紫外分光光度法测定玉米浆中溶磷含量

张金霞，包洁华，张 萍，王梅梅

(宁夏泰瑞制药股份有限公司，750101)

玉米浆在发酵中能提供氮源，在氨基酸、抗生素等发酵领域中具有广泛应用[1-2]。我国玉米浆的质量指标主要是干物质、粗蛋白、亚硫酸、溶磷和酸度[3]。磷含量是玉米浆的重要指标之一，主要以植酸的形式存在，去除磷的玉米浆不利于发酵[4]，因此抗生素生产通常要求检测溶磷含量。然而，玉米浆中溶磷的测定长久以来没有建立标准，且国内目前为止报道很少，通常采用亚硫酸盐还原，磷钼蓝比色法[5]，由于发色剂不稳，许多因素会影响显色，导致吸光度与浓度不呈良好线性[6]。文献[5]中采用酒石酸锑钾和硫酸肼在酸性环境中发生络合反应测定具有一定的局限性，为了便于生产中能及时准确的将溶磷含量作为参考数据，本文在磷钼蓝标准曲线比色法的基础上[7-8]，采用钼酸铵和米吐尔作为显色剂，建立了玉米浆中溶磷测定的方法。

1 仪器与试药

1.1 TU-1901 双光束紫外-可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司。

1.2 试剂：硫酸、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、三氯乙酸、钼酸铵、米吐尔（硫酸对甲氨基酚）均为分析纯试剂，磷酸二氢钾为基准试剂。

1.3 玉米浆（购自宁夏伊品生物技术有限公司）。

1.4 试液的配制

钼酸铵溶液：精密称取钼酸铵5 g，加水50 mL，微热使溶解后，倒入加有75 mL 浓硫酸和50 mL 水的冷混液的棕色试剂瓶中，于冰箱中保存（保存期为2 周）。

米吐尔溶液：精密称取米吐尔（硫酸对甲氨基酚）0.2 g 和亚硫酸钠1 g，加水10 mL 溶解，称取44 g 的亚硫酸氢钠溶于190 mL 水，将上述两种溶液混合均匀，过滤，盛入棕色试剂瓶中，冰箱保存（保存期为2 周）。

0.05 mol/L 的硫酸溶液：取硫酸3 mL，缓缓注入适量水中，冷却至室温，加水稀释至1000 mL，摇匀，即得。

10 %三氯乙酸溶液：称取三氯乙酸10 g，加适量水缓慢溶解后转入100 mL 量瓶，加水定容至刻度，摇匀即得。

2 实验方法和结果

2.1 线性关系：

精密称取105 ℃干燥至恒重的磷酸二氢钾0.4394 g 于1000 mL 量瓶中，加适量水使溶解，加0.05 mol/L 硫酸溶液20 mL，用水稀释至刻度，再精密吸取上述溶液10 mL 于100 mL 量瓶中，加0.05 mol/L 硫酸溶液2 mL，用水稀释至刻度，作为对照品溶液。

分别精密吸取对照品溶液0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL、3.0 mL、3.5 mL、4.0 mL 置50 mL 量瓶中，用刻度管加钼酸铵溶液、米吐尔溶液各2 mL，然后用水稀释至约15mL 置沸水浴中加热35 min，冷却，加水稀释至刻度，摇匀。则其相应的 浓 度 依 次 为0.1 μg/mL、0.2 μg/mL、0.3 μg/mL、0.4 μg/mL、0.5 μg/mL、0.6 μg/mL、0.7 μg/mL、0.8 μg/mL。另取水5 mL 作空白，浓度为零。用紫外-可见分光光度计于660 nm[9]处测吸光值，以磷浓度为纵坐标，吸光度值为横坐标，（见表1）绘制标准曲线。回归方程为y=0.2959x-0.0019, 相关系数R2＝0.9992，即在0.1～0.8 μg/mL 范围内具有良好的线性。0.020 吸光值对应的最低检出限[10]为0.0743μg/mL。

