三味檀香口服液制备及质量研究

2014-08-29文万江何平清何纯斌杨明张明明

江西中医药大学学报 2014年3期

★ 文万江何平清何纯斌杨明张明明

(1.江西济民可信药业有限公司江西宜春 336000；2.江西中医药大学江西南昌 330004)

三味檀香口服液是在《内蒙古成药标准》收载的“赞丹-3汤”基础上改剂型而成[1]，处方由檀香、肉豆蔻和广栆三味药组成，功能主治为清热、补心。用于清心热、心悸、烦躁不安，适用于冠心病心绞痛，具有清热、健心之功能，用于心悸，心热，烦躁不安等症[2]。广枣具有行气活血、养心安神之功效，是三味檀香散中的君药，檀香具有行心温中，开胃止痛，归脾、胃、肺经，具有调和药性增加疗效的作用，是复方中的使药，他们的组合形成了“君-使对药”，符合中药复方的组方原理[3]，三味檀香口服液制备工艺以蒙医药理论为指导，应用现代科学技术和方法进行剂型选择和工艺设计。

1 仪器与材料

1.1 仪器高效液相色谱仪(安捷伦1260，VWD紫外检测器)。

1.2 试药三味檀香口服液(江西济民可信药业有限公司)；肉豆蔻；檀香；广枣；原儿茶酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号110809-200604)，甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 挥发油提取时间的考察将肉豆蔻和檀香粗碎成粗粉，取按处方比例准备肉豆蔻和檀香粗粉3份，加入4倍的水，加热蒸馏，收集挥发油，药渣备用，结果见表1。结果表明，3h已经将药材中大部分提出。

表1 不同时间对挥发油提取的影响 /mL

2.2 广枣提取工艺优化

2.2.1 正交试验设计以原儿茶酸为指标，重点考察乙醇浓度，乙醇用量和回流的时间3个因素，每个因素选择3个水平，采用L9(34)正交实验设计表，以原儿茶酸转移率为评价指标，优化处方提取工艺，正交设计因素水平表见表2。

表2 正交设计因素水平表

2.2.2 样品制备取广枣粗粉130g，按L9(34)正交设计表要求试验，测定提取液中原儿茶酸含量，计算原儿茶酸转移率。正交实验设计及结果见表3、表4。

表3 正交实验设计及结果

表4 提取方差分析

F0.05(2,2)=19.000。

由结果可知，以原儿茶酸转移率为考察指标，采用极差直观分析显示影响因素大小为A>B>C；方差分析结果表明，A因素具有显著影响，根据K值，因素B应选水平2，考虑节能，因素C选水平1，最佳提取工艺为A2B2C1即提取乙醇浓度为70%，6倍量回流2次，每次2h。

2.2.3 提取工艺验证实验取同批药材广枣(粉碎成粗粉)3份，每份130按优选的提取工艺进行提取，测得结果见表5。结果表明该提取工艺稳定可靠。

表5 验证试验结果

2.3 药渣的煎煮条件的选择取广枣、肉豆蔻、檀香三种药渣加水煎煮，考察不同时间点出膏率为指标，结果见图1。结果显示8倍水煎煮2h，既节能又能将药渣中的成分全部提取。

图1 不同加水倍数对出膏率的影响

2.4 水提取液醇沉浓度的选择取煎煮液静置6h，抽滤，滤液真空浓缩，浓缩液分为3份，用乙醇分别调整为50%，65%，75%进行醇沉24 h，按照工艺制备口服液，留样1个月，对澄明度进行观察，结果发现醇沉浓度为50%，有沉淀。醇沉浓度为65%，75%的口服液经放置仍澄清，从经济的角度考虑，以65%乙醇浓度为佳。

2.5 吐温的种类的选择为了保证口服液的澄清度符合要求，实验通过对吐温-20、吐温-60、吐温-80等非离子表面活性剂的筛选，确定吐温-20与挥发油混溶加入口服液中的效果最佳，确定比列为挥发油与吐温20以1∶6。

2.6 三味檀香口服液的制备广枣粗粉用70%乙醇回流提取两次，滤过，药渣备用，回收乙醇得药液；檀香与肉豆蔻粗粉混合，用水蒸气法回流提取挥发油，分出挥发油，密闭保存，药渣备用；两药渣混合，水煮，滤过，合并滤液，静置5～6h，取上清液，浓缩，放置室温，醇沉，搅拌，静置24h，滤过，滤液减压回收乙醇，得水煮浓缩液；将广枣醇提物药液与水煮浓缩药液合并，加蒸馏水至体积约为1 000mL，室温用滤菌板抽滤，滤液加入山梨酸至浓度为0.2%，加入甜菊糖至浓度为0.3%，将所提挥发油与吐温20以1∶6搅拌混匀，缓慢加入药液中(70℃)，强烈搅拌，用蒸馏水定容至体积1 000mL，灌装，灭菌，即得。

3 质量研究

3.1 原儿茶酸含量测定[4]

3.1.1 色谱条件 C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)；流动相：甲醇-水(含2.5%醋酸)(10∶90)，流速为1mL/min；检测波长为260nm；柱温为30℃；进样量10μL。理论板数按原儿茶酸峰计算应不低于2500，结果见图2。

A.对照品；B.供试品溶液；1.原儿茶酸

3.1.2 对照品溶液的制备对照品溶液的制备取原儿茶酸对照品适量，精密称定，加流动相溶解，制成每1mL含0.05mg的溶液，即得。

3.1.3 供试品溶液制备准确量取本品10mL，置蒸发皿中，水浴蒸干，残渣加流动相溶解并转移至10mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

3.1.4 标准曲线的绘制分别精密吸取原儿茶酸对照品贮备液适量(12.5mg加流动相稀释到50mL)加流动相稀释，分别制成0.025，0.05，0.075，0.100，0.125mg/mL的原儿茶酸溶液进样10μL，测定原儿茶酸的峰面积。以峰面积为纵坐标(Y)，浓度为横坐标(X)，建立回归方程：Y=17525X+10.23(r=0.9998)。表明浓度在0.025～0.125mg/mL间与峰面积有良好的线性关系。

3.1.5 精密度试验取对照品溶液一份连续进样6次，每次10μL，测定原儿茶酸峰面积，RSD为0.36%。

3.1.6 稳定性试验取同一份供试品溶液分别在0,2，4,6,8,10，12 h各进样10μL，测定原儿茶酸的峰面积，RSD为0.33%，表明供试品溶液在10h内稳定。

3.1.7 重复性试验取同1份样品，按3.1.3项下供试品溶液的制备方法分别制备6份，测定原儿茶酸的含量，RSD=1.08%。

3.1.8 加样回收率试验精密称取已知含量的三味檀香口服液样品(批号：130601，含量：0.052mg/mL)5 mL，6份，每份加入原儿茶酸对照品(按原儿茶酸计为0.0512mg/mL)5 mL，样品及对照品的加入量见表7，按3.1.3项下供试品溶液的制备方法制备并测定。