蒙药银露梅质量标准研究※

李怀斌 乌仁图雅 侯建平 王佐稷 益小刚

(陕西省咸阳市食品药品检验所业务管理科，陕西 咸阳 712000)

制剂与质量控制

蒙药银露梅质量标准研究※

李怀斌 乌仁图雅△侯建平1王佐稷2益小刚1

(陕西省咸阳市食品药品检验所业务管理科，陕西 咸阳 712000)

蒙药；槲皮素；色谱法，薄层；色谱法，高压液相

蒙药银露梅为蔷薇科植物银露梅的茎枝。蒙药名为孟根乌日阿拉格。银露梅作为蒙药传统用药，载于《蒙药正典》，其性平，味涩，具有固齿、理气、敛黄水等功效。用于牙病，肺病，胸胁胀满，黄水病。为了保证该药的临床疗效，有效控制其质量，本研究对内蒙古各地产药材在仔细观察描述性状的基础上，以槲皮素为对照进行薄层色谱鉴别研究，并采用高效液相色谱(HPLC)法测定了槲皮素含量[1-2]，从而制定出银露梅药材的质量标准，为蒙药银露梅的质量控制与评价提供了依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 日本岛津LC-10AP高效液相色谱仪、N 2000色谱工作站、日本岛津SPD-10A型紫外检测器。BP210电子分析天平(北京赛多利斯天平有限公司)。KQ-250DB型超声波清洗机(巩义予华仪器有限公司)。

1.2 药品及试剂

1.2.1 药品 银露梅样品来源：内蒙古赛罕乌拉自然保护区、内蒙古大青山劈柴沟、内蒙古蛮罕山及国家蒙药制剂中心。槲皮素对照品：购于中国药品生物制品检定所(批号：10081-9905)。

1.2.2 试剂 甲醇为色谱纯，水为蒸馏水，浓硫酸，乙酸乙酯，95%乙醇，其他试剂均为分析纯。

2 薄层色谱鉴别及结果

2.1 供试品溶液制备 取本品粉末2g，加甲醇-水(1∶1)50mL，超声处理30min，滤过，滤液浓缩至近干，加水50mL溶解，加浓硫酸0.5mL，加热回流1h，放冷，移至分液漏斗中，用乙酸乙酯液萃取3次，每次20mL。合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加95%乙醇2mL溶解，作为供试品溶液。

2.2 对照品溶液制备 取槲皮素对照品0.5mg，加95%乙醇1mL，制成对照品溶液。

2.3 鉴别操作及结果 供试品溶液点样量5μL，对照品溶液点样量2μL，采用4种不同的吸附剂及展开系统进行比较优选。①号薄层系统：羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板，环己烷-乙酸乙酯-甲酸(10∶7∶1)为展开剂；②号薄层系统：硅胶H板，甲苯-甲酸乙酯-甲酸(5∶3∶1)为展开剂；③号薄层系统：0.5%氢氧化钠溶液为黏合剂的G板，甲苯-氯仿-丙酮-甲酸(8∶5∶7∶1)为展开剂；④号薄层系统：硅胶H板，甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶4∶1)为展开剂。依次分别展开，取出，晾干，喷以3%三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热2min，置紫外光灯(365nm)下检视。结果①号薄层系统效果最佳(图1、2、3、4，见封3)。

3 槲皮素HPLC含量测定及结果

3.1 色谱条件 C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，以甲醇-0.4%磷酸溶液(52∶48)为流动相，流速：1.0mL/min，柱温：30℃，检测波长：360nm[1-3]。

3.2 对照品溶液制备 精密称取槲皮素对照品17.00mg，加甲醇定容至100mL，摇匀，即得浓度为0.17mg/mL的对照品溶液。

3.3 供试品溶液制备 取4批银露梅样品粉末(过40目筛)约1.0g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入80%甲醇50mL密塞。称定质量，加热回流1h，放冷，再称定质量，用80%甲醇补足减失质量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10mL，加入盐酸1mL，置90℃水浴中加热回流1h，取出，迅速冷却。转移至25mL容量瓶中，加80%甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。

