醋酸氯己定的杀菌效果

李 飞，陈 羽

(1.沈阳药科大学制药工程学院，辽宁沈阳 110016;2.沈阳药科大学生命科学与生物制药学院，辽宁沈阳 110016)

近年来，许多新发及再发传染病对人类社会及人们的健康造成了极大威胁，研究及开发高效安全的广谱杀菌剂成为有效抗击传染病的重要途径之一［1］。各种高效、低毒、安全的新型消毒剂相继问世，很多已经应用于临床和家庭中。消毒药物的广泛使用，给人类的健康带来了重要保证，但消毒效果与选用消毒剂的种类有着密切的关系。近年来，国内外均致力于寻求高效、广谱、快速的杀菌消毒剂［2］。醋酸氯己定，又名醋酸洗必泰，具有极强的广谱抑菌、杀菌作用且毒性低，在生产生活中应用广泛。其主要作用机制是破坏病原微生物细胞壁原生质膜，快速杀死革兰阳性菌、革兰阴性菌、细菌芽胞、真菌及病毒等［3］。目前，市场上单纯的醋酸氯己定产品并不多见，一般是其复配产品。鉴于醋酸氯己定属于常用的消毒剂，在使用过程中，其消毒效果往往受到微生物的种类、温度、浓度和pH值等因素的影响［4］。本文对醋酸氯己定的杀菌效果进行了实验室研究，以便为将来合理开发新型复配醋酸氯己定产品提供技术基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌种 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureusATCC 6538)、大肠埃希菌(Escherichia coli8099)、枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilisATCC 9372)、白假丝酵母菌(Canidia albicansATCC 10231)和黑曲霉(Aspergillius nigerATCC 16404)由沈阳药科大学微生物学与细胞生物学教研室提供。

1.1.2 培养基(g/L) 营养琼脂培养基:蛋白胨10.0，牛肉膏5.0，氯化钠5.0，琼脂粉14.0;沙堡琼脂培养基:葡萄糖40.0，蛋白胨10.0，琼脂粉14.0。

1.1.3 缓冲液(g/L) 标准硬水:CaCl20.304，MgCl20.139，用来配置待检消毒剂;磷酸盐缓冲液:Na2HPO42.83，KH2PO41.36，pH 7.2;中和剂:Na2S2O35.0，溶解于磷酸盐缓冲液中，起中和消毒剂的杀菌作用。

1.2 方法

1.2.1 菌悬液的制备 取5.0 mL磷酸盐缓冲液加入已经活化3代的新鲜斜面培养物试管内，反复吹吸，洗下菌苔。用移液管将洗液移至另一无菌试管中，用涡旋混合器振荡20 s，使菌体悬浮均匀。初步制成的菌悬液，先用比浊测定法粗测其含菌浓度，然后用磷酸盐缓冲液稀释至1×1011～5×1011cfu/L之间。悬液可保存于4℃冰箱中备用，当天使用不得过夜。菌悬液在使用时，应先进行活菌培养计数。

1.2.2 芽胞悬液的制备 取已经活化3代的B.subtilisATCC 9372液体培养物3 mL，接种于罗氏瓶中营养肉汤培养基表面，置于37℃恒温培养箱内，培养8 d。用接种环取菌样少许，采用孔雀绿法进行芽胞染色，并在显微镜下进行镜检。当芽胞形成率达95%以上时，即可进行悬液的制备。用无菌水30 mL轻轻推刮下菌苔，集中于一含玻璃珠的无菌三角瓶中，振摇30 min，分散培养物，制成均匀的悬液。将盛装上述悬液的三角瓶置于45℃水浴中24 h，使菌自溶断链，分散成单个芽胞。最后，将三角瓶放于80℃水浴中10 min，以杀灭残余的细菌繁殖体，待冷至室温后，即为芽胞悬液。芽胞悬液可保存于4℃冰箱中备用，有效期为半年。芽胞悬液在使用时，应先进行活菌培养计数。

1.2.3 黑曲霉孢子悬液的制备 用接种环划线接种A.nigerATCC 16404于沙堡斜面培养基上，置28℃恒温培养箱中培养10 d。吸取体积分数为0.05%的吐温-80水溶液4 mL置于斜面表面，刮洗分生孢子，将孢子悬液移入装有玻璃珠的三角瓶中，轻轻振摇30 min后，滤去菌丝。孢子悬液于4℃储存，不能超过2 d，使用前混合均匀，并在显微镜下观察，以孢子不萌发为宜。

1.2.4 消毒液的配置 取0.1 g醋酸氯己定(锦州九泰药业有限责任公司)加入内装100 mL标准硬水的三角瓶中，混匀，即得0.1%醋酸氯己定消毒液。

1.2.5 中和剂的考察试验 设平行8组试验，以S.aureusATCC 6538为试验菌，按悬液定量杀菌试验程序进行［4］。a.消毒液+菌悬液;b.(消毒液+菌悬液)+中和剂;c.中和剂+菌悬液;d.(消毒液+中和剂)+菌悬液;e.磷酸盐缓冲液+菌悬液(正常菌对照);f.磷酸盐缓冲液;g.中和剂;h.培养基。中和剂及其浓度的判定标准:a组不长菌或仅有极少数菌落生长;b组有菌落生长，较a组多，但较c、d、e组少;c、d、e组菌落数分别在1×108～5×109cfu/L之间，且组间菌落数误差率不应超过15%;f、g、h组无菌生长。借此可判定所选中和剂及其浓度适宜。

