配制：精密量取甲醇、乙醇和DMF储备液各1 mL，置于10 mL量瓶中，用水稀释至刻度，即可。

内标储备液的配制：取正丁醇0.25 g，精密称定，置于50 mL量瓶中，加入水稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL，置于50 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即可。

混合对照溶液的配制：精密量取混合储备液1 mL置于10 mL量瓶中，加入内标储备液1.0 mL后用水稀释至刻度，摇匀，即可。

供试品溶液的配制：精密称取甲磺酸伊马替尼原料药0.1 g置于10 mL量瓶中，加水适量溶解后，再精密加入内标储备液1.0 mL，用水稀释至刻度，摇匀，即可。

2.3 各溶剂及内标的色谱定位

精密量取各溶剂及内标正丁醇的储备液适量，按“2.1”项下色谱条件，分别进样测定，记录色谱图，确定其保留时间。结果显示，在该色谱条件下，甲醇、乙醇、DMF及正丁醇的保留时间分别为5.61、6.26、10.26及8.84 min。

2.4 系统适应性试验

精密量取混合对照溶液和空白溶剂（水）1.0 μL，按“2.1”项下色谱条件，分别进样测定，记录色谱图（见图1A、1B）。结果表明，混合对照溶液中各溶剂及正丁醇的理论塔板数均大于5 000 ，各相邻峰的分离度均大于1.5，均能完全分离，且溶剂水不干扰测定。

图1 混合对照溶液(A)和空白溶剂(B)的色谱图Figure 1 Chromatograms of mixed reference solution(A) and blank solvent (B)

2.5 线性考察

分别精密量取混合储备液0.10、0.25、0.50、0.75、1.00、1.25、1.50 mL于10 mL 量瓶中，各加入内标储备液1.0 mL，用水稀释至刻度，摇匀，作为系列标准溶液。精密量取各标准溶液 1.0 μL，进样，记录色谱图。分别以混合储备液中各溶剂与内标的峰面积比值 (A)与相应质量浓度(C，mg · L-1) 进行线性回归，结果见表1。

表 1 3种溶剂的回归方程与线性范围（n=6）Table 1 regression equations and linear ranges of 3 solvents

2.6 进样精密度与重复性考察

取“2.5” 项下制备的系列标准溶液中5号溶液，精密量取1.0 μL，连续进样测定6 次，记录色谱图。结果测得，甲醇、乙醇和DMF与内标的峰面积比值的RSD分别为1.3 % 、1.0 % 和3.8 %(n=6) 。表明，该方法进样精密度良好。另取甲磺酸伊马替尼原料药(批号：20140705)6份，按“2.2”项下方法，制备6份供试品溶液，分别进样，记录色谱图，按内标法计算3种有机溶剂残留量。结果，供试品中未检出甲醇和DMF，乙醇平均含量为0.200 2%（RSD=2.8%，n=6）。

2.7 定量限和检测限考察

取各溶剂储备液适量，用水逐级稀释后，精密量取1.0 μL，进样测定。结果，按信噪比为10∶1，测得甲醇、乙醇和DMF的定量限分别为0.20、0.33和0.08 ng；按信噪比为3∶1，测得甲醇、乙醇和DMF的检测限分别为0.05、0.11和0.02 ng。

2.8 回收率试验

取甲磺酸伊马替原料药(批号：20140705)0.1 g若干份，精密称定，置10 mL量瓶中，再分别加入80%、100%和120%限量浓度的各溶剂，加入适量内标储备液，配制低、中、高3个溶剂浓度水平的供试品溶液，每个溶剂浓度配制3份，进样，记录色谱图，计算回收率，结果见表2。

表2 3种溶剂的回收率试验结果Table 2 Results of recovery test of 3 solvents

2.9 稳定性考察

按“2.2”项下方法新鲜配制混合对照溶液，分别于0、2、4、6、10 h进样，记录色谱图。结果测得，甲醇、乙醇和DMF与内标的峰面积比值的RSD分别为1.3%、0.86%和3.3%。

2.10 耐用性考察

在其他色谱条件不变的情况下，分别调整检测器温度为245和255 ℃，进样口温度为195和205 ℃，初始柱温为35和45 ℃，载气流速为3.8和4.2 mL · min-1，再对混合对照溶液进样测定，记录色谱图。结果发现，甲醇、乙醇、DMF和正丁醇的分离度和理论塔板数均能满足系统适用性试验的要求。

2.11 样品测定

取3批次甲磺酸伊马替尼原料药各0.1 g，精密称定，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，进样，记录色谱图，按内标法计算各有机溶剂的残留量。结果，3批次原料药中均未检出甲醇和DMF，乙醇含量均低于《中国药典》和ICH的有关限度规定（见表3）。

表33 批次样品中有机溶剂残留量检查结果Table 3 Determination results of organic solvent residues in the three batches of samples

