不同剂量复方青黛颗粒对溃疡性结肠炎模型大鼠血清IL-6、IL-10水平的影响

刘 伟, 刘 刚, 冷骏峰

(1.湖北省直属机关医院 药剂科, 湖北 武汉, 430071; 2.湖北省人民医院 药剂科, 湖北 武汉, 430060;3.迈德高武汉生物医学信息科技有限公司, 湖北 武汉, 430075)

溃疡性结肠炎(UC)是一种直肠、结肠黏膜的慢性非特异性炎症性疾病，以腹痛、腹泻、黏液脓血便等为主要临床表现，常反复发作，迁延不愈。目前，促炎性细胞因子与抗炎性细胞因子之间的失衡状态被视为UC发病机制中的一个重要环节[1-2]。复方青黛颗粒是中国医科大学附属第一医院中医科研发的治疗UC的有效验方，临床应用中获得了良好疗效。本研究通过对UC模型大鼠给予不同剂量的复方青黛颗粒灌胃给药，观察其对大鼠血清白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)等细胞因子表达水平的影响，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物：成年SD大鼠70只，平均体质量(251.37±48.25) g, 购于湖北省医学实验动物中心。

1.1.2 主要试剂与仪器：大鼠IL-6、IL-10酶联免疫ELISA试剂盒(批号：SM200911，上海活乐生物科技有限公司)、P-selection兔抗大鼠多克隆抗体(批号：BA0617，武汉博士德生物工程有限公司)、浓缩型二氨基联苯胺(DAB)染色试剂盒(批号：ZLI-9032，北京中杉金桥生物技术有限公司)、免疫组化SP试剂盒(批号：1386323，北京中杉金桥生物技术有限公司)、复方青黛颗粒由中国医科大学提供，柳氮磺胺吡啶(SASP)片(国药准字H31020450, 上海三维制药有限公司)。

1.2 分组及模型制备

将70只大鼠随机分为6组：空白对照组、模型对照组、SASP组、低剂量组、中剂量组及高剂量组。除空白对照组10只外，其余60只大鼠采用三硝基苯磺酸(TNBS)法制备UC模型[3]，造模完成第2天随机取大鼠5只，处死后取结肠，以生理盐水清洗后，观察结肠溃疡发生情况以确定造模成功。

1.3 给药方法

造模后第3天起给药：SASP组给予SASP 500 mg/kg、低、中、高剂量组分别给予复方青黛颗粒300 mg/kg、600 mg/kg及1 200 mg/kg。空白对照及模型对照组分别给予等量生理盐水灌胃。各组均连续给药10 d。

1.4 指标测定

末次给药后24 h, 于大鼠眼眶采血，离心后取血清，采用酶联免疫ELISA法测定血清IL-6、IL-10水平，操作严格按照试剂盒说明书进行。随后处死大鼠，取全段结肠，观察充血点、溃疡点及黏膜损害深度，测定结肠组织病理学评分[3]。

2 结 果

2.1 各组给药后结肠组织病理学评分比较

各组给药10 d后，空白对照组、模型对照组、SASP组、低、中、高剂量组的结肠组织病理学评分分别为: 0.42±0.32、4.32±0.85、3.27±1.13、3.47±0.44、3.06±0.38、2.29±0.51。经统计分析，空白对照组评分显著低于其他各组(P<0.01), 模型对照组评分显著高于其他各组(P<0.05或P<0.01), SASP组与低、中剂量组之间无显著差异(P>0.05), SASP组与高剂量组之间均有显著差异(P<0.01), 中剂量与低剂量及高剂量之间均有显著差异(P<0.05或P<0.01)。见图1。

2.2 各组给药后血清IL-6及IL-10水平

方差分析表明，空白对照组血清IL-6、IL-10水平与其他各组均有显著差异(P<0.01), 各给药组血清IL-6水平均较模型对照组降低，其中SASP组及高剂量组显著低于空白对照组以外的其他3组(P<0.05或P<0.01), SASP组与高剂量组之间无显著差异(P>0.05)。各给药组血清IL-10水平均较模型对照组有不同程度升高，其中高剂量组IL-10水平最高，且与其他各组差异显著(P<0.05或P<0.01)。见表1。

表1 各组给药后血清IL-6及IL-10水平±s) pg/mL

3 讨 论

UC的病因及发病机制目前尚未得到清晰阐明，目前认为免疫系统异常是结肠黏膜炎症及组织损伤的内在因素，尤其是机体抗炎性细胞因子与促炎性细胞因子之间的失衡是其发病机制的重要环节[4-7]。白细胞介素(IL)是一组具有多种生物活性的淋巴因子，在免疫细胞的发育、分化、免疫应答及某些细胞的激活过程中发挥重要作用。其中IL-6属于促炎性细胞因子，参与机体的细胞免疫反应，与其他细胞因子共同作用，通过诱导T细胞活性而参与UC的发病与反复发作。多项研究表明，UC患者血清IL-6浓度显著升高，且与患者病变严重程度和病变范围成正相关[8-10]。IL-10主要由单核细胞、Th2细胞、巨噬细胞和活化的B细胞产生，属于抗炎与免疫抑制性细胞因子。研究表明UC患者体内IL-10合成减少，小鼠敲除IL-10基因后可出现自发性结肠炎[11]，提示IL-10在维持正常肠道黏膜的免疫调节中发挥重要作用。因此本研究通过观察UC模型大鼠血清IL-6、IL-10表达水平的变化来反映其免疫系统变化，结果表明，UC模型大鼠血清IL-6水平显著高于正常大鼠, IL-10表达水平显著低于正常大鼠(P<0.05)，与上述报道一致。

UC属祖国医学“泄泻”、“肠风”、“久痢”、“休息痢”等范畴，多因外感暑湿热毒等邪气侵入大肠；或脾虚失运，水湿下注大肠；或脾虚肝旺、肝气乘脾，肝脾不和；或泄泻日久、脾肾阳虚，关门不固所致。复方青黛颗粒由青黛、黄柏、枯矾、儿茶、珍珠等组成，其中青黛为君药，长于清热解毒凉血，尤擅清肠胃邪热；黄柏为臣药，可清热燥湿；枯矾、儿茶、珍珠等可收敛生肌，增加止泻功效。杜立阳等[12-13]一系列研究表明，复方青黛颗粒能减轻UC模型大鼠的症状，降低充血指数、血清淀粉酶和乳酸脱氢酶，并具有抑制肠蠕动、镇痛抗炎的作用。冯春霞等[14]采用中药理肠汤口服及溃疡灵灌肠治疗UC患者，结果表明疗效显著，患者症状显著改善，并可抑制肠黏膜中IL-6的表达，提高IL-10的表达。本研究结果表明，复方青黛颗粒可有效改善UC模型大鼠的症状，并改善其血清IL-6及IL-10的表达，但低、中剂量给药时疗效并不优于SASP组，仅高剂量给药时大鼠结肠组织病理学评分显著低于SASP组(P<0.01), 且对IL-10表达水平的提高作用显著优于SASP组(P<0.05)。

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