化瘀止痛散的薄层鉴别研究

冯锁民，宋 琳，翟西峰，张存劳，李惠民，王 宁，徐 璐

(1 西安医学院 药学院，西安 710021；2 商洛职业技术学院，商州 726000)

化瘀止痛散是由血竭、三七、冰片、乳香、没药、红花、儿茶等十多味中药经粉碎混合制成的正在使用的医院制剂，具有活血化瘀、止痛止血的作用.临床用于跌打损伤、血瘀止痛、外伤出血、疮疡不敛等疾病的治疗.为了加强该制剂的质量控制，按照新的医院制剂再注册管理办法要求，我们重点对处方中的药材血竭、冰片、三七进行了薄层色谱鉴别方法的研究.

1 实验部分

1.1 仪器与材料

电子天平(ALC-210.4,赛多利斯科学仪器(北京)有限公司)；超声波清洗器(KQ5200E型，昆山市超声仪器有限公司)；三用紫外分析仪(ZF-7型，上海嘉鹏科技有限公司)；旋转蒸发器(RE-2000A，巩义市予华仪器有限责任公司)；电热鼓风干燥箱(DHG-9140B，上海安亭科学仪器有限公司).

甲醇、乙酸乙酯、正丁醇、环己烷、乙醚、氨水(均为天津市东河红岩试剂厂生产，AR)；硅胶G(青岛海浪硅胶干燥剂厂，薄层层析用)；羧甲基纤维素钠(上海山浦化工有限公司).

化瘀止痛散(规格：3g×6瓶，西安航天医院制剂室生产)；龙血竭(批号：090702，西双版纳药业有限责任公司).三七皂苷R1(批号：110745-200617)、人参皂苷Rg1(批号：0703-200119),人参皂苷Re(批号：110754-200822)，以上对照品均由中国药品生物制品检定院提供.

1.2 方法与结果

1.2.1 化瘀止痛散中血竭的薄层鉴别

(1) 供试品溶液的制备.取化瘀止痛散粉末约3 g，加乙醚30 mL于带塞锥形瓶中，密塞，振摇10min，滤过，作为供试品溶液.

(2) 对照药材溶液的制备.取血竭对照药材0.1g，制法同(1).

(3) 阴性对照液的制备.按化瘀止痛散处方,制备不含血竭的阴性对照3g，提取方法同(1).

(4) 薄层方法.照薄层色谱法(附录Ⅵ B)[1]试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液、阴性对照溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(99∶1)为展开剂[2]，饱和15 min，上行展开6 cm，取出，晾干.

(5) 薄层结果.化瘀止痛散中血竭的薄层色谱结果如图1.从图1可以看出，供试品色谱中,在与对照药材色谱相应位置上分别显粉红色的斑点，阴性对照在相应位置无干扰斑点.

1 供试品;2 血竭对照药材; 3 阴性对照图1 化瘀止痛散中血竭的薄层色谱图Fig.1 TLC of the Draconis Sanguis in Huayuzhitong Powders 1 sample; 2 draconis sanguis; 3 negative sample

1.2.2 化瘀止痛散中冰片的薄层鉴别

(1) 供试品溶液的制备.取化瘀止痛散粉末约3 g，加乙醚30 mL于带塞锥形瓶中；密塞，振摇10min，滤过，作为供试品溶液.

(2) 对照药材溶液的制备.取冰片对照药材0.1g，方法同(1).

(3) 显色剂的配制.取5 g香草醛，用10%硫酸乙醇(取硫酸2.85 mL，加乙醇稀释至50 mL,即得)100 mL溶解[2].

(4) 薄层方法.照薄层色谱法(附录Ⅵ B)[1]试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯(20∶1)为展开剂[3]，饱和15 min，上行展开6 cm，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸乙醇溶液,吹干.

(5) 薄层结果.化瘀止痛散中冰片的薄层结果如图2，从图中可以看出供试品与对照品色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰.

1 供试品;2 冰片对照药材;3 阴性对照图2 化瘀止痛散中冰片的薄层色谱图Fig.2 TLC of the Borneolum Syntheticum in Huayuzhitong Powders 1 sample; 2 borneolum syntheticum; 3 negative sample

1.2.3 化瘀止痛散中三七的薄层鉴别

(1) 供试品溶液的制备[4-6].取化瘀止痛散粉末3 g，加氯仿30 mL，超声处理30 min，滤过，药渣挥去氯仿，加30 mL甲醇，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，加水20 mL溶解，转移至分液漏斗中，加水饱和的正丁醇溶液30 mL萃取，取正丁醇层，加氨试液洗三次(20 mL，15 mL，10 mL)，取正丁醇层蒸干，残渣加水5 mL使溶解，过D-101型大孔树脂，静态吸附1 h，用纯化水洗脱至无颜色，弃去洗脱液.再用40%乙醇洗脱至无颜色，收集40%乙醇洗脱液，蒸干，残渣加2 mL甲醇溶解，作为供试品溶液.