3 讨论

3.1 溶解介质的选择

由于甲磺酸伊马替尼原料药样品及3种有机溶剂均能溶于水中，且水沸点较低，FID检测器对其几乎不响应，故避开了溶解介质对各组分测定的干扰。因此，本文选用水作为溶解介质。

3.2 色谱柱的选择

在色谱实验过程中，笔者比较了2种不同极性的色谱柱——中等极性的50%苯基-50%二甲基聚硅氧烷毛细管柱Wonda CAP17和强极性的聚乙二醇毛细管柱Wonda CAP WAX，结果发现，强极性柱对甲醇和乙醇峰的分离度优于中等极性柱，且峰形较好。所以，确定选用聚乙二醇毛细管柱(30.0 m ×530 μm×1.00 μm) 对甲磺酸伊马替尼中残留溶剂进行检测。

3.3 色谱条件的确定

在柱温选择方面，优先考虑保证各溶剂的有效分离，在此前提下，采用程序升温的方式，可缩短分析时间，提高检测效率；而且，考虑到甲醇和乙醇均为低沸点溶剂，且沸点较为相近，故将初始柱温定为40 ℃，维持5 min，使两溶剂峰完全分离，然后再以30 ℃ · min-1升温至 220 ℃，维持4 min，使DMF尽快出峰，结果各溶剂峰达到有效分离。

4 结论

本文建立的毛细管气相色谱法可用于检测甲磺酸伊马替尼原料药中3种残留溶剂，确保原料药的安全性，完善了甲磺酸伊马替尼的企业标准。本法检测速度快、灵敏，操作简便，结果准确、可靠、重复性好，可满足甲磺酸伊马替尼原料药质量控制的检测要求。

[1]孙忠实, 朱珠, 韩风英. 酪氨酸激酶抑制剂——伊马替尼[J]. 中国药学杂志, 2003, 38(1): 69-71.

[2]丁倩倩, 陈勤奋. 甲磺酸伊马替尼的临床应用[J]. 上海医药, 2013, 34(3): 5-8.

[3]人用药品注册技术要求国际协调会. 残留溶剂指导原则[[M]. 北京: 人民卫生出版社, 2000: 236.

[4]国家药典委员会. 中华人民共和国药典(二部)[M]. 北京: 中国医药科技出版社, 2010: 附录ⅧP.

[5]冯敏, 王淼, 王曦, 等. GC法同时测定西尼地平原料药中甲醇等5种溶剂的残留量[J]. 沈阳药科大学学报, 2014, 31(6): 459-462.

[6]单晓辉, 王伟, 严拯宇. 程序升温毛细管气相色谱法测定盐酸氨溴索的溶剂残留量[J]. 海峡药学, 2010, 22 (2): 43-45.

Determination of Residual Organic Solvents in Imatinib Mesylate by Capillary GC

YAN Zhengyu, LIU Xinying ,WANG Rui, LIAO Shenghua

( School of Science, China Pharmaceutical University, Nanjing 211198, China)

Objective: To establish a capillary GC method for simultaneous determination of methanol, ethanol and N,N-dimethylformamide(DMF) as residual organic solvents in imatinib mesylate API. Methods: WondaCAP WAX capillary column with temperature programming, nitrogen as carrier gas at a fow rate of 4.0 mL • min-1and FID at 250 ℃ were used with an injection port temperature of 200 ℃ and an injection volume of 1.0 μL. With n-butyl alcohol as internal standard, three kinds of organic solvent residues in the samples were calculated by internal standard method. Results: Methanol, ethanol and DMF were completely separated under the established chromatographic condition. Good linearities were obtained in corresponding concentration ranges of 2.94-44.11 mg • L-1(methanol), 4.91-73.68 mg • L-1(ethanol ) and 0.084-12.60 mg • L-1(DMF), with correlation coeffcients of 0.9940-0.9985. The sampling precisions (RSDs) were less than 5.0%(n=6). The average recovery rates were 104.8%-105.8%(RSD＜5%, n=9). The limits of quantifcation for them were 0.20, 0.33 and 0.08 ng respectively( S/N=10:1). The limits of detection for them were 0.05, 0.11and 0.02 ng respectively(S/N=3:1). Methanol and DMF were not detected and ethanol contents were below the limit of regulation in the samples. Conclusion: The method is simple, accurate, sensitive and repeatable. It is suitable for the determination of the residual organic solvents in imatinib mesylate API.

capillary GC; imatinib mesylate; residual organic solvents; methanol; ethanol; N,N-dimethylformamide

R927.11

B

1001-5094（2014）10-0761-04

接受日期：2014-09-27

项目资助：江苏省普通高校学术学位研究生科研创新计划项目（No. KYZZ_0185）；国家级大学生创新创业训练计划项目（No. 201210316099）

*通讯作者：严拯宇，教授；

研究方向：仪器分析；

Tel：025-86185150； E-mail：yanzhengyujiang@hotmail.com

**通讯作者：廖声华，讲师；

研究方向：药物质量标准研究；

Tel：025-86185150； E-mail：liaoshenghuacpu@hotmail.com