高效液相色谱-蒸发光散射检测器法测定氟比洛芬酯注射液中大豆油含量

2014-11-08张勉，李超

中国药业 2014年7期

张勉，李超

(重庆市食品药品检验所，重庆 401121)

氟比洛芬酯注射液是以脂微球为药物载体的非甾体类镇痛剂。药物进入体内靶向分布到创伤及肿瘤部位后，氟比洛芬酯从脂微球中释放出来，在羧基酯酶作用下迅速水解生成氟比洛芬，通过氟比洛芬抑制前列腺素的合成而发挥镇痛作用。大豆油是制备乳剂的重要原辅料，其含量直接影响乳剂的成型质量，在氟比洛芬酯注射液中大豆油作为氟比洛芬酯的载体，有利于氟比洛芬酯达到靶向部位，更好地吸收。但由于大豆油为长链甘油三酸酯，紫外特征不强，常规的紫外检测器无法完成对其的测定。国内仅有一个厂家生产该品种，现行质量标准[1]中未对大豆油进行含量控制。笔者采用高效液相色谱法分离，利用蒸发光散射检测器测定氟比洛芬酯注射液中大豆油的含量，有效地解决了大豆油在该注射剂中的检测问题，方法准确，操作简便。

1 仪器与试药

Waters e2695型高效液相色谱仪。大豆油对照品(中国药品生物制品检定所，批号为100277－201103);大豆油原料(重庆药友制药有限责任公司，批号为R1105067);氟比洛芬酯注射液(北京泰德制药股份有限公司，批号分别为5091N，5012B，5022B);正己烷与异丙醇均为色谱纯，冰醋酸为分析纯。

2 方法与结果

2．1 色谱条件与系统适用性试验

检测器:Waters 2424型蒸发光检测器(雾化气:空气，雾化压力:35．0 psi，漂移管温度:70℃);色谱柱:菲罗门 Luna Silica色谱柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm);流动相:正己烷－异丙醇－冰醋酸(99．4 ∶0．5 ∶0．1);流速:1．0 mL/min;柱温:室温。进样量:10 μL。配制大豆油与油酸的混合溶液，按拟订方法测定，两者能较好地分离，见图1。

2．2 溶液制备

图1 高效液相色谱图

取大豆油对照品0．062 11 g，置25 mL容量瓶中，用正己烷－异丙醇(1∶1)的混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取 1．0，3．0，5．0 mL，分别置 10 mL 容量瓶中，加混合溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密量取样品1 mL，置25 mL容量瓶中，用混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密取3 mL，置25mL容量瓶中，加混合溶液稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

2．3 大豆油原料的标定

取大豆油原料0．543 2 g，置100 mL容量瓶中，加混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5．0 mL，置50 mL容量瓶中，加混合溶液稀释至刻度，摇匀，依法测定，测得大豆油含量为 100．0% 。

2．4 方法学考察

线性关系考察:取大豆油原料0．853 6 g，置100 mL容量瓶中，加混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取1，2，4，5，6，8，10 mL，分别置50 mL容量瓶中，加混合溶液稀释至刻度，摇匀，依法测定，得回归方程 Y=0．001 7 X+115．7(r=0．998)。结果表明，大豆油质量浓度在 1．707～17．072 μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验:取同一质量浓度对照品溶液，连续进样6次。结果的 RSD为0．57%(n=6)，表明仪器精密度良好。

重复性试验:取样品(批号为5091N)各1．0 mL，共6份，分别置25 mL容量瓶中，加混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取3．0 mL，置25 mL容量瓶中，加混合溶液稀释至刻度，摇匀，依法测定。结果样品平均含量为10．5 g/mL，RSD为2．4%，表明方法重复性良好。

加样回收试验:取大豆油原料0．543 2 g，置100 mL容量瓶中，加混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。取样品(批号为5091N)各 1．0 mL，共9份，分别置25 mL容量瓶中，加混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取3．0 mL，置 50 mL 容量瓶中，分别加入对照品贮备液 2．0，2．5，3．0 mL，各3份，加混合溶液稀释至刻度，摇匀，依法测定。结果见表1。

表1 大豆油加样回收试验结果(n=9)

检测限及定量限:以 S/N为3计算，大豆油的检测限为0．050 7 μg。以 S/N 为 10 计算，大豆油的定量限为 0．169 μg。

专属性试验:取样品1 mL，置锥形瓶中，加0．1 mol/L盐酸溶液2 mL，加热至沸，放冷，加0．1 mol/L氢氧化钠溶液2 mL，加混合溶液稀释至25 mL，摇匀，取3．0 mL，置25 mL容量瓶中，加混合溶液稀释至刻度，摇匀，作为酸破坏溶液。取样品1 mL，置锥形瓶中，加0．1 mol/L氢氧化钠溶液2 mL，加热至沸，放冷，加0．1 mol/L盐酸溶液2 mL，加混合溶液稀释至25 mL，摇匀，取3．0 mL，置25 mL容量瓶中，加混合溶液稀释至刻度，摇匀，作为碱破坏溶液。取样品1 mL，置锥形瓶中，加30%过氧化氢溶液2 mL，加热至沸，放冷，加混合溶液稀释至25 mL，摇匀，取3．0 mL，置25 mL容量瓶中，加混合溶液稀释至刻度，摇匀，作为氧化破坏溶液。取样品1 mL，置锥形瓶中，加水2 mL，加热至沸，放冷，加混合溶液稀释至25 mL，摇匀，取3．0 mL，置25 mL容量瓶中，加混合溶液稀释至刻度，摇匀，作为高温破坏溶液。取样品置日光下放置48 h后，取1 mL置25 mL容量瓶中，加混合溶液稀释至刻度，摇匀，取3．0 mL，置25 mL容量瓶中，加混合溶液稀释至刻度，摇匀，作为光破坏溶液。取上述破坏后的供试品溶液，按拟订色谱条件分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，见图3。可见，本品经破坏后产生的降解产物均能与大豆油有效分离(分离度大于1．5)，表明上述色谱条件可用于大豆油含量的测定。