血型血清学检查方法在交叉配血中的应用

龚卫锋(西安市中心医院输血科，西安 710003)

交叉配血试验包括主试验和副试验两种。前者用受血者血清与供血者红细胞悬液作试验以发现受血者血清中是否含有与供血者红细胞反应的抗体，又称直接配合或主侧配合;后者则用供血者血清与受血者红细胞作试验以发现供血者血清中是否有不合抗体，又称间接配合。交叉配血试验有多种方式，如盐水法、胶体介质配血法、抗球蛋白法、聚凝胺法等。据报道，每输一个单位的血使受血者致敏的风险为1.0% －1.6%，多次输血产生同种抗体的几率为15% －20%［1］。一些疑难血型交叉配血尚需更多的办法加以验证，IgG+C3多抗试剂37℃恒温箱温浴可发现血型不配合及意外抗体，该方法主要优点是既能检出不相配合的完全抗体，又能检出不完全抗体，较好地解决了疑难血型交叉配血中结果难以正确判断的问题，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 对象

选择2006－06～2013－08西安市中心医院20 136例住院需输血患者，其中有95例交叉配血不相合患者。

1.2 方法

1.2.1 试剂与仪器 抗人球蛋白IgG+C3试剂，3%标准A、B、O型红细胞，均为上海血液中心产品。BASO 2002—2型血库专用离心机。

1.2.2 抗人球法检测凝血情况 静脉抽取受血者和供血者血液各3 ml，按常规方法分离血清。将受血者和供血者红细胞用生理盐水制成5%的洗涤红细胞生理盐水悬液。取两支试管，分别注明“主”、“次”或“+”、“－”号字样，主侧滴入供血者洗涤红细胞悬液一滴和受血者血清两滴;次侧加入受血者洗涤红细胞悬液一滴和供血者血清两滴。混合管:受血者洗涤红细胞悬液一滴和供血者血清两滴，供血者洗涤红细胞悬液一滴和受血者血清两滴，混匀，37℃恒温箱内温浴30 min－2 h后取出，3 000 r/min离心1－2 min;观察上清液的颜色，然后再观察有无红细胞凝集或溶血现象发生［2］。随后加入抗人球蛋白IgG+C3试剂1滴，混匀，1 000 r/min离心1 min，观察结果。

若试管内红细胞呈均匀混浊无颗粒出现，显微镜下红细胞分散存在，即无凝集，上清液呈正常血清状颜色为交叉配血试验相合，可以发血;若试管内红细胞出现溶血或凝集现象可用凝胶配血法(又称微管(板)凝胶抗球蛋白试验)进一步印证，若仍然有溶血或凝集现象，则需要进一步检测抗体类型，另外寻找相合血源。

2 结果

本院20 136例住院需输血患者中检出95例交叉配血不相合患者，95例交叉配血不相合患者中包括92例意外抗体阳性患者和3例A2B亚型血患者。

92例意外抗体阳性患者(其中包括O型30例，B型32例，A型28例，AB型2例)与同型献血者试管法交叉配血实验结果表明，30 min后出现轻度溶血或凝集，1 h后出现中度溶血或凝集，2 h后出现重度溶血或凝集。

凝胶配血法印证92例意外抗体阳性患者经凝胶配血法复检均有轻度到重度溶血或凝集现象。

3例A2B型血患者与B型、AB型供血者加入IgG+C3多抗试剂37℃温浴后结果表明，A2B型血患者与B型供血者交叉配血结果无凝集无溶血，A2B型血患者与AB型供血者交叉配血结果轻度凝集，轻度溶血。用凝聚胺法做此亚型患者与供血者交叉配血有同样的结果，但没有抗人球法容易判断结果。

