STAT3和JNK在食管鳞状细胞癌中的表达及与临床病理特征的关系

2014-08-29刘惠民张洪亮郭梅艳瞿峰时志民王蕾王秀清

河北医药 2014年22期

刘惠民张洪亮郭梅艳瞿峰时志民王蕾王秀清

·论著·

刘惠民张洪亮郭梅艳瞿峰时志民王蕾王秀清

目的探讨食管鳞癌组织中Stat3和Jnk的表达及其与临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学检测食管正常鳞状上皮 (30例)、食管鳞状细胞癌(70例)中Stat3和Jnk的表达情况，分析其与食管鳞癌临床病理特征的关系。结果Stat3在食管正常鳞状上皮和食管鳞状细胞癌中的阳性表达率分别为3.3%和72.9%，而Jnk的阳性表达率分别为0和55.7%。Stat3和Jnk在食管鳞状细胞癌中的阳性表达率均明显高于食管正常鳞状上皮(P<0.05)。食管鳞状细胞癌中Stat3、Jnk的表达与肿瘤浸润深度和淋巴结转移的情况之间差异均有统计学意义(P<0.05)，但是两者与患者的性别、年龄及肿瘤的病理分级均无相关性(P>0.05)。结论随着食管癌的出现，Stat3和Jnk的表达增加，提示两者与食管鳞状细胞癌的发生发展有关，并且有助于判断肿瘤的侵袭和淋巴结转移情况。

信号转导及转录活化因子3；c-Jun氨基末端激酶；食管肿瘤；肿瘤，鳞状细胞免疫组织化学

STAT3作为STAT(signal transducers and activators of transcription)家族的重要成员之一，也是重要的信号级联成分，其通路的不断激活可引起细胞异常增殖，与肿瘤的发生有密切关系[1，2]。作为MAPK激酶超家族成员，JNK在细胞周期调节、细胞增殖和转化生长中具有重要作用，与肿瘤及多种疾病发生机制有关[3，4]。目前，有关Stat3和Jnk表达在食管鳞癌组织中的表达与临床病理特征的关系很少有相关报道。为探讨Stat3和Jnk在食管鳞状细胞癌中的表达变化及其与临床病理特征间的关系，本研究在既往研究的基础上应用免疫组织化学方法，检测了Stat3和Jnk在食管癌鳞癌中的表达情况。

1 资料与方法

1.1 一般资料实验材料为2010年至2013年河北工程大学病理科存档的蜡块，按病史及病理资料选取食管鳞状细胞癌病例70例，其中男49例，女21例；年龄43～77岁，中位年龄63.3岁。按照WHO标准[5]由高年资病理医师对全部食管癌病例的HE切片进行复诊。同时，选取上述食管癌切除患者的食管上、下残端黏膜30例作为对照研究。

1.2 方法与试剂采用免疫组织化学染色的SP法对全部食管癌病例及正常食管黏膜进行实验，严格按照实验说明书进行实验操作：将4 μm厚的切片常规脱蜡入水，3%双氧水孵育，枸橼酸缓冲液高温修复，滴加一抗(稀释度均为1∶80)，4℃冰箱过夜，滴加二抗，DAB显色，封片。以乳腺癌组织切片作为阳性对照，以磷酸缓冲盐溶液(phosphate-buffered saline,PBS)代替第一抗体作为阴性对照。实验所用试剂为兔抗人Stat3多克隆抗体、鼠抗人Jnk单克隆抗体及相应二抗试剂盒，均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 结果判定 Stat3 及Jnk蛋白的阳性表达均位于细胞质，染色结果判定分别参照刘惠民等[6，7]的方法并稍加改进，依据肿瘤细胞的染色强度及阳性细胞百分比综合评分。染色强度以多数阳性细胞呈现的染色计分，无色计0分，淡黄色计1分，棕黄色计2分，棕褐色计3分；同时随机选取10个高倍镜视野计数阳性细胞百分比的平均数，无阳性细胞计0分，≤25%计1分，26%～50%计2分，51%～75%计3分，﹥75%计4分；将两者的计分相加，0～2分为阴性(-)，≥3分为阳性(+)。

1.4 统计学分析应用SPSS 13.0统计软件，计数资料比较采用χ2检验及Fisher确切概率法，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 免疫组化结果 Stat3蛋白阳性反应定位于细胞质，呈棕黄色，弥漫性或散在分布。Stat3蛋白在正常食管黏膜和食管癌组织中的阳性表达率分别为3.3%和72.9%。食管癌组织中的阳性表达率明显高于食管正常鳞状上皮(P<0.05)。Jnk蛋白阳性反应主要定位于细胞浆，呈棕黄色，弥漫性或散在分布。Jnk蛋白在正常食管黏膜和食管癌组织中的阳性表达率分别为分别为0和55.7%。食管癌组织中的Jnk阳性表达率明显高于食管正常鳞状上皮(P<0.05)。见表1。

表1 2组Stat3和Jnk的表达比较例(%)

