夏天胶囊对硝酸甘油偏头痛模型大鼠行为及5-羟色胺含量的影响

田 涛，王红宇

(中国人民解放军成都军区成都药材仓库，四川 成都 610017)

偏头痛是反复发作的一侧或双侧头部搏动性疼痛，并伴有恶心呕吐等植物神经症状，是临床常见的原发性头痛，也是常见病、多发病之一。针对偏头痛的防治手段也各有利弊，其发病率仍居高不下。经多年的临床实践发现，以夏天无、天麻等组方的夏天胶囊治疗偏头痛，临床疗效较好。本试验中通过研究夏天胶囊对实验性偏头痛大鼠的血清和脑组织5-羟色胺(5 -HT)含量和行为学的影响，探讨其对偏头痛的作用及其作用机制，为临床辨证施治提供依据。

1 材料与方法

1.1 仪器、材料及动物

Agilent 1100 型高效液相色谱仪(Agilent 公司);LGR16-W 型高速冷冻离心机(北京医用离心机厂)。夏天胶囊(自制，规格为每粒0.5 g，由夏天无18 g、天麻10 g、川芎15 g、川牛膝15 g 组方);氟桂利嗪胶囊(天津药业集团新郑股份有限公司);5 -羟色胺对照品(Sigma 公司，AR 级);乙酸钠、柠檬酸、辛烷基磺酸钠、正二丁胺、乙二胺四乙酸(美国Amresco 公司)。雄性SD 大鼠60 只，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，动物合格证号为SCXK(沪)2007 -0005，9 周龄，体重(260±20)g，均适应性喂养1 周。

1.2 方法

分组与造模:取60 只大鼠，随机分为6 组，即正常对照组(A 组)、模型组(B 组)、氟桂利嗪阴性对照组(C 组)及夏天胶囊高、中、低3 个剂量组(D1，D2，D3 组)。A 组和B 组予蒸馏水灌胃，用药组(C，D1，D2，D3 组)分别给予氟桂利嗪(0.5 mg/10 g)和高、中、低剂量夏天胶囊(相当于每1 kg 体重20，10，5 g 生药)灌胃，每日1次，连续给药7 d。按照Tassorelli 等[1]报道的方法复制实验性偏头痛模型。各组动物末次给药后，除A 组皮下注射等体积生理盐水外，其余各组立即皮下注射硝酸甘油(GTN)10 mg/kg。

模型大鼠行为学观察:大鼠注射GTN 2 h 后，以出现双耳发红、前肢频繁挠头、爬笼次数为指标，观察4 h 内大鼠挠头次数。

血清和脑组织中5-HT 含量检测:在观察完行为学指标后，断头处死各组大鼠，收集颈部动静脉混合血3 mL，冷冻离心，取血清，置-20 ℃冰箱待处理。同时，冰盘上迅速分离出下丘脑，去除脑膜和血管，精确称重后置液氮缺保存，24 h 后将液氮罐中的组织置匀浆器中，用5%高氯酸匀浆，于温度4 ℃、转速10 000 r/min离心20 min，取上清液，置-20 ℃冰箱保存。测样时，室温下解冻，0.22 μm 微孔滤膜过滤;取上述血清200 μL 置1.5 mL EP 管内，再加入等体积的5%高氯酸溶液，加盖摇匀，室温放置20 min，10 000 r/min 离心15 min，取上清液，0.22 μm 微孔滤膜过滤。分别取微孔滤膜过滤的脑组织及血液样品20 μL，用高效液相色谱仪测定5 -HT 含量。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 对模型大鼠行为学的影响

结果见表1。可见，B 组大鼠在造模2 h 后的4 h 内挠头次数较A 组显著增多，高、中剂量夏天胶囊能明显减少大鼠的挠头次数(P ＜0.01 或P ＜0.05)，低剂量有减少挠头次数的趋势但无显显著性差异。

表1 夏天胶囊对偏头痛模型大鼠行为学及5 -HT 含量的影响(± s，n=10)

表1 夏天胶囊对偏头痛模型大鼠行为学及5 -HT 含量的影响(± s，n=10)