(2) 对照药材溶液的制备.取三七对照药材0.5 g,加水5滴，拌匀，再加以水饱和的正丁醇5 mL，密塞，振摇10 min，放置2 h，滤过，滤液加三倍量以正丁醇饱和的水，摇匀，放置使分层，取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为对照药材溶液.

(3) 阴性对照溶液的制备.取按化瘀止痛散处方制备的不含三七的阴性对照3g，制备方法同(1).

(4) 对照品溶液的制备.取人参皂苷Rg1及三七皂苷R1对照品，加甲醇各制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液.

(5) 显色剂的配制.取1 mL硫酸溶液,缓缓加入9 mL纯化水中,即得.

(6) 薄层色谱法.照薄层色谱法(附录Ⅵ B)[1]试验，吸取上述6种溶液各1 μL ，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(65∶35∶10)10 ℃以下放置12 h后的下层溶液为展开剂，饱和15 min，上行展开8 cm，取出，晾干，喷以上述显色剂，在105 ℃加热至斑点显色清晰.

(7) 薄层结果.化瘀止痛散中三七的薄层色谱如图3.从图3可以看出供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应位置上分别显相同颜色的斑点，阴性对照在相应位置无斑点干扰.

1 供试品;2 三七皂苷R1;3 人参皂苷Rg1;4 三七对照药材;5 阴性对照 图3 化瘀止痛散中三七的薄层鉴别图Fig.3 TLC of the Panax Notoginseng in Huayuzhitong Powders1 sample;2 notoginseng saponins R1; 3 ginsenosides Rg1;4 Panax Notoginseng; 5 negative sample

2 讨论

2.1 化瘀止痛散中血竭的展开系统和点样方式的选择

为了获得理想的薄层效果，对化瘀止痛散中的血竭的点样方式分别按表1进行了两种点样方式的比较，结合薄层结果，最终筛选出条带状点样为化瘀止痛散中血竭的点样方式.

同时对化瘀止痛散中血竭的薄层展开溶剂系统分别按表1进行了实验，从3种展开剂的薄层结果中可以看出以氯仿-甲醇(99∶1)做为展开剂展开后，供试品在对照品相应位置上斑点清晰可见，无干扰，因此最终选用氯仿-甲醇(99∶1)作为化瘀止痛散中血竭的薄层展开系统.

2.2 化瘀止痛散中三七样品处理方法选择

为了获得理想的薄层效果，对化瘀止痛散中三七样品的处理方法分别按表2进行3种方法的比较，结合薄层结果最终选出正文方法1.2.3中(1)为化瘀止痛散中三七样品的最佳处理方法.该方法制得的供试品溶液薄层斑点圆整，清晰，分离度好.

表1 化瘀止痛散中血竭的展开系统和点样方式选择Tab.1 selection developing system and sample mode of draconis sanguis

表2 化瘀止痛散中三七样品处理方法的选择

3 结论

本实验所用的化瘀止痛散由于药味较多，相互干扰的因素较多，经多次试验，试用了多种供试品制备方法和展开系统，摸索出了化瘀止痛散中血竭、三七、冰片专属性较高的薄层鉴别方法，该方法简便，专属性强、重现性好，可用于化瘀止痛散的定性质量控制.

参 考 文 献

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:中国医药科技出版社,2010:附录34，133,136,11.

[2] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中药薄层色谱彩色图集[M].北京:人民卫生出版社,1993.

[3] 秦华珍,邓家刚,陈 勇,等.黄龙肝脂消颗粒质量标准的实验研究[J].中成药, 2004,26(7): 535-538.

[4] 孟 琼,陈治宇.三七总皂苷提取分离及分析方法研究进展[J].承德医学院学报,2010,27(2):198-199.

[5] 许 梅,郭 敏.舒心络胶囊薄层色谱定性鉴别研究[J].中国药业,2012,21(5):24-25.

[6] 于 建,陆继伟,王 珂,等.复方丹参片和复方丹参颗粒中三七薄层色谱鉴别的研究[J].中国药品标准,2012,13(4):249-251.