3.4 线性范围考察 精密吸取3.2项槲皮素对照品溶液1.5、2.5、5.0、7.5、10.0mL，分别定容于100mL容量瓶中，摇匀，得到浓度分别为0.00255、0.00425、0.0085、0.0125、0.0170mg/mL，精密吸取10μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，测定峰面积，以峰面积对进样量进行回归，以取样量为X轴，峰面积为Y轴，得回归方程Y=2E+0.6X-18494，r=0.999 8。结果表明：槲皮素在0.0255～0.1700μg范围内，峰面积值与进样量呈良好的线性关系。

3.5 稳定性试验 精密称取内蒙古赛罕乌拉自然保护区样品，按供试品溶液制备方法制成稳定性试验溶液，分别在0、1、2、3、8h，精密吸取10μL，注入高效液相色谱仪，测定，结果相对标准偏差(RSD)为1.2%。试验结果表明，供试品溶液在8h内稳定性良好。

3.6 精密度测定 精密吸取3.5样品溶液10μL，在上述色谱条件下重复进样5次，结果显示槲皮素峰面积RSD为1.1%，表明系统精密度良好。

3.7 重复性试验 取内蒙古赛罕乌拉自然保护区样品5份，每份约1.0g，分别按3.3方法制成重复性试验溶液，精密吸取10μL，进样分析，槲皮素峰面积RSD为1.68%(n=5)，方法重复性良好。

3.8 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品(3.7中的样品)6份，每份约1.0g，加入适量的槲皮素对照品，按供试品溶液制备方法制成加样回收试验溶液。分别精密吸取10μL，进样分析。加样回收率试验结果见表1。

表1 加样回收率试验结果

由表1可见，平均回收率为96.72%，RSD为2.169%。加样回收率良好。

3.9 样品含量测定 取4批银露梅样品粉末各1.0g，分别精密称定，按3.3方法进行供试品溶液制备，各精密吸取10μL，注入高效液相色谱仪，测定。样品含量测定结果见表2。

表2 样品含量测定结果

由表2可见，4批样品中槲皮素的平均含量1.2630mg/g，最高为1.7013mg/g，最低为0.839 0mg/g，考虑本次收集样品量小、产地少等因素，故规定本品按干燥品计算，每克含槲皮素不得少于0.5mg。

4 讨 论

4.1 本试验所用样品均经过了原植物鉴定，并在试验前进行了性状比较与鉴定，确保了试验结果的一致性。

4.2 4个地区所产药材薄层色谱结果一致，考虑以后增加银露梅对照药材与槲皮素同时做对照，增强鉴别的专属性。

4.3 对样品中杂质、水分、总灰分、酸不溶性灰分进行检查[4]，在正式标准中对其指标做了规定，确保了所制订标准的完整与实用。

本试验建立了蒙药银露梅鉴别与含量测定方法，定性专属性强，定量精密度高，稳定性好，可作为蒙药银露梅的质量控制重要项目。

[1] 王焕芸，王玉华，贾彦胜，等.丁香药材中槲皮素的定性鉴别和含量测定[J].内蒙古医学院学报，2008，30(S1)：534-537.

[2] 孙文基，谢世昌.天然药物成分定量分析[M]．北京：中国医药科技出版社，2003：400-403.

[3] 张文霞，包文芳，赵淑华.高效液相色谱法测定文冠木各部位中杨梅树皮素和槲皮素的含量[J].沈阳药科大学学报，2000，17(3):194-196.

[4] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：2010年版[M]．北京：中国医药科技出版社，2010：附录47-53.

(本文编辑：李珊珊)

※ 项目来源：内蒙古自治区蒙药现代化研究项目(编号：MX2005BZ008)

李怀斌(1962—)，男，副主任中药师，学士。研究方向：中药质量标准研究、新药研究。

R284.1

A

1002-2619(2014)08-1224-02

2013-05-13)

△ 通讯作者：内蒙古医科大学蒙医药学院外科教研室，内蒙古 呼和浩特 010110

1 陕西中医学院药理教研室，陕西 咸阳 712000

2 陕西省乾县食品药品监督管理局稽查科，陕西 乾县 713300