HPLC法测定森登-9汤中栀子苷的含量

2014-07-30王晓娟

中国民族医药杂志 2014年1期

关键词：液相色谱仪量瓶栀子

王梅王晓娟

(1.内蒙古妇幼保健院，内蒙古呼和浩特 010020;2.锡盟食品药品检验检测中心，内蒙古锡林浩特 026000)

蒙成药森登-9汤由文冠木、栀子、诃子、决明子、苦参、黄柏、川楝子、枫香子、苘麻子等9味药组成，处方中栀子为主药成分，栀子苷可作为森登-9汤中含量指标。本文采用HPLC方法对栀子苷进行测定。

1 仪器、材料与试剂

岛津SPD-20AT高效液相色谱仪。栀子苷对照品由中国药品生物制品检定所提供;森登-9汤由镶黄旗旗蒙医院提供，森登-9汤模拟样品自制。乙睛、甲醇为色谱纯，水为高纯水，其他试剂均为分析纯。

2 含量测定

2.1 色谱条件:色谱柱天河 C18(250mm ×4.5mm，5μm);乙腈-水-甲醇(12:88:1)为流动相，检测波长为238nm，流速为1mL·min-1，柱温为40。C。

2.2 提取时间考察与样品制备:参照《中国药典》2005年版一部“三子散”项下栀子苷含量测定的方法，选用甲醇作为提取溶剂精密称取0.3g，至具塞锥形瓶中，精密加入甲醇溶液25mL，密塞，称定重量，超声处理(功率300W，频率40kHz)50min，放冷，称定重量，甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，制得供试品溶液，进行测定。实验中考察了超声提取10min、20min、30min、40min、50min、60min 和 70min 不同超声提取时间对提取效率的影响，结果见表1。

从表1中数据可见，超声处理50min、60min和70min栀子苷的含量基本一致，故超声提取时间定为50min。

2.3 专属性:精密称取栀子苷对照品15.04mg，置50mL量瓶中，加甲醇(色谱纯)溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1mL于10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成对照品溶液。在2.1色谱条件下，精密吸取对照品溶液10μL注入液相色谱仪，依法测定。见图1。

表1 提取效率的考察表

图1 栀子苷对照品的HPLC图

取上述模拟阴性对照约0.3g，精密称定，制成阴性对照液，精密量取续滤液10μl注入液相色谱仪，同法测定。

图2 阴性对照液的HPLC图

取森登-9汤，研细，称取约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇(分析纯)25mL，密塞，称定重量，超声处理50min，放冷，再称定重量，用甲醇(分析纯)补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10μL注入液相色谱仪，同法测定。

图3 森登-9汤HPLC图

测定结果:阴性对照色谱图在与栀子苷对照品以及供试品色谱相对应的保留时间处无色谱峰出现，表明处方中其它组分对栀子苷的测定无干扰。

2.4 线性关系考察:取栀子苷对照品15mg，精密称取为15.04mg，置150mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取 0.5、1、2、3、4、5、6mL，分别置 10mL 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，各取20μL进样，按上述色谱条件测定，以峰面积对浓度进行回归分析，结果栀子苷在0.1003～1.2032μg范围内呈良好的线性关系。

回归方程为:Y=1379109.7770X+1331.1041，R2=0.9993

表2 栀子苷的标准曲线数值表

2.5 稳定性试验取同一份供试品溶液(批号:20090604)，分别在 0h、2h、4h、8h、12h、24h 进行测定，结果见表 3。

表3 不同时间测定样品中栀子苷的峰面积积分值

从表3中数据可见，栀子苷在24h内的峰面积积分值基本稳定不变。

2.6 精密度:取同一批号供试品(批号:20130508)6份，研细，精密称取0.3g，按2.2项下的方法制得供试品溶液;另精密称取栀子苷对照品15.04mg依法制成每1mL含栀子苷30.08ug的溶液作为对照品溶液。分别精密吸取上述溶液各20ul注入色谱仪测定每份供试品含量。按外标法计算含量。平均含量(2.6537mg·g-1)，RSD(%)1.1。

2.7 回收试验:栀子苷对照品溶液的制备精密称取栀子苷对照品15.04mg，置50m量瓶中，加甲醇制成每1mL含栀子苷0.3008mg的溶液，再分别精密吸取5mL、10mL、15mL分别至 200mL 量瓶中制成 7.52μg·mL-1、15.04μg·mL-1和22.56μg·mL-1栀子苷对照品溶液。取供试品(批号:20130508 含量2.6537mg·g-1)9 份，各约 0.15mg，精密称定，分别置9个具塞锥形瓶中，在1-3、4～6、7～9号分别精密加入浓度为0.00752mg·mL 、0.01504mg·mL 、0.02256mg·mL-1的栀子苷对照品甲醇溶液25mL，按2.2项下的方法制得供试品溶液，分别精密吸取上述溶液各20μL注入液相色谱仪进行测定。平均回收率分别为101.1、101.3、98.8，RSD(%)为 0.5、0.3、0.6。