Hp感染与胃癌中p27基因表达的相关性研究

苏连明　庄彦华　颜彬

[摘要] 目的 研究幽门螺杆菌（Hp）感染与胃癌组织中p27基因表达的相关性，探讨Hp感染引起胃癌发病的可能机制。方法 Hp 感染检测采用 14碳-尿素酶呼吸试验（14C-UBT）法，应用免疫组织化学染色快捷法检测p27蛋白的表达及与胃癌临床病理指标的关系，比较Hp感染与p27蛋白表达的相关性。 结果 胃癌患者Hp感染率为67.9%；p27蛋白在胃癌组织中的表达率与患者的性别、年龄和肿瘤大小无相关性（P>0.05），而与胃癌组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期密切相关；Hp感染与胃癌中p27基因表达呈负相关（r=-0.486，P<0.05）。结论 Hp感染可能通过降低胃黏膜抑癌基因 p27蛋白表达水平引起胃黏膜癌变。

[关键词] Hp感染；胃癌；p27蛋白

[中图分类号] R735.2 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2014）23-0019-03

[Abstract] Objective To study the relationship between Helicobacter pylori（Hp） infection and expression of p27 gene in gastric carcinoma tissue， to explore the possible mechanism of Hp infection induced gastric cancer. Methods Hp infection was detected by14 carbonandurease breath test（14C-UBT） method，immunohisto Chemical staining was used to detect the expression of p27 protein and quick method， and the relationship with the clinicopathological parameters of gastric cancer， correlation between Hp infection and the expression of p27 protein. Results Astric cancer patients with Hp infection rate was 67.9%； There was no correlation between the expression rate of p27 protein in gastric carcinoma patients and thegender， age and tumor size （P>0.05）， and the degree of differentiation and gastric carcinoma， invasion depth， lymph node metastasis and was closely related to the TNM staging； Is negatively related to p27 gene expression in HPinfection and gastric cancer （r=-0.486， P<0.05）. Conclusion HP infection may be by reducing gastric mucosal expression of tumor suppressor gene p27 protein level sinduced gastric mucosal carcinogenesis.

[Key words] Hp infection； Gastric carcinoma； p27 protein

胃癌约占胃恶性肿瘤95%以上，在每年新增的癌症病例数中占第4位，其发生过程是一个多步骤、多因素进行性发展的过程[1，2]，在正常情况下胃黏膜上皮细胞的增值和凋亡之间保持动态平衡，这种平衡的维持有赖于癌基因，抑癌基因及一些生长因子的共同调控[3，4]。p27作为细胞周期的负性调控因子，能广泛抑制多种细胞周期蛋白和激酶的活性，被认为是一种抑癌基因[5]。1994年WHO宣布Hp是人类胃癌的Ⅰ类致癌原[6]，但Hp引起胃癌的机制尚未十分明确，本文研究胃癌组织中Hp感染与抑癌基因p27的表达及相关性，进一步探讨Hp感染引起胃癌发病的可能机制。

1 材料与方法

1.1胃癌组织标本

56例胃癌标本来均来自2012年12月～2013年12月牡丹江医学院红旗医院普外科手术切除标本，其中男30例，女26例；年龄32～72 岁，平均 54岁；胃癌组织分化程度：中-高分化腺癌31例，低分化腺癌 25 例，所有患者术前均未接受化疗，且有完整的临床资料。

1.2 试剂

碳14-尿素酶呼吸试验仪购自北京华恒安邦科技有限公司，鼠抗人p27单克隆抗体、快捷法通用型二抗、氨基联苯胺（DAB）显色试剂盒均购自福州迈新生物技术开发公司。

1.3 方法

1.3.1 Hp检测 所有试验病例行胃镜检查时疑为胃癌取病理者，胃镜术后均行碳14呼气试验检测。

1.3.2 p27蛋白表达检测 采用免疫组化快捷法，按试剂盒说明书由病理科专人负责逐项进行（福洲迈新生物技术开发有限公司）。

1.3.3 结果判定 免疫组化染色评分，根据以下3个方面判定[7] ①染色密度评分：0，无染色；1，弱染色；2，中染色；3，强染色；②阳性细胞百分比评分：0，0%；1，<10%；2，10%～50%；3，51%～90%；4，>90%；③染色方式评分：0，无染色；1，散在染色；2，局灶染色；3，弥漫染色。每例标本染色积分=①×②×③。阴性为0分，阳性为1～36分。endprint