表1 标准曲线数据

2.2 精密度

表2 精密度测定结果

2.3 准确度试验：分别精密吸取对照品溶液0.5 mL 置9 个50 mL 量瓶中（已知浓度为0.1μg/mL），平均分成三组，再向三组中分别精密加入2.0 mL、2.5 mL、3.0 mL 对照品溶液（已知浓度分别为0.4μg/mL、0.5μg/mL、0.6μg/mL），其相对浓度分别为80 %、100 %、120 %，分别测定计算。回收率应在100 %±5%范围内[11]。结果如表3，不同添加水平下的回收率均在100 %±5 %范围内，平均回收率为100.5 %，RSD 值为1.41 %。

表3 回收率测定结果

3 讨论与小结

经过试验，本文测定玉米浆中溶磷含量，因玉米浆能与水互溶，省去了样品消化的过程。

玉米浆中的磷化合物经米吐尔的氧化作用后转变成正磷酸盐，然后利用磷酸盐与钼酸铵作用生成磷钼酸铵，再利用适当的还原剂还原呈钼酸蓝，而蓝色的深浅与磷酸盐的浓度成正比，符合比尔定律，故可用比色法测定磷的含量。

试验过程以水浴加热35 min 作为显色条件，能使样品溶液显色更加充分，反应条件易控制，并且与文献[5，10]中加入钼酸铵、酒石酸锑钾、硫酸肼、亚硫酸钠和对苯二酚相比，该方法用钼酸铵和米吐尔溶液的混合显色剂，能使操作更为简便。

文献[5]玉米浆中溶磷测定方法中加入的钼酸铵、酒石酸锑钾溶液[5]可以长期保存，反应利用锑的存在情况下，以硫酸肼为还原剂在常温下发生显色反应，生成磷钼蓝络合物，操作过程中需要考虑试样溶液的酸度范围，这会给试验中增加因样品个体之间差异而造成试样显色不充分，但采用分立显色剂，能长期保存，试验过程中选用比色管稀释样品工作曲线的线性不易控制。本文方法中所用试剂在冰箱中保存期为两周，使用时为避免浪费，需按用量配制。

选用量瓶配制试样能使标准曲线溶液浓度更精准，线性更好。

综上所述，该方法操作简单，重现性好，经样品测试，结果比较满意，可以作为玉米浆质量标准中溶磷含量的测定方法应用于生产实践中，因钼酸铵和米吐尔溶液的保存期较短，可应用于发酵生产过程中对玉米浆溶磷含量的检验。

[1]魏甲乾,王治业,祁宏山,孙智敏,杨晖,周剑平.玉米浆在右旋糖酐发酵生产中的应用[J]中国酿造,2008,(10):9.

[2]舒迎庆.蛋白粉水解液替代玉米浆在谷氨酸发酵生产中的应用[J].发酵科技通讯,1992,21(4):25～27,11.

[3]张玉芝,李玉芳,张敏.谈影响玉米浆质量的因素[J].赤峰学院学报(自然科学版),2007,23(4):91～91,100.

[4]发酵用玉米浆的关键指标[R]淀粉与淀粉糖,2003:(3):44-45.

[5]宋文元,周淑南.玉米浆中溶磷的分光光度测定[J].淀粉与淀粉糖,1996,(1):34～36

[6]顾洪云.分光光度计法制作标准曲线应注意的问题[J].中国氯碱,2011,(7):36～37.

[7]ISO 3946-1982 淀粉及其衍生物产品.总磷含量的分光光度测定[S].

[8]GB 11893-89 水质 总磷的测定,钼酸铵分光光度法[S].

[9]俞文和.新编抗生素工艺学[M].北京:中国建材工业出版社1996.9.

[10]陈志娟,蔡梦华,高素虹.食品中磷测定方法研究[J].预防医学论坛,2009:12.

[11]质量控制实验室与物料系统[S]中国医药科技出版社,2011 年8 月第一版.