红花微乳皮肤刺激性实验研究

季新燕，冯 丽，常瑞华，冯文全，冯前进

（1.山西中医学院，山西太原030024； 2.长治市食品药品监督管理局，山西长治046000）

红花亦称红蓝花，为菊科植物红花的干燥管状花，是常用活血化瘀中草药之一。有临床报道，单用红花或与其他药物配伍外用可治疗骨折肿胀、皮肤病、静脉炎等病症［1-3］。微乳作为一种新的药物制剂载体，可应用于局部和透皮给药方面。前期的动物实验研究中发现，实验室自行研制的红花微乳外用制剂在抗炎、镇痛和活血化瘀方面均有较好的作用［4］，为了观察该制剂及其所用辅料是否对皮肤有刺激，本实验同时观察了红花微乳和空白微乳制剂对正常皮肤和破损皮肤的刺激性，旨在评价其用药的安全性。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 白色家兔20只，体重2.0 kg~2.5 kg，雌雄各半，由山西省食品药品检验所提供，动物合格证编号：scxk（京）2011-0010。所有动物置于室温（25±1）℃、相对湿度60%的环境下单独分笼饲养。

1.1.2 实验药物 红花微乳及空白微乳制剂（实验室自制），生理盐水（华北制药）。

1.2 实验方法

1.2.1 分组及皮肤预处理 取白色家兔20只，适应性喂养2 d后分组。正常皮肤组8只，破损皮肤组8只（以上每组再分为两组，即各取4只分别用于单次给药和多次给药实验），生理盐水对照组4只。给药前24 h所有受试动物脱毛，用电动剃毛刀对家兔背部脊柱两侧脱毛，脱毛范围左、右各5 cm×10 cm（脱毛面积为体表面积的10%），然后将脱毛膏均匀涂抹在家兔的脱毛皮肤处，此时仅有少量短毛存在，待涂抹完毕后，等待10 min后用温水擦拭掉残留的脱毛膏和脱下的毛发。脱毛完毕后，将家兔放回笼中，饲养24 h（脱毛处应无红斑、水肿及破损等现象，若有则舍弃不进行此实验研究）。破损皮肤组在给药前24 h用手术刀片于家兔背部脱毛区域划“井”字，以微微渗血为度。

1.2.2 一次给药皮肤刺激性实验 取脱毛白兔8只，随机分成2组（正常皮肤组和破损皮肤组）。将脊柱背侧去毛皮肤均匀分成4个区，左上为Ⅰ区、右上为Ⅱ区、左下为Ⅲ区、右下为Ⅳ区。按照分组分别在Ⅰ区取3 cm×3 cm区域均匀涂抹红花微乳0.3 mL，在Ⅱ区取3 cm×3 cm区域均匀涂抹空白微乳0.3 mL，Ⅲ区、Ⅳ区不给任何药物，进行自身对照，生理盐水对照组则涂生理盐水。用保鲜膜封包，医用胶带固定，6 h后除封包，用温水棉球拭去残留的药物，在去除药物后1 h、24 h、48 h、72 h观察并记录家兔背部皮肤的外观，并做评分。实验结束后处死家兔，取受试部位皮肤进行病理检测。

1.2.3 多次给药皮肤刺激性实验 分组、划分区域同1.2.2，给药时采用每天给药1次，连续给药7 d，于末次给药后1 h、24 h、48 h、72 h观察并记录家兔背部皮肤区域的外观，参照《中药药理实验方法学》［5］进行皮肤刺激性反应评分。实验结束后同样进行病理检测。实验结束后，取下受试部位皮肤，剔除皮肤内侧肌肉和附属物，浸泡在10%甲醛溶液中固定48 h，用乙醇梯度脱水，二甲苯透明，浸蜡包埋，切片，黏片后以常规方法进行HE染色。显微镜下观察用药后皮肤组织的形态变化。

2 结果

2.1 一次给药皮肤刺激性实验

一次给药实验组在去除受试药物后正常皮肤组1 h、24 h、48 h、72 h后均未见家兔的背部皮肤受试区出现红斑、水肿、焦痂等病理现象；红花微乳破损皮肤组家兔有一只在给药后30 h有结痂，78 h时观察大部分已完全脱痂，无其他肉眼可见病理改变。结果如表1。

表1 单次给药对家兔皮肤刺激性实验结果

2.2 多次给药皮肤刺激性试验

在家兔正常皮肤上连续给受试药物7 d，期间均未发现背部皮肤受试区出现红斑、水肿等现象；在去除受试药物后分别观察 1 h、24 h、48 h、72 h变化，也均未见上述现象。但给药的第3天，发现正常皮肤组个别家兔有少量皮屑，触之略糙，无其他明显病理改变。此情况在去除受试药物后24 h消失。多次给药的家兔破损皮肤组在给药期间及去除药物1 h、24 h、48 h、72 h后，观察双侧多有结痂到脱痂这一皮肤痊愈过程，有轻度的皮肤刺激性。其中红花微乳组和空白微乳组均有少量鳞屑存在。至停药后72 h，各组鳞屑完全脱落。结果如表2。

2.3 HE染色镜下观察结果

表2 多次给药对家兔皮肤刺激性实验结果

病理检查显示，经红花微乳和空白微乳处理过的家兔皮肤组织结构都很清晰，被覆鳞状上皮的结构正常，部分角化层有轻微增厚，有少量炎性渗出、炎细胞浸润，说明微乳对皮肤具有轻微刺激性。这可能是由于微乳中含有大量表面活性剂，与角质层作用产生了一定伤害。但刺激性轻微，在停止用药后可恢复，符合外用制剂对皮肤刺激性的要求。结果见图1。

生理盐水对照组

图1 皮肤刺激性实验病理切片图

3 讨 论

从对皮肤刺激性实验评分结果看，无论是单次给药还是多次给药，均存在破损皮肤组的皮肤出现轻微受损结痂现象，分析其原因可能与微乳中表面活性剂有关，它能通过表皮组织，与角质层蛋白产生一定作用引起对皮肤刺激，而完好皮肤组几乎没有皮肤损伤现象，这提示我们外用红花微乳制剂时应尽量避免破损皮肤使用，除对皮肤的刺激性外，还要考虑红花本身具有活血化瘀作用，破损皮肤如出现出血使用红花后可能会促进出血渗出。在多次给药皮肤刺激性研究中还发现有皮肤脱屑现象，这一现象产生可能与制剂中含有少量无水乙醇有关，停药后这些现象都可很快恢复，不影响药物的使用。同时本实验还在此基础上进行了病理学检测，病理切片染色结果的分析可见，微乳作为药物载体有轻微的皮肤刺激性，符合外用药物的刺激性要求，但应尽量避免在破损皮肤上使用。

［1］范吾凤，郑大梅，王式鲁.红花酊外敷治疗踝部骨折肿胀疗效观察［J］.山东中医杂志，2002，21（9）：537-538.

［2］马旭辉，苗振静，王楠楠，等.红花连柏酊外用治疗化学性静脉炎 105 例［J］.中医研究，2010，23（5）：40-41.

［3］陈大志，董松林，唐华，等.舒筋红花酊外用配合功能锻炼治疗外伤性肘关节僵硬32例［J］.云南中医中药杂志，2009，30（4）：26.

［4］季新燕，常瑞华，梁红娟，等.红花外用微乳制剂的药效学初步研究［J］.山西中医学院学报，2013，14（3）：2-3.

［5］李仪奎.中药药理实验方法学［M］.2版.上海：上海科学技术出版社，2006：1020.