1.4 统计学处理

实验数据采用χ2检验，相关分析采用Spearman等级相关分析，以相关系数-1

2 结果

2.1 Hp检测结果

56例胃癌患者均行14C-UBT检测，仪器见封三图1。结果显示，Hp感染38例，感染率为67.9%。

2.2 p27蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系

p27蛋白在胃癌组织中主要以细胞浆和（或）细胞核出现棕黄色染色为主同，见封三图2。其表达率与患者的性别、年龄和肿瘤大小无相关性（P>0.05），而与胃癌组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期密切相关（P<0.05），见表 1。

2.3 Hp感染与p27蛋白表达的相关性研究

统计学分析表明，Hp感染与胃癌组织中p27蛋白表达的相关性研究呈负相关（r=-0.486，P<0.05），见表2。

3 讨论

Hp感染是胃癌发生发展的Ⅰ类致病原，Hp具有黏附性，分泌的毒素有致病性，导致胃黏膜病变，Hp还是一种硝酸盐还原剂，具有催化亚硝化作用而引起致癌作用，发生癌变的顺序为：慢性炎症——萎缩性胃炎——萎缩性胃炎伴肠化——异型增生——癌变[8]，但Hp感染引起胃癌发生并非单一机制所致，与人体内癌基因的激活和突变及抑癌基因的失活有关，与胃癌发生相关的癌基因包括ras基因、c-myc和Bcl-2活化[9]，抑癌基因包括野生型P53、APC、DCC、p27等。p27是近些年发现的新的CKI基因[10] （细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂，cyclin-dependent kinase inhibitors）， p27包含两个有编码功能的外显子和一个无功能的外显子及一个内含子，定位于人体12p13交界处，研究发现[11]，p27蛋白具有多种生物学功能，可直接抑制Cyclin-CDK（细胞周期素-细胞周期蛋白依赖性激酶）复合物的生物学活性从而阻止细胞通过G1/S期转换的“关卡”[12]，同时还可以作为细胞外刺激信号的潜在媒介来调控细胞周期[13]，p27作为细胞周期的负性调控因子，被认为是一种抑癌基因，具有抑制肿瘤的发生、发展的作用。在对乳腺癌、肺癌、和内分泌肿瘤的研究中发现p27蛋白表达与肿瘤的生长、分化、转移及预后等密切相关[14]。本实验结果显示：Hp阳性表达率呈递减时，而p27蛋白表达呈升高趋势，统计学分析表明，Hp感染与胃癌组织中p27蛋白表达呈负相关，这一结果说明，Hp 感染可引起胃黏膜抑癌基因 p27 表达降低或缺失，从而导致胃黏膜癌变的发生，其机制可能为，Hp感染可能使p27在胃癌的进展过程中逐渐丧失了作为细胞周期负调控因子的抑癌作用，导致胃癌发生，同时p27下降可引起细胞外基质和细胞黏附性下降[15]，从而导致肿瘤浸润、转移。这也可能是Hp感染引起胃癌发生的机制之一。

[参考文献]

[1] 邹小农，孙喜斌，陈万青，等. 2003～2007 年中国胃癌发病与死亡情况分析[J]. 肿瘤，2012，32（2）：109-114.

[2] 陈清波，王洪波，徐明垚，等. 慢性胃病伴肠上皮化生、胃癌与幽门螺旋杆菌感染的关系[J]. 实用癌症杂志，2010， 25（2） ： 169-171.