注：与食管正常鳞状上皮比较，*P<0.05

2.2 Stat3和Jnk蛋白的表达与临床病理特征的关系食管鳞状细胞癌中Stat3、Jnk的表达与肿瘤浸润深度和淋巴结转移的情况之间差异有统计学意义(P<0.05，表2)，但是与患者的性别、年龄及肿瘤的病理分级间差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 Stat3和Jnk的表达与临床病理特征之间的关系例(%)

3 讨论

随着对肿瘤病因学的研究，信号传导途径在肿瘤细胞中抗凋亡和促进分化增殖作用越来越受到重视。Stat3作为重要的信号传导级联成分，接受细胞外信号刺激，作用于细胞核内特异性的DNA片段，参与细胞的生长、分化等多种过程，并在细胞恶性转化过程中起重要作用。目前研究发现，Stat3在甲状腺癌[8]、胃癌[9]、乳腺癌[10]等多种肿瘤组织中表达异常，提示Stat3过度表达与肿瘤发生发展有关。也有研究发现STAT3在食管癌组织中的表达异常[11,12]，提示STAT3过度表达与食管癌的演变过程有关。本研究显示，随着食管癌的出现，Stat3蛋白的阳性表达率明显高于食管正常鳞状上皮(P<0.05)，说明正常细胞信号转导中 Stat3 的激活快速而短暂，而在食管癌组织中Stat3被不断激活，且激活水平很高，并维持这种高水平表达状态，由于Stat3活性发生了变化，从而促进了细胞的不断增殖及恶性转化，提示Stat3的过度激活破坏了正常细胞的增殖，可能参与了食管癌的发生发展。同时，研究发现Stat3的表达与肿瘤浸润深度和淋巴结转移有关，提示Stat3的表达变化与食管癌的局部进展有关，也可能是一个影响食管癌淋巴结发生转移的重要因素。

Jnk是MAPK(丝裂霉素活化的蛋白激酶)信号传导通路的重要部分，研究显示，Jnk(c-Jun的N末端激酶) 信号途径在肿瘤发生发展中的作用受到医学界的广泛关注，其参与细胞增殖与分化，与多种肿瘤的发生有关，在宫颈癌[13]、乳腺癌[14]等多种肿瘤组织中表达异常，本研究在蛋白水平检测了食管癌中Jnk的表达变化情况，发现随着食管癌的出现，Jnk蛋白的阳性表达率明显高于食管正常鳞状上皮，提示Jnk 表达上调可能与肿瘤细胞增殖有关，Jnk信号途径可能参与了食管鳞状细胞癌的发生。研究结果还显示，Jnk的表达与肿瘤浸润深度和淋巴结转移有关，提示Jnk蛋白过表达可能与食管癌的侵袭深度和淋巴结转移情况有关。因此，Jnk有可能成为判断食管癌预后的一个重要临床参考指标，在一定程度上可以判断其预后。

本研究从蛋白水平检测了Stat3和Jnk在食管癌组织中的表达，初步探讨了两者在食管癌中的表达变化及其与临床相关病理参数间的关系，提示Stat3和Jnk的异常表达在食管鳞癌的发生发展可能起着重要的作用，但是两者在食管鳞癌发生过程中的关系还有待进一步研究。

1 Ma XT,Wang S,Ye YJ,et al.Constitutive activation of Stat3 signaling pathway in human colorectal carcinoma.World J Gastroenterol,2004,10:1569-1573.

2 高安定，林宝顺，兰小鹏.STAT3与肿瘤.中国生物化学与分子生物学报，2013，29：397-403.

3 刘启，赵志英.ERK和JNK信号转导通路与疾病关系的研究进展.医学综述，2011，17：1637-1639.

4 孟津，赵敏，金海红，等.磷酸化STAT3和Bcl-2在子宫内膜异位症的表达及相互关系.河北医药，2012，34：1933-1935.

5 朱雄增.胃肠道癌前病变和癌的WHO诊断标准.中华病理学杂志， 2003，32：168-169.

6 刘惠民，吴文新，张祥宏，等.Stat3和p38在散发性大肠管状腺瘤癌变过程中的表达及意义.中华肿瘤杂志，2007，29：168-169.

7 丁涛，张祥宏，李学民，等.p-JNK JNK和PPARγ在食管癌变过程中的表达及其意义.中华肿瘤杂志，2008，30：1348-1352.

8 汪永旭，蒋伟丰，朱陈宏.Stat3和VEGF-C在甲状腺癌中表达及其与临床病理特征间的关系.肿瘤学杂志，2013，19：118-121.

9 丛丽，陶林，赵瑾，等.胃癌组织中Stat3的活化及P53、C-erb-B2表达.中国实验诊断学，2013，17：896-899.

10 陈玉娟，汪静，王晓东，等.Stat3在乳腺浸润性导管癌表达水平与临床病理特征相关研究.中国肿瘤临床，2013，40：583-591.

11 李素梅，钟雪云，林琛莅，等.Stat3、CyclinD1及Bcl - 2在食管鳞癌组织芯片中的表达及意义.现代肿瘤医学，2009，17：681-684.