1.2.6 悬液定量杀菌试验 试验时，先将内装5 mL消毒液的试管置于20℃水浴中5 min，再将0.1 mL菌悬液加入其中，混匀，作用至规定时间。取0.5 mL菌药混和液，移入4.5 mL中和剂溶液的试管中，混匀，中和作用10 min。取0.1 mL涂平板，置恒温培养箱内培养，活菌计数。以内装5 mL标准硬水的试管同步操作所得活菌数为基准，计算杀菌率。

1.2.7 模拟现场试验 选择木质桌面，在桌面上划定5 cm×5 cm范围的2个不同区域，以涂抹法污染E.coli8099悬液(菌数为1×107cfu/L)，干燥后用棉拭在其中一个区域沾采样液涂抹采样作消毒前对照;然后将0.1%醋酸氯己定均匀喷涂在另一区域，作用10 min，以同样方法进行消毒后采样;对消毒前后采样液进行活菌计数，观察杀菌效果，计算杀菌率。

2 结果与分析

2.1 中和剂的考察试验

经检测，用质量浓度为0.5 g/L的Na2S2O3可有效中和0.1%醋酸氯己定的杀菌作用，中和剂及中和产物对受试菌及培养基无影响(见表1)。

2.2 醋酸氯己定的杀菌作用考察

采用悬液定量杀菌试验，考察0.1%醋酸氯己定对S.aureusATCC 6538、E.coli8099、B.subtilisATCC 9372、C.albicansATCC 10231和A.nigerATCC 16404的杀菌效果(见表2)。由表2可知，随着作用时间的增加，0.1%醋酸氯己定起到了显著的杀菌效果。

表1 消毒剂的中和剂试验Table1 The result of neutralizer test for the disinfectant

表2 醋酸氯己定的杀菌效果Table2 Germicidal efficacy of the chlorhexidine acetate

2.3 模拟现场试验

用0.1%醋酸氯己定进行模拟现场试验。试验结果表明:0.1%醋酸氯己定对E.coli8099悬液作用10 min，杀菌率为95.96%。说明0.1%醋酸氯己定具有明显的杀菌作用，为将来合理开发新型中草药复配醋酸氯己定产品提供技术支持。

3 讨论

课题组对醋酸氯己定的杀菌消毒效果进行了实验室研究，发现0.1%醋酸氯己定对某些细菌(S.aureusATCC 6538、E.coli8099)、细菌芽胞(B.subtilisATCC 9372)，某些酵母菌和曲霉菌(C.albicansATCC 10231、A.ninerATCC 16404)均起到了显著的杀菌效果，为将来合理开发新型、高效复配醋酸氯己定产品提供技术基础。

醋酸氯己定是最常用的双胍类化合物之一，具有相当强的广谱抑菌、杀菌作用，是一种较好的杀菌消毒剂。20世纪90年代初，醋酸氯己定在我国主要用作表面消毒防腐剂，其杀菌效力比市场常见的同类产品如苯扎溴铵、度米芬、洁消精、清毒净等季铵盐类阳离子型表面活性剂效果都好，渗透力极强。即使在有血清、血液及其他分泌物的条件下，仍有很好的杀菌消毒效果。醋酸氯己定以毒性低、毒副作用小、无局部刺激作用、过敏反应极少见等优点，深受医药界的欢迎，其用量及使用范围越来越大。

醋酸氯己定除了外用作消毒防腐剂外，在其他疾病的防治方面同样具有显著的效果，药用范围逐步扩大。醋酸氯己定可以用作酒精代用品，效果远远好于酒精。还可以用于饮用水消毒，预防肠道传染病，治疗细菌性痢疾、皮肤、咽喉、眼睛、口腔、耳、鼻、阴道、肛门等的真菌及细菌感染以及烧烫伤、冻伤和腋臭等。在食品方面，可以用作防腐剂，有用量少、成本低、保存时间长、不影响口感、无毒副作用等优点，优于当前使用的同类产品。此外，醋酸氯己定还能用做日常生活中的消毒剂，如房间、卫生间、餐具、家具、衣物等的消毒。随着消毒剂的长期使用，细菌对消毒剂耐药性的逐年增加。因此，单纯的醋酸氯己定产品并不多见，开发新型醋酸氯己定复配系列产品，扩展其应用范围，具有广阔的市场应用前景。某些中草药具有良好的杀菌效果，细菌、真菌等对其不易产生耐药性，且中草药的毒副作用相对较小。当今世界共同聚焦食品和环境安全，开发安全高效的中草药复配消毒剂具有广阔的市场前途［6］。

［1］高琼，陈贵秋，李世康，等.三氯新与醋酸氯己定复方消毒液杀菌效果及毒性观察［J］.实用预防医学，2010，17(12):2500-2502.

［2］张冰，秦秀慧，李军，等.戊二醛和季铵盐复合消毒剂杀菌效果的试验［J］.动物医学进展，2002，23(3):70-71.

［3］姚四新，刘保国.洗必泰配制方法的改进及其消毒效果［J］.中国兽医杂志，2003，39(8):46-47.

［4］张冰，秦秀惠，李军，等.戊二醛和季铵盐复合消毒剂杀菌效果的试验［J］.动物医学进展，2002，23(3):70-71.

［5］卫生部卫生法制与监督司.消毒技术规范［S］.北京，中华人民共和国卫生部，2002:9-200.

［6］刘富来，冯翠兰.TS植物消毒剂消毒效果的初步研究［J］.中兽医医药杂志，2009，2:29-30.