不同采收季节的淫羊藿中朝藿定C和淫羊藿苷的含量比较

左建平，安显辉

（珠海星光制药有限公司，广东 珠海 519180）

淫羊藿为小檗科植物淫羊藿 Epimedium brevicornum Maxim．、箭叶淫羊藿 Epimedium sagittatum(Sieb．et Zucc．)Maxim．、柔毛淫羊藿 Epimedium pubescens Maxim．、巫山淫羊藿 Epimedium wushanense T．S．Ying、或朝鲜淫羊藿 Epimedium koreanum Nakai的干燥叶[1]。另外粗毛淫羊藿 E．acuminutum Franch．、天平山淫羊藿E myrianthum Steam和黔岭淫羊藿 E．leptorrhizum Steam为《贵州省中药材、民族药材质量标准》允许使用品种，淫羊藿属植物在中国约有40余种[2]。淫羊藿 Herba Epimedii有益精气、坚筋骨、补腰膝、强心力之功效。迄今已报道的淫羊藿属植物约55种[3]，广泛分布于除新疆、西藏、内蒙古、河北、山东以外的各个省份。贵州是全国淫羊藿药材产量最大的地区，主流品种为粗毛淫羊藿，其次为黔岭淫羊藿、巫山淫羊藿。本研究通过对粗毛、黔岭、巫山淫羊藿药材的不同采收季节、不同产地中淫羊藿苷和朝藿定C的含量进行测定，为贵州产主流淫羊藿药材的质量评价提供科学依据，为含淫羊藿药材的中成药质量控制提供参考。

1 仪器与试药

HP1100型高效液相色谱仪 (在线脱气机、四元泵、自动进样器、柱温箱、VWD检测器，ChemStation色谱工作站)；KQ-300DA型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。朝藿定C对照品（自制并鉴定结构，经高效液相色谱法检测纯度大于98%）；淫羊藿苷（中国药品生物制品检定所，批号为0737-9910）；乙腈为色谱纯，水为乐百氏纯净水，其他试剂均为分析纯；粗毛淫羊藿、巫山淫羊藿（均自采于贵州省贵阳市修文县、贵州省贵阳市药用植物园），黔岭淫羊藿（自采于贵州省安顺市关岭自治县）。

2 方法与结果

2．1 色谱条件

色谱柱：SinoChrom ODS-AP 柱(250 mm × 4．6 mm，5．0 μm，大连依利特分析仪器有限公司 )；柱温：25℃；流动相：乙腈(A)-水(B)，梯度洗脱（0 ～22 min，27% →29%A；22 ～23 min，29% →100%A；23～34 min，100%A；34～36 min，100% →27%A；36～50 min，27%A）；流速：1 mL ／min；进样量：10 μL；检测波长：270 nm。

2．2 溶液制备

精密称取朝藿定C和淫羊藿苷对照品，加适量甲醇制成朝藿定 C和淫羊藿苷质量浓度分别为1．322，1．513 g／L的混合溶液，摇匀，即得对照品溶液。分别取不同月份的粗毛淫羊藿、巫山淫羊藿、黔岭淫羊藿粉末(过80目筛)0．2 g（同时另取粗毛淫羊藿、巫山淫羊藿、黔岭淫羊藿药材粉末测定水分），精密称定，置锥形瓶中，加70%乙醇20 mL超声提取1 h，并补足减失的质量，用微孔滤膜(0．45 μm)滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2．3 方法学考察