[3] 杜中红，魏晓萍，惠起源，等. 胃癌前病变癌变机制及筛查研究进展[J].现代肿瘤医学，2010，18（4）：814-816.

[4] 陆再英，钟南山. 内科学[M]. 第7版.北京：人民卫生出版社，2008：396.

[5] Coqueret O. New roles for p21 and p27 cell cycle inhibition：A fuction for each cell compartment[J]. Trenda Cell Bid， 2003，13（2）： 65-70.

[6] 王建馗，冯义朝. 幽门螺杆菌感染与胃癌局部浸润的相关性[J]. 世界华人消化杂志，2010，18（3） ： 268-271.

[7] 苏连明，艾 江，孔祥红. 结直肠癌PTEN基因表达及与P-ERK相关性研究，中国组织化学与细胞化学杂志[J].2012，21（3）：300-303.

[8] 赵红燕，张凤荣，单恩忠. 萎缩性胃炎 Hp 感染阳性率和Ki -67增殖的相关性研究[J]. 中国医疗前沿，2010，5（8） ： 1-2.

[9] Yu XW，Xu Y，Gong YH，et al. Helicobacter pylori induces malignant transformation of gastric epithelial cells in vitro[J]. APMIS，2011，119（3）：187-197.

[10] 张广建，寇有为，王强. 胃癌组织中p27表达与cyclinD1，cyclinE表达的相关性[J]. 世界华人消化杂志，2007，15（36）：3809-3814.

[11] Wei Z，Jiang X，Qiao H，et al. STAT3 interacts with Skp2/p27/p21 pathway to regulate the motility and invasion of gastric cancer cells[J]. Cell Signal，2013，25（4）：931-938.

[12] 李胜水，许华，杨晶. p27和ILK在胃癌及癌前病变中的表达及意义[J]. 现代肿瘤医学，2010，18（1）：128-130.

[13] Sgambato A，Migaldi M，Leocata P，et al. Loss of p27kip1 expresssion is a strong independent prognostic factor of reduced survival inno gastric carcinomas[J]. Cancer，2008， 89（11） ： 224-227.

[14] Lee SR，Shin HO. Detemining the effect of transforming growth factor-B1 on odk4 and p27 in gastric cancer and cholangiocarcinoma[J]. Oncol Lett，2013，5（2）：694-698.

[15] 王立辉，杨静玉，崔巍，等. 幽门螺杆菌感染与胃癌中p21和p27表达的关系[J]. 微生物学杂志，2008，28（2）： 40-43.

（收稿日期：2014-03-13）

1.4 统计学处理

实验数据采用χ2检验，相关分析采用Spearman等级相关分析，以相关系数-1

2 结果

2.1 Hp检测结果

56例胃癌患者均行14C-UBT检测，仪器见封三图1。结果显示，Hp感染38例，感染率为67.9%。

2.2 p27蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系

p27蛋白在胃癌组织中主要以细胞浆和（或）细胞核出现棕黄色染色为主同，见封三图2。其表达率与患者的性别、年龄和肿瘤大小无相关性（P>0.05），而与胃癌组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期密切相关（P<0.05），见表 1。