注:与A 组比较，△P ＜0.05，▲P ＜0.01。

组别A 组B 组C 组D1 组D2 组D3 组剂量--0.5 mg/kg 20 g/kg 10 g/kg 5 g/kg 4 h 内挠头次数(次)34.42±17.65▲86.87±30.40 58.65±27.34△47.35±26.25▲54.20±28.19△62.19±30.12脑组织(ng/g)425.58±92.33▲229.40±53.93 357.42±61.32▲333.57±57.28▲302.19±65.08△248.21±54.53血清(ng/mL)570.50±141.39▲378.22±98.38 508.69±89.28▲464.03±83.41△427.59±97.65 398.42±86.21

2.2 对模型大鼠脑组织及血清5 -HT 含量的影响

结果见表1。可见，与A 组比较，B 组脑组织和血清的5 -HT含量非常显著地降低(P ＜0.01);与B 组比较，D1 组及D2 组脑组织的5 -HT 含量显著升高(P ＜0.01 和P ＜0.05)，D3 组有升高趋势但无显著性差异;与B 组比较，D1 组血清的5 -HT含量显著升高(P ＜0.05)，D2 及D3 组有升高趋势但无显著性差异。

3 讨论

偏头痛病因复杂，确切的发病机制至今尚未完全阐明，最早阐述的为血管神经性学说，后来发现5-HT 和β-内啡呔为发病的主要因素，近年来认为与血浆中肽类活性物质有关[2]。GTN 可直接或间接地引起血管和神经两方面的变化:GTN 在局部的生成物，如NO 及cGMP，可直接对血管或神经元起作用;GTN 的间接作用较复杂，包括iNOS 的作用、炎症的生成、三叉神经血管系统的激活，还可能和痛觉过敏状态的形成和持续有关[3]。GTN 静脉注射大鼠模型的症状表现及病理变化与人类的偏头痛发作有高度的相似性，且动物易获得、经济、简便、相似性好。因此，选用GTN 静脉注射致大鼠偏头痛模型进行试验。结果表明，模型组动物在2 h 潜伏期后的4 h 内挠头次数、脑组织和血清的5 -HT 含量均显著增加，表明模型成功。

夏天胶囊由夏天无、天麻、川芎、川牛膝组方。夏天无具有降压镇痉、行气止痛、活血去瘀之功效，用于治疗高血压、偏瘫、风湿性关节炎、坐骨神经痛、小儿麻痹后遗症等[4]。研究表明，夏天无具有抑制血栓形成、减少脑微循环障碍、抗老年性痴呆、抗心律失常、降压、镇痛、抗炎作用及抑制乙酰胆碱酯酶活性等作用[5]。天麻性平、味甘，有平肝熄风止痉的功效，主治头痛眩晕、肢体麻木、小儿惊风、癫痫抽搐、破伤风。现代研究表明，天麻可使血压下降、心率减慢、心输出量增加、心肌耗氧量下降，可降低头部的血管阻力，对抗血栓形成，还具有镇静、镇痛抗炎及延缓衰老作用[6]。川芎为治疗头痛的圣药，现代药理学研究表明，其主要成分有川芎嗪、阿魏酸、川芎酚、川芎内酯、藁本内酯等，其中川芎嗪不仅能抗血栓形成，改善脑和外周微循环，还具有抗炎作用[7]。川牛膝性平，味甘、微苦，具有逐瘀通经、通利关节、利尿通淋、催产下胎之效。川牛膝的化学成分主要为生物碱、甾酮类和阿魏酸。现代研究表明，川牛膝则能通过增强红细胞变形能力而改善微循环，具有延缓衰老、抗血小板聚集、抗炎作用、促进蛋白质合成等作用[8]。本试验结果表明，夏天胶囊可有效减少偏头痛模型大鼠的挠头次数，提示其能有效缓解偏头痛的临床症状;同时，还可有效升高模型大鼠脑组织和血清5 -HT 的含量，提示其治疗偏头痛的作用机制可能与升高脑组织和血清中5 -HT的含量有关。这为夏天胶囊临床用于治疗偏头痛提供了理论依据。偏头痛的病因复杂，要彻底弄清夏天胶囊的作用机理，还需要更深入细致的研究。

[1] Tassorelli C，Greco R，Morocutti A，et al. Nitric oxide-induced neuronal activation in the central nervous system as an animal model of migraine:mechanisms and mediators[J].Functional Neurology，2001，16(4 suppl):69 -76.

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