3 讨论

需要输血的患者除单纯型外伤大出血外，大多伴随某些疾病，再加上患者身体素质、病情不同，用药情况的差异及其他因素，往往会导致临床配血困难［3］，血液标本中含有肝素、肺炎支原体抗体、抗人球蛋白抗体等均会导致交叉配血失败［4］。随着温浴时间延长，各种影响交叉配血因素充分作用，试管内红细胞溶血或凝集程度随之增加。

对于亚型患者A1抗原能与抗A、抗A1抗体发生凝集反应，而A2B抗原与抗A凝集弱，与抗B凝集强。A2B亚型的血清中含少量抗A1抗体，把A2B亚型血定为AB血型，在临床输血过程中若将AB型血输给患者，其中患者的抗A1抗体会与大部分AB型献血者血液反应，出现溶血性输血反应。Ax型红细胞与B型血清(抗A抗体)凝集较弱，但与O型血清可发生程度不一的凝集，这是因为O型血中抗A效价比B型血抗A效价高，故做ABO血型鉴定时，应加O型血清(内含抗A、抗B及抗AB)，以防将Ax型误定为O型或AxB亚型误定为B型;若找不到合适A2B亚型血，给患者输B型悬液或O型洗涤红细胞是妥当的，但须征得患者同意并签署知情同意书。

微柱凝胶技术在交叉配血中敏感、操作方便，更有效地保证了输血安全［5］，微柱凝胶技术与试管法需要相互印证。当交叉配血不相合时，首先要复查受血者和供血者的ABO血型和Rh血型，观察抗体筛检结果。通常情况下，受血者和献血者的样本在输血后，需要在2－6℃保存3－7 d时间，对于ABO血型正反定型不符血样，必须严格按照操作规程，保障试剂质量，另外抽取患者新鲜标本重新检测，排除技术和责任问题是必要的［6］。在血型正确的情况下，还要注意避免意外抗体对交叉配血的影响，筛查出具体抗体类型，选择不含该抗体所针对抗原的献血者进行交叉配血，近来，由于激素等免疫抑制剂在临床中的使用，意外抗体阳性患者已明显减少。

不完全抗体为ABO系统以外的其他血型抗体，多为IgG抗体，分子量较小，在盐水介质中只能致敏相应抗原的红细胞，而不能使之凝集，必须通过特定的方法(如加入IgG+C3多抗试剂37℃恒温水浴)使致敏红细胞发生凝集。通常情况下，IgM抗体在4℃比在22℃或37℃更容易被吸收，IgG抗体在37℃吸收效果最好［7］。所以IgG抗体在37℃更易产生抗原与抗体间的中和反应，加入IgG+C3多抗试剂促进了抗原与抗体反应的进行，随着反应时间的延长，抗原与抗体反应进行的更加充分完全。此方法对IgG抗体检出及疑难交叉配血均有显著效果。对交叉配血不合患者，可采用随机配血法寻找合适同型供血者，也可进一步筛查IgG抗体类型，再寻找不含该类型IgG抗体的相应抗原的供血者来解决。

［1］ 林琼琳，李建华，彭燕，等.1038例患者输血前不规则抗体筛检分析［J］.临床输血与检验，2005，7(3):200 －201.

［2］ 叶应妩，王毓三.全国临床检验操作规程［M］.南京:东南大学出版社，2006:100 －102.

［3］ 王志红，陈善华，马红丽，等.探讨疑难配血三步法在实际工作中的应用［J］.中国输血杂志，2011，24(3):246 －247.

［4］ 朱莉，扎洛.49例交叉配血不合的分析及意义［J］.现代预防医学，2011，38(10):1919 －1921.

［5］ 陈迎荣.微柱凝胶技术在交叉配血中的应用2586例分析［J］.中国误诊学杂志，2011，11(3):647 －648.

［6］ 龚卫锋，白艳丽.影响ABO血型鉴定结果的因素分析［J］.山西医药杂志，2010，39(12):1176 －1177.

［7］ 夏琳，杨江存，谢伟.临床输血诊断技术［M］.北京:人民卫生出版社，2008:75－76.