2.3 Hp感染与p27蛋白表达的相关性研究

统计学分析表明，Hp感染与胃癌组织中p27蛋白表达的相关性研究呈负相关（r=-0.486，P<0.05），见表2。

3 讨论

Hp感染是胃癌发生发展的Ⅰ类致病原，Hp具有黏附性，分泌的毒素有致病性，导致胃黏膜病变，Hp还是一种硝酸盐还原剂，具有催化亚硝化作用而引起致癌作用，发生癌变的顺序为：慢性炎症——萎缩性胃炎——萎缩性胃炎伴肠化——异型增生——癌变[8]，但Hp感染引起胃癌发生并非单一机制所致，与人体内癌基因的激活和突变及抑癌基因的失活有关，与胃癌发生相关的癌基因包括ras基因、c-myc和Bcl-2活化[9]，抑癌基因包括野生型P53、APC、DCC、p27等。p27是近些年发现的新的CKI基因[10] （细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂，cyclin-dependent kinase inhibitors）， p27包含两个有编码功能的外显子和一个无功能的外显子及一个内含子，定位于人体12p13交界处，研究发现[11]，p27蛋白具有多种生物学功能，可直接抑制Cyclin-CDK（细胞周期素-细胞周期蛋白依赖性激酶）复合物的生物学活性从而阻止细胞通过G1/S期转换的“关卡”[12]，同时还可以作为细胞外刺激信号的潜在媒介来调控细胞周期[13]，p27作为细胞周期的负性调控因子，被认为是一种抑癌基因，具有抑制肿瘤的发生、发展的作用。在对乳腺癌、肺癌、和内分泌肿瘤的研究中发现p27蛋白表达与肿瘤的生长、分化、转移及预后等密切相关[14]。本实验结果显示：Hp阳性表达率呈递减时，而p27蛋白表达呈升高趋势，统计学分析表明，Hp感染与胃癌组织中p27蛋白表达呈负相关，这一结果说明，Hp 感染可引起胃黏膜抑癌基因 p27 表达降低或缺失，从而导致胃黏膜癌变的发生，其机制可能为，Hp感染可能使p27在胃癌的进展过程中逐渐丧失了作为细胞周期负调控因子的抑癌作用，导致胃癌发生，同时p27下降可引起细胞外基质和细胞黏附性下降[15]，从而导致肿瘤浸润、转移。这也可能是Hp感染引起胃癌发生的机制之一。

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[11] Wei Z，Jiang X，Qiao H，et al. STAT3 interacts with Skp2/p27/p21 pathway to regulate the motility and invasion of gastric cancer cells[J]. Cell Signal，2013，25（4）：931-938.

[12] 李胜水，许华，杨晶. p27和ILK在胃癌及癌前病变中的表达及意义[J]. 现代肿瘤医学，2010，18（1）：128-130.

[13] Sgambato A，Migaldi M，Leocata P，et al. Loss of p27kip1 expresssion is a strong independent prognostic factor of reduced survival inno gastric carcinomas[J]. Cancer，2008， 89（11） ： 224-227.

[14] Lee SR，Shin HO. Detemining the effect of transforming growth factor-B1 on odk4 and p27 in gastric cancer and cholangiocarcinoma[J]. Oncol Lett，2013，5（2）：694-698.

[15] 王立辉，杨静玉，崔巍，等. 幽门螺杆菌感染与胃癌中p21和p27表达的关系[J]. 微生物学杂志，2008，28（2）： 40-43.

（收稿日期：2014-03-13）

1.4 统计学处理

实验数据采用χ2检验，相关分析采用Spearman等级相关分析，以相关系数-1

2 结果

2.1 Hp检测结果

56例胃癌患者均行14C-UBT检测，仪器见封三图1。结果显示，Hp感染38例，感染率为67.9%。

2.2 p27蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系

p27蛋白在胃癌组织中主要以细胞浆和（或）细胞核出现棕黄色染色为主同，见封三图2。其表达率与患者的性别、年龄和肿瘤大小无相关性（P>0.05），而与胃癌组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期密切相关（P<0.05），见表 1。

