影响荷斯坦奶牛胚胎移植成功率的因素

邹阿玲，张光伟，肖 锐，张建军，刘水涛，牛志宏，李 强

(1.克拉玛依绿成农业开发有限责任公司，新疆 克拉玛依 834000；2.新疆动物胚胎工程技术研究中心，新疆 呼图壁 831203)

商品化牛胚胎移植工作在我国已经进行了多年，但由于多种因素的影响，不同的作者获得了不同的结论。对于长期从事胚胎移植的商业化公司，术者之间的移植结果差异相对较小。从我们多年实践可以看出，有的术者在多数情况下能获得较高的移植妊娠率，但有的术者的移植妊娠率出现不稳定的情况。术者4在多数牛场的移植率均能达到50%以上，但在本试验的牛场，移植妊娠率最低(37.5%)。

在移植不同发育阶段胚胎的报道中，因移植地点和方法等的不同，出现了完全不同的结果。Dochi等报道[1]，桑葚胚的妊娠率高于囊胚。也有人认为，囊胚的妊娠率高于桑葚胚[2]。而Otler等[3]则报道，囊胚与桑葚胚的妊娠率相似。李树静等报道[4]，桑葚胚和囊胚，囊胚和扩张囊胚的妊娠率差异不显著，但桑葚胚和扩张囊胚的妊娠率差异显著。我们的结果表明，桑葚胚与囊胚的移植妊娠率差异不显著，但扩张囊胚的妊娠率显著较高(见表6)。

1 材料和方法

2003年，在新疆伊犁佳弘牛场进行了荷斯坦奶牛胚胎移植。该场受体牛为当地土种牛，中等膘情。

1.1 胚胎

来自发情后第7～7.5天的高产荷斯坦奶牛青年母牛，胚胎发育阶段分别为致密桑葚胚、早期囊胚、囊胚和扩张囊胚。

1.2 胚胎解冻

30～35 ℃水浴10 s解冻胚胎。采用一步法移植胚胎。

1.3 受体牛的选择和同期发情

根据受体母牛的黄体情况，用PGF2α(齐鲁制药厂)进行同期发情处理，发情后6～8 d进行移植胚胎。移植后60～80 d，经直肠检查诊断是否妊娠。

2 结果

移植结果表明(见表1)，不同的胚胎移植人员，移植胚胎后，得到了不同的结果。最高妊娠率为67.1%(术者1)，最低为37.5%(术者4)，两者差异极显著(P<0.01)。术者2和术者3的移植结果差异不显著(P>0.05)。

表1 不同术者胚胎移植的妊娠率

不同胚胎发育阶段的胚胎移植后妊娠率，因不同术者而有所不同。术者1移植的不同发育阶段的胚胎，妊娠率均较高(见表2)。术者2的扩张囊胚移植妊娠率明显高于桑葚胚和囊胚(见表3)。术者2和术者3的各组胚胎的妊娠率没有明显差异(见表3和4)。术者4整体妊娠率均较低，但不同发育阶段的胚胎之间差异不显著(见表5)。4个术者移植的平均妊娠率：致密桑葚胚和早期囊胚为50.2%，囊胚为47.2%，扩张囊胚为66.7%。

表2 不同发育阶段的胚胎对妊娠率的影响(术者1)

注：CM致密桑葚胚，EB早期囊胚，B囊胚，EXB扩张囊胚

表3 不同发育阶段的胚胎对妊娠率的影响(术者2)

表4 不同发育阶段的胚胎对妊娠率的影响(术者3)

表5 不同发育阶段的胚胎对妊娠率的影响(术者4)

表6 不同发育阶段的胚胎对妊娠率的影响

3 讨论

本研究是在同一年，同一个牛场，使用同一个人冷冻的胚胎，移植的均为A级胚胎。从试验结果看，不同的移植人员，移植的妊娠率存在差异。经过胚胎移植人员的总结交流，笔者认为，主要因素有以下几点：受体的选择，包括发情后的黄体和子宫质地的选择；受体发情的准确性，包括发情的准确开始和结束时间，发情持续期的长短；胚胎不同发育阶段，胚胎越接近受体母牛的子宫内环境，妊娠率越高。我们的扩张囊胚移植后妊娠率较高(66.7%)。

很多进行胚胎移植的牛场，由于人工成本较高，在大规模进行胚胎移植时，不进行发情观察，按PG注射后60 h，作为发情开始时间，之后的第7天，检查黄体后，移植胚胎。所以，就不同发育阶段胚胎而言，由于牛场的情况不同，同期发情方法的差异，以及不同的处理方法和发情后移植的不同天数，许多学者对不同发育阶段胚胎的移植妊娠率，得出了不同的结果。

[1] Dochi O，et al.Direct transfer of propylene glycol or ethylene glycol under-on-farm conditions in an interacted embryo transfer program.Theriogenology [J]，49，1051-1054.

[2] Donaldson L E et al.Matching of embryo stages and grade with recipient oestrous synchrony in bovine embryo transfer.Vet.Rec.1985,489-490.

[3] Other，J.et al.pregnancy rate of fresh and frozen thawed cattle embryo.Proc.of the 10th proceedings of cryopreserved bovine embryo.Theriogenology [J].1998，49，abstract.

[4] 李树静.牛胚胎的发育阶段和质量对移植妊娠的影响研究[C].〈中国畜牧兽医学会繁殖学分会〉，2006，360-362.