系统适用性试验：分别精密吸取朝藿定C、淫羊藿苷的对照品溶液和混合对照品溶液及3种供试品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，记录色图谱。结果发现，朝藿定C对照品在14．28 min时出峰，淫羊藿苷对照品在16．89 min时出峰，供试品图谱在相同时间出现和对照品同样的峰，且基线较平，杂质峰较少，且朝藿定C、淫羊藿苷峰和相近的杂质峰分离完全（分离度大于1．5）。见图1。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：精密称取干燥的朝藿定C对照品(干燥品按98．0% 计)13．49 mg 和淫羊藿苷对照品 15．13 mg，置 10 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得朝藿定C和淫羊藿苷对照品溶液（每1 mL含朝藿定 C 1．322 mg，淫羊藿苷1．513 mg）。精密吸取朝藿定 C对照品溶液1，2，3 mL和淫羊藿苷对照品溶液 0．2，0．4，1 mL，分别置 10 mL 1，2，3 号容量瓶中，再于 1 号瓶中取 1，2，4 mL分别置 4，5，6号 10 mL容量瓶中，并加甲醇定容至刻度，摇匀。分别精密吸取上述6种溶液各10 μL注入高效液相色谱仪，记录色谱，以峰面积（A）为纵坐标、进样量（X）为横坐标进行线性回归，得回归方程，朝藿定 C为 A＝18 025．706 4 X＋6．255 671 1（r＝0．999 9）， 淫 羊 藿 苷 为 A＝22 664．828 3 X-3．752 616 4（r＝0．999 9）。结果表明，朝藿定 C 和淫羊藿苷进样量在 13．22 ～ 396．6 μg 和 3．026 ～151．3 μg 范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度考察：精密量取朝藿定C质量浓度为1．322 g／L的对照品溶液1 mL和淫羊藿苷质量浓度为1．513 g／L的标准溶液0．2 mL，分别置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得朝藿定 C质量浓度为 132．2 μg／mL和淫羊藿苷质量浓度为30．26 μg ／mL 的溶液，精密吸取 10 μL，注入高效液相色谱仪，重复进样6次，测定峰面积。结果朝藿定C的 RSD为0．43%，淫羊藿苷的 RSD为0．49%，表明仪器精密度良好。

稳定性试验：依法制备供试品溶液，精密吸取10 μL，分别于0，6，8，12，14 h时注入高效液相色谱仪，测定峰面积。结果朝藿定C峰面积的 RSD为0．91%，淫羊藿苷峰面积的 RSD为1．05%，表明供试品溶液在14 h内稳定。

重复性试验：取粗毛淫羊藿药材干燥样品，依法制备5份供试品溶液，精密吸取10 μL，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，计算朝藿定C和淫羊藿苷的平均含量。结果朝藿定C和淫羊藿苷的平均含量的 RSD分别为0．84%和1．47%，表明该方法重现性良好。

加样回收试验：精密称取已测定含量的样品 (朝藿定C含量为 0．930 64% ，淫羊藿苷含量为 0．153 18%)0．1 g，置锥形瓶中，分别按80%，100%，120%的比例加入已知质量浓度的对照品混合溶液，每个浓度平行3份，共9份，加70%乙醇20 mL超声提取 1 h，放冷，用 70%乙醇补足减失的质量，用 0．45 μm滤膜过滤，取续滤液，精密吸取10 μL，注入高效液相色谱仪，测定峰面积。结果见表1。

表1 朝藿定C和淫羊藿苷加样回收试验结果(n＝9)

2．4 样品含量测定

将于不同月份采集的淫羊藿药材的干燥粉末于80℃干燥3 h，依法制备供试品溶液和对照品溶液，分别进样10 μL，记录色谱图，测定峰面积，按公式计算含量。结果见表2。

表2 3种样品中朝藿定C和淫羊藿苷含量测定结果（%）

3 讨论

分别考察乙腈-水(28∶72)、乙腈-水(30∶70)及不同乙腈比例在22，24，25 min内从27%到29%的3种梯度洗脱条件，结果以本试验中采用的分离条件较好，朝霍定C和淫羊藿苷能有效分离。淫羊藿药材的主要有效成分为黄酮类化合物，其中朝霍定C、淫羊藿苷在药材中占比较大，而2010年版《中国药典(一部)》仅以淫羊藿苷作为药材的含量测定指标，不能客观反映淫羊藿药材的内在质量，应以朝霍定C和淫羊藿苷作为淫羊藿药材的质控指标。本方法简便、快速、准确、重复性好，能较全面地控制淫羊藿药材中有效成分的含量，应增加淫羊霍苷和朝霍定C作为淫羊藿药材的质控指标。

[1]国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[M]．北京：中国医药科技出版社，2010：306．

[2]王悦云，徐文芬，何顺志．中国淫羊藿小花类群的研究现状[J]．贵阳中医学院学报，2005，27(4)：6．

[3]郭宝林，肖培根．中药淫羊藿主要种类评述[J]．中国中药杂志，2003，28(4):303．