HPLC法测定神安颗粒中天麻素含量

★ 李坚 易延逵 蔡光先 杨永华

(1. 涟源市人民医院药剂科 湖南 涟源 417100；2.南方医科大学 广东 广州 510515；3.湖南中医药大学 湖南 长沙 410006)

安神颗粒是湖南中医药大学蔡光先教授的经验方，由天麻、酸枣仁、丹参、首乌藤、百合花、五味子等6味药组成，功能益气养血、疏郁定惊、清心除烦、补脑安眠。用于各种慢性疾病引起的头昏眼花、心神焦悴、失眠多梦、记忆力减退、疲倦无力等。

安神方原方应用方法为：天麻、酸枣仁、丹参、首乌藤、百合花、五味子等各味粉碎成粗粉，开水泡服。很明显，原方应用不方便，服用量大，服用困难，口感苦涩。鉴于安神颗粒药方疗效确切、应用广泛及市面已有剂型的特点与现代人们用药的要求，本文选择安神处方为研究载体，对原工艺进行改进，采用超细粉体技术及现代提取工艺等现代制药工艺，研制安神颗粒制剂，在保持传统中医药特色的基础上，大量采用现代天然产物制备技术，提高天然产物的生物利用度。

1 仪器与试药

1.1 高效液相仪器：Aglient1100高效液相色谱仪；色谱柱：Kromasil C18柱(4.6 mm ×150.0 mm，5.0μm)；处理软件：Aglient1100数据处理软件。UV-2401可见紫外分光光度仪(日本岛津)；电子天平(0.001g，德国sartrius BP110S)。

1.2 试药 天麻素对照品(批号：110807-200205，由中国药品生物制品检定所提供)；神安颗粒(自制)；乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

参照有关文献报道[4-8]，选择高效液相色谱法测定天麻素含量，并进行了方法学研究。

2.1 色谱条件 流动相：乙腈-0.05%磷酸溶液(0.5∶99.5)为流动相；检测波长为220 nm。流速：1.0mL/min，理论板数按天麻素峰计算不低于5000。

2.2 检测波长的选择 根据天麻素的理化性质，在紫外区域有最大吸收，故取天麻素对照品，采用甲醇配成约10μg/mL的溶液，在200～400nm波长范围内扫描，结果天麻素在220nm波长处有最大吸收，与文献报道一致，可作为HPLC法测定天麻素含量的检测波长。

2.3 供试品溶液制备方法的比较

2.3.1 取本品0.25g，精密称定，加稀乙醇50mL，精密称定重量，水浴回流3h，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，滤过，取滤液10mL，浓缩至近干，残渣加甲醇溶解，转移至10mL量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，作为供试品溶液，进行HPLC检测。

2.3.2 取本品0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，超声处理(功率：240W，频率：45Hz)1h，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，作为供试品溶液，进行HPLC检测。

近两年，中国石化黑龙江石油把全面可持续发展，迈向高质量发展作为第一要务，以打造“一流企业”为愿景，以建设“大一企业”为目标，坚决落实集团公司工作部署，围绕“改革、管理、创新、发展”工作方针，坚持稳中求进工作总基调，统筹拓市场、促改革、抓运行，持续推进新业务转型突破，主营业务扎实开展。1—8月，公司实现经营总量72.5万吨，同比增幅17%。零售总量同比增加9.2万吨，同比增幅24.3%。非油品交易额1.28亿元，同比增幅13%。零售总量增幅排名系统第一，市场份额达到17%，荣获销售企业月度红旗四面。

试验结果表明，同批样品采用甲醇超声和回流处理，结果相差不大，天麻素峰与样品中其它组分色谱峰可达基线分离，且与其它组分相邻色谱峰分离度大于1.5，按天麻素峰计，理论塔板数在5000以上。故本品含量测定采用2.3.2方法进行供试品溶液的制备。

2.4 对照品溶液的制备 精密称取天麻素对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.25mg的溶液，即得。

2.5 专属性考查 按处方配比称取除天麻以外的其他药材适量，按制备工艺制成缺天麻的阴性样品，注入液相色谱仪，结果表明阴性无干扰。

2.6 方法学考查

2.6.1 线性范围的考查 精密吸取天麻素对照品溶液(0.25mg /mL)2.5，5，10，15，20，25μL，注入高效液相色谱仪，测定，以峰面积对数值为纵坐标，进样量(μg)对数值为横坐标，绘制标准曲线。其回归方程为：Y= 17198X-160.97，r=0.9993。

2.6.2 精密度试验 精密吸取供试品溶液10μL，分别进样6次，依法测定，RSD为1.0%，表明本方法精密度较好。

2.6.3 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、12、16 h进行测定，RSD为1.8%, 表明供试品溶液在24 h内峰面积值基本稳定。

2.6.4 重复性试验 取同一批样品6份，同法制备供试品溶液，依法测定，RSD为2.53%，表明本方法重复性较好。

2.6.5 加样回收率试验 取已测定含量的样品适量，共6份，精密称定，分别加入天麻素对照品溶液10mL(0.029mg/mL)，即0.29mg/mL，按供试品溶液的制备方法处理，测定峰面积，计算加样回收率，见表1。结果表明，本方法加样回收率较好。

表6 加样回收率试验结果

2.7 样品含量测定 取样品三批,依法进行含量测定，结果见表2。

表2 三批样品含量测定结果

2.8 原料中天麻素含量测定试验 取天麻三批，按《中国药典》2010年版一部天麻项下含量测定方法检验，其天麻素含量分别为0.7414%、0.7185%、0.7643%。用天麻素含量为0.7414%的原料投料试制样品，结果含量为2.11mg/g。经计算本品转移率为94.87%。《中国药典》规定天麻药材中天麻素含量不得少于0.20%，如采用该含量的原料投料，按90.0%的转移率计算，本品中天麻素含量为0.54mg/g。根据上述结果，暂定本品含天麻以天麻素计，不低于0.50mg/g。

3 讨论与小结

神安颗粒采用了三种工艺，即超微粉碎工艺，醇提工艺，水提工艺，而其原料药材成分也基本可以分为三类，即以天麻素为指标成分的天麻苷类成分；以五味子醇甲、丹参酮ⅡA为指标性成分的脂溶性成分；以丹参素、斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B等为指标性成分的水溶性成分。因而其质量控制也应建立三类成分的质量控制指标。

天麻在神安颗粒中为主要原料，也为天然产物的贵细原料，天麻素为其指标成分，2010版中国药典[4]天麻中天麻素采用的也是高效液相色谱(HPLC)法，为此我们对其进行了研究，采用HPLC法建立其含量测定方法。2010版中国药典天麻中天麻素的高效液相色谱含量测定方法中，和有关文献采用的有关条件有些差异，我们经过了反复实验，应用到神安颗粒中天麻素的含量测定中，进行了改进，并选择了供试品溶液的处理方法，结果样品分离效果好，从而建立了HPLC法测定天麻苷类成分的指标性成分天麻素的含量测定方法。

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[2]肖崇厚．中药化学[M]. 上海：上海科学技术出版社, 1997，113.

[3]郑虎占，董泽宏，佘靖．中药现代研究与应用[M]. 北京：学苑出版社,1997.

[4]国家药典委员会．中国药典﹒一部[S]. 北京：化学工业出版社,2010，54.

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[7]程龙琼，刘莉，周晓英．HPLC法测定强力天麻杜仲胶囊中天麻素的含量[J]. 中国药房，2008，19(18)：1 410-1 411.

[8]吴春敏，陈海滨．天麻中天麻素含量测定方法的研究[J]. 中国中药杂志，2006，29(12)：1 157-1 159.