2.3 Hp感染与p27蛋白表达的相关性研究

统计学分析表明，Hp感染与胃癌组织中p27蛋白表达的相关性研究呈负相关（r=-0.486，P<0.05），见表2。

3 讨论

Hp感染是胃癌发生发展的Ⅰ类致病原，Hp具有黏附性，分泌的毒素有致病性，导致胃黏膜病变，Hp还是一种硝酸盐还原剂，具有催化亚硝化作用而引起致癌作用，发生癌变的顺序为：慢性炎症——萎缩性胃炎——萎缩性胃炎伴肠化——异型增生——癌变[8]，但Hp感染引起胃癌发生并非单一机制所致，与人体内癌基因的激活和突变及抑癌基因的失活有关，与胃癌发生相关的癌基因包括ras基因、c-myc和Bcl-2活化[9]，抑癌基因包括野生型P53、APC、DCC、p27等。p27是近些年发现的新的CKI基因[10] （细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂，cyclin-dependent kinase inhibitors）， p27包含两个有编码功能的外显子和一个无功能的外显子及一个内含子，定位于人体12p13交界处，研究发现[11]，p27蛋白具有多种生物学功能，可直接抑制Cyclin-CDK（细胞周期素-细胞周期蛋白依赖性激酶）复合物的生物学活性从而阻止细胞通过G1/S期转换的“关卡”[12]，同时还可以作为细胞外刺激信号的潜在媒介来调控细胞周期[13]，p27作为细胞周期的负性调控因子，被认为是一种抑癌基因，具有抑制肿瘤的发生、发展的作用。在对乳腺癌、肺癌、和内分泌肿瘤的研究中发现p27蛋白表达与肿瘤的生长、分化、转移及预后等密切相关[14]。本实验结果显示：Hp阳性表达率呈递减时，而p27蛋白表达呈升高趋势，统计学分析表明，Hp感染与胃癌组织中p27蛋白表达呈负相关，这一结果说明，Hp 感染可引起胃黏膜抑癌基因 p27 表达降低或缺失，从而导致胃黏膜癌变的发生，其机制可能为，Hp感染可能使p27在胃癌的进展过程中逐渐丧失了作为细胞周期负调控因子的抑癌作用，导致胃癌发生，同时p27下降可引起细胞外基质和细胞黏附性下降[15]，从而导致肿瘤浸润、转移。这也可能是Hp感染引起胃癌发生的机制之一。

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[4] 陆再英，钟南山. 内科学[M]. 第7版.北京：人民卫生出版社，2008：396.

[5] Coqueret O. New roles for p21 and p27 cell cycle inhibition：A fuction for each cell compartment[J]. Trenda Cell Bid， 2003，13（2）： 65-70.

[6] 王建馗，冯义朝. 幽门螺杆菌感染与胃癌局部浸润的相关性[J]. 世界华人消化杂志，2010，18（3） ： 268-271.

[7] 苏连明，艾 江，孔祥红. 结直肠癌PTEN基因表达及与P-ERK相关性研究，中国组织化学与细胞化学杂志[J].2012，21（3）：300-303.

[8] 赵红燕，张凤荣，单恩忠. 萎缩性胃炎 Hp 感染阳性率和Ki -67增殖的相关性研究[J]. 中国医疗前沿，2010，5（8） ： 1-2.

[9] Yu XW，Xu Y，Gong YH，et al. Helicobacter pylori induces malignant transformation of gastric epithelial cells in vitro[J]. APMIS，2011，119（3）：187-197.

[10] 张广建，寇有为，王强. 胃癌组织中p27表达与cyclinD1，cyclinE表达的相关性[J]. 世界华人消化杂志，2007，15（36）：3809-3814.

[11] Wei Z，Jiang X，Qiao H，et al. STAT3 interacts with Skp2/p27/p21 pathway to regulate the motility and invasion of gastric cancer cells[J]. Cell Signal，2013，25（4）：931-938.

[12] 李胜水，许华，杨晶. p27和ILK在胃癌及癌前病变中的表达及意义[J]. 现代肿瘤医学，2010，18（1）：128-130.

[13] Sgambato A，Migaldi M，Leocata P，et al. Loss of p27kip1 expresssion is a strong independent prognostic factor of reduced survival inno gastric carcinomas[J]. Cancer，2008， 89（11） ： 224-227.

[14] Lee SR，Shin HO. Detemining the effect of transforming growth factor-B1 on odk4 and p27 in gastric cancer and cholangiocarcinoma[J]. Oncol Lett，2013，5（2）：694-698.

[15] 王立辉，杨静玉，崔巍，等. 幽门螺杆菌感染与胃癌中p21和p27表达的关系[J]. 微生物学杂志，2008，28（2）： 40-43.

（收稿日期：2014-03-13）