HPLC-ELSD法测定安神补脑液中维生素B1的含量

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(吉林省中医药科学院，长春 130021)

HPLC-ELSD法测定安神补脑液中维生素B1的含量

仲崇琳，杨美林

(吉林省中医药科学院，长春 130021)

目的 建立测定安神补脑液中维生素B1的含量方法。方法 采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器法(HPLC-ELSD)。色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为13 mmol/L乙酸铵(用乙酸调至pH 5.2)-乙腈(95∶5)，流速为0.3 mL/min；蒸发光散射检测器漂移管温度为115 ℃，雾化气体为空气或氮气，气体流速为2.8 L/min。结果 维生素Bl的进样量在1.008～5.04 μg范围内,其峰面积的自然对数与进样量的自然对数具有良好的线性关系(r=0.999 3)，平均回收率为97.969%,RSD=1.26%(n=5)。结论 该方法灵敏、准确，可用于安神补脑液中维生素B1含量测定。

安神补脑液；维生素B1；高效液相色谱法；蒸发光散射检测器；含量测定

安神补脑液由鹿茸、制何首乌、淫羊藿、干姜、甘草、大枣6味中药及维生素B1为原料药制成，对由神经衰弱引起的失眠、多梦、健忘、头晕、耳鸣、记忆力减退、头痛等症状有显著疗效。对该症同时引起的食欲不振、畏寒肢冷、腰膝酸软、胃寒痉痛、四肢酸软、倦怠乏力等症状也有显效。笔者采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器法(HPLC-ELSD)测定安神补脑液中维生素B1的含量，旨在建立一种简单易行、专属性强、灵敏高的检测方法，以用于该制剂的质量控制和标准建立。

1 仪器与试剂

日本岛津LC-10A高效液相色谱仪，Alltech 2000ES型蒸发光散射检测器[美国奥泰科技(中国)有限公司]；N2000液相色谱工作站(浙江大学智达信息工程有限公司);安神补脑液(批号：120101至120110)；维生素B1对照品(卫生部药品生物制品检定所提供)；乙腈为色谱纯；其他试剂均为分析纯；水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱(迪马公司)，流动相为13 mmol/L乙酸铵(用乙酸调至pH 5.2)-乙腈(95∶5)，流动相流速为：0.3 mL/min，采用蒸发光散射检测器检测，蒸发光散射检测器漂移管温度为115 ℃，雾化气体为空气或氮气，气体流速为2.8 L/min。

2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取维生素B1对照品适量，加水制成每1 mL含0.25 mg溶液，即得。

2.1.2 供试品溶液的制备 精密量取本品25 mL，用乙酸乙酯提取3次，每次30 mL，弃去乙酸乙酯液，水层置水浴中挥去乙酸乙酯后，转移至100 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.1.3 阴性对照液干扰试验 为进一步考查实验设计过程以及测定样品中维生素B1方法及合理性，取不含维生素B1的阴性对照液10 μL，注入高效液相色谱仪，依法测定，结果阴性对照液色谱图在维生素B1色谱峰相应的保留时间处无干扰峰出现。

2.2 测定方法 精密吸取对照品溶液5，15 μL，供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪,测定，以外标二点法对数方程计算，即得。

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系考察 精密称取维生素B1对照品适量，加水制成每1 mL中含维生素Bl0.252 mg的溶液,作为对照品溶液。分别精密吸取4，8，12，16，20 μL，注入高效液相色谱仪，以峰面积的自然对数为纵坐标,维生素B1进样量的自然对数为横坐标，线性回归，回归方程为：Y=5.941 8+1.109 8X(r=0.999 3)。结果在1.008～5.04 μg范围内维生素B1峰面积的自然对数与进样量的自然对数具有良好的线性关系。

2.3.2 精密度试验 取同一供试品溶液，连续进样5次，每次10 μL，测各次峰面积，计算RSD=1.83%(n=5)，表明测定仪器精密度良好。

2.3.3 稳定性试验 精密吸取同一批号供试品溶液，按2.2的含量测定方法测定，每隔2 h进样1次，测定峰面积，计算RSD=1.02%(n=5)，表明方法稳定性良好。

2.3.4 重现性试验 取同一批号样品，按含量测定方法进行多次测定，计算RSD=1.11%(n=5)，表明方法重现性良好。

2.3.5 回收率试验 本试验采用加样回收法，精密称取已知含量样品5分，分别精密加入一定量维生素B1对照品溶液，按含量测定法进行测定，结果平均回收率为97.969%,RSD为1.26%。

2.4 结果 根据确定的方法，精密吸取对照品溶液5，15 μL，供试品溶液10 μL,注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，测定10个批号的样品，结果见表1。

表1 10批样品含量测定结果

3 小结

3.1 供试品处理方法 安神补脑液是中西药组合的复方制剂，为确保药物中维生素B1含量测定的准确性，比较了用乙酸乙酯提取和未用乙酸乙酯提取2种方法处理供试品过程中样品的维生素B1的含量，结果用乙酸乙酯提取后，样品的杂质峰峰面积明显降低，而对维生素B1的含量无任何影响[1-2]。

3.2 检测器条件的选择 ELSD检测器具有高通用性，不受物质本身化学结构限制等优点，试验后发现其有较好的重现性、稳定性和精密度[3-4]。

3.3 含量计算方法 为了减少实验误差，应采用外标二点法对数方程计算含量。本实验分别对维生素B1峰面积的自然对数与进样量的自然对数进行回归，获得了良好的线性关系；如果在线性范围内进行对照品溶液两点法校正和含量计算，则可以获得准确的测定结果[5]。

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[2]刘炎,王淑敏,刘志强.当归补血汤中黄芪甲苷含量研究[J].长春中医药大学学报,2008,24(1):29-30.

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ContentdeterminationofVitaminB1inNervesBrainFluidbyHPLC-ELSD

ZHONG Chonglin,YANG Meilin

(Jilin Province Academy of Traditional Chinese Medicine,Changchun 130021,China)

ObjectiveTo develop a method for the content determination of Vitamin B1in Nerves Brain Fluid.MethodsHPLC-ELSD was adopted.The determination was performed on octadecyl silane bonded silica as filler with mobile phase of 13 mm ammonium acetate (with acetic acid to PH5.2)-acetonitrile (95:5) at the flow rate of 0.3 mL/min.The drift tube temperature of ELSD detector was 115 ℃.Atomization for air or nitrogen gas,gas flow rate of 2.8 L/min.ResultsThe linear rang of vitamin B1was 1.008-5.04 μg(r=0.999 3) with an average recovery of 97.969%,RSD=1.26(n=5).ConclusionThe method is sensitive,accurate and suitable for content determination of vitamin B1in Nerves Brain Fluid.

nerves brain fluid;vitamin B1;HPLC;ELSD;content determination

10.13463/j.cnki.cczyy.2014.04.017

仲崇琳(1964-),男,硕士,主任药师。研究方向：中药化学。

R284.1

：A

：2095-6258(2014)04-0609-02

2014-02-11)