气相色谱法测定通络祛痛膏中樟脑、薄荷脑和冰片含量

姜家书，谢其亮，李敦明，张春霞

(河南羚锐制药股份有限公司，河南 新县 465550)

通络祛痛膏由10多味药材及樟脑、薄荷脑、冰片辅以橡胶等基质制成的橡胶膏剂，具有活血通络、散寒除湿、消肿止痛的功效，主要用于腰部、膝部骨性关节病瘀血停滞、寒湿阻络证，症见关节刺痛或钝痛、关节僵硬、曲伸不利、畏寒肢冷等。通络祛痛膏质量标准中已有阿魏酸的含量测定，鉴于樟脑、薄荷脑及冰片是挥发性药物，易于用气相色谱(GC)法测定其含量，参照相关资料[1－3]，经气相色谱预试，分离较好，因此可用GC法的内标法进行含量测定。本试验中采用GC法测定了通络祛痛膏中樟脑、薄荷脑和龙脑的含量，为通络祛痛膏的质量控制提供了快速、准确的方法。

1 仪器与试药

日本岛津 GC－2014型气相色谱仪，包括 FID检测器、AOC－20i型自动进样器、GC－Solution色谱工作站;AE200型分析天平、AG135型分析天平(梅特勒－托利多＜常州＞称重设备系统有限公司)。樟脑对照品(批号为110747－201008)、薄荷脑对照品(批号为 110728－200506)、龙脑对照品(批号为110881－200706)均由中国食品药品检定研究院提供;萘(上海远航化工厂，批号为040101);乙酸乙酯(天津光复科技有限公司，批号为20110426);无水硫酸钠(洛阳化学试剂厂，批号为100914);通络祛痛膏(河南羚锐制药股份有限公司，批号为090628，090629，090630，100703，100704，100705，110602，110603，110604，110614)。

2 方法与结果

2．1 色谱条件

色谱柱:Agilent DB－WAX弹性石英毛细管色谱柱(30 m×0．32 mm，0．5 μm);检测器:FID;载气:高纯氮气;进样方式:分流进样;分流比:20∶1;进样量:1 μL;柱温:140℃;进样口温度:220℃;检测器温度:250℃。

2．2 溶液制备

称取樟脑 113．19mg、薄荷脑 51．46mg、龙脑 30．18mg，置 10mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密称取萘265．00 mg，置25 mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解稀释至刻度，摇匀，作为内标溶液。取本品3片，剪成窄条状，除去盖衬，置250 mL烧瓶中，加水100 mL，照2010年版《中国药典(一部)》附录ⅩD[4]中挥发油测定法甲法测定，自测定器上端加水至充满刻度部分，并溢流入烧瓶时为止，再加乙酸乙酯2 mL，加热回流提取3 h，放冷，分取乙酸乙酯液，置铺有无水硫酸钠的滤纸滤过，滤液置预先精密加入5 mL内标溶液的50 mL容量瓶中，以适量的乙酸乙酯分次洗涤冷凝管、挥发油测定器及滤器，洗涤液并入同一容量瓶中，并加乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，滤过，续滤液过0．2 μm微孔滤膜，取续滤液即得供试品溶液。

2．3 样正因子测定

精密量取对照品贮备液1 mL，置5 mL容量瓶中;另取内标溶液适量稀释1倍，精密加入稀释后的内标溶液1 mL，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，进样，计算校正因子。

2．4 方法学考察

专属性试验:按通络祛痛膏生产方法制备不含樟脑、薄荷脑和冰片的空白样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液;另取样品制备用溶剂(乙酸乙酯)、对照品溶液和通络祛痛膏供试品溶液各1 μL注入气相色谱仪，在与樟脑、薄荷脑和冰片相应色谱图处，无色谱峰出现，见图1。

图1 气相色谱图

线性关系考察:精密量取樟脑、薄荷脑和龙脑混合对照品贮备溶液 0．10，0．25，0．50，1．0，2．0，3．0 mL，分别置已加入 2 mL内标液的10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯稀释至刻度。按拟订色谱条件测定，每一质量浓度级平行进样3次，进样量1 μL。以进样量(X)为横坐标、对照品与内标物的峰面积比值(Y)为纵坐标进行线性回归，得回归方程，樟脑 Y=0．776 3 X+0．018，薄荷脑Y=0．805X+0．008 7，龙脑 Y=0．804 7X+0．004 9，r=0．999 9。结果表明，樟脑、薄荷脑、龙脑进样量分别在 0．244～6．725，0．103 ～3．088，0．060 ～1．811 μg 范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验:取同一供试品溶液，连续进样6次，分别以樟脑峰面积、薄荷脑峰面积、龙脑峰面积与内标物峰面积的比值计算 RSD。结果的 RSD 分别为 1．85%，3．17%，2．38%，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:精密吸取同一供试品溶液1 μL，分别于0，2，4，6，8，12，24 h时依法测定，分别以樟脑峰面积、薄荷脑峰面积、龙脑峰面积与内标物峰面积的比值计算 RSD。结果的 RSD分别为0．19%，0．53%，0．72%，表明供试品溶液在 24 h 内稳定。

重复性试验:取同一样品6份，按供试品制备方法制备，进样测定。结果每贴中樟脑、薄荷脑和龙脑含量的平均值分别为47．33，21．28，13．14 mg。结果的 RSD 分别为 1．04% ，1．40% ，1．03%，表明方法重复性良好。

加样回收试验:取已知含量样品6份，每份加入对照品适量，依法制备供试品溶液，每份供试品平行进样2次，并测定，计算回收率及 RSD，结果见表1。

表1 樟脑、薄荷脑和龙脑加样回收试验结果(n=6)

2．5 样品含量测定

取10批通络祛痛膏样品，依法制备供试品溶液，按拟订方法进样测定，根据色谱图的峰面积，以内标校正因子计算各批样品含量。结果见表2。

表2 样品含量测定结果(mg/贴)

3 讨论

文献报道的关于测定樟脑、薄荷脑和龙脑等含量的GC法，有使用PEG－20M填充柱等温测定，也有使用毛细管柱以程序升温的方法测定，本研究中采用Agilent DB－WAX毛细管色谱柱以等温的方式进行测定，结果各目标成分均达到了很好的分离，且分析时间快，有利于快速进行产品的质量控制，节省产品检测周期。

近3年的通络祛痛膏产品中樟脑、薄荷脑和龙脑的含量测定结果显示，不同批次之间樟脑的含量存在一定的差异，可能与樟脑的性质有关，而另2种成分含量相差较小，表明通络祛痛膏产品质量和生产工艺稳定性好。本研究中以通络祛痛膏中活性成分樟脑、薄荷脑和龙脑为定量指标，建立了灵敏度高、重现性好的气相色谱含量测定方法，为通络祛痛膏挥发性成分的质量控制提供了可靠方法。

[1]杨晶晶，郭坚固，刘献阳，等．GC法测定麝香祛风湿膏中薄荷脑、丁香酚等组分的含量[J]．食品与药品，2008，10(9):51－53．

[2]张华林，李宗悟，杨学斌，等．气相色谱法测定通立康膏中樟脑、异龙脑、龙脑、桂皮醛、丁香酚的含量[J]．中药新药与临床药理，2005，16(1):61－63．

[3]刘 杰，董文玲．4种中药橡胶剂中樟脑薄荷脑冰片和水杨酸甲酯含量的气相色谱法测定[J]．中成药，2004，26(10):795－798．

[4]中国药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[M]．北京:中国医药科技出版社，2010:附录8．