洋甘菊中芹苷元-7-葡萄糖苷含量测定

兰 卫， 郭玉婷， 耿 直， 倪 健

(1新疆名医名方与特色方剂学自治区重点实验室， 乌鲁木齐 830011； 2北京中医药大学中药学院， 北京 100029；3新疆医科大学对口协作办公室， 乌鲁木齐 830011)

洋甘菊(Matricariachamomilia)又称“母菊”，“德国洋甘菊”，维药名：巴木乃，为菊科甘菊属的花序或全草，一年生草本植物。其具有补胃开胃、促进消化、散气消炎、健脑强筋、祛风止痛、利尿通经的功效[1]。

芹苷元-7-葡萄糖苷，又名：大波斯菊苷，芹菜素-7-葡萄糖苷，芹菜素-7-O-葡萄糖苷，芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。英文名称：Apigenin -7-glucoside，Apigenin-7-O-glucoside ，Apigenin-7-O-β-D-glucopyranoside。分子式为C21H20O10，分子量为432.38。溶解性：可溶于热甲醇、DMSO等溶剂，不溶于石油醚、氯仿。药理药效：具有抗肿瘤、消炎、抗病毒的作用。

洋甘菊为维吾尔药材标准收录药材，但标准简单，未收载含量测定方法。美国药典收载了洋甘菊的质量标准，含量测定项下采用HPLC测定洋甘菊中芹苷元-7-葡萄糖苷的含量，同时指认化合物7-甲氧基香豆素、芹菜素、顺式螺醚、反式螺醚。本实验在美国药典收载的HPLC方法基础上，适当调整色谱条件，采用UPLC测定新疆洋甘菊中芹苷元-7-葡萄糖苷的含量，旨在为洋甘菊药材标准的提升和质量控制提供科学依据。

1 仪器与试药

1.1仪器高效液相色谱仪(Waters Acquity UPLC System，BEHC18色谱柱，2.1 mm×50 mm，1.7 μm，Empower色谱工作站)；水浴锅(PAIRSTIRRER PS-1000,50 HZ,0.75KVA,TOKYO RIKAKIKAI CO.,LTD)；pH计(Satrorius PB-10)；离心机(MULTIFUGE X3R)；分析天平(AB135-S)。

1.2试药芹苷元-7-葡糖糖苷(成都普瑞科技有限公司，A110222)，乙腈(Fisher Scientific)，甲醇(CHROMADEX) ，甲醇(分析纯，天津市富宇精细化工有限公司)，N-N二甲基甲酰胺(分析纯，天津市富宇精细化工有限公司)；磷酸二氢钾(天津市光复精细化工研究所)，氢氧化钠(天津市致远化学试剂有限公司)，盐酸(北京化工厂)，磷酸(天津永晟精细化工有限公司)。

洋甘菊样品采于和田地区策勒县博斯坦乡，经新疆医科大学中医学院李永和主任药师鉴定为德国洋甘菊(Matricariachamomilia)，第一批样品为花朵开放3/4时采摘，第二批为花朵完全开放时采摘。

2 方法与结果

2.1对照品溶液的配制取芹苷元-7-葡萄糖苷，精密称定后分别溶于适量N-N二甲基甲酰胺后甲醇稀释，使芹苷元-7-葡萄糖苷浓度为1.32 mg/mL。

2.2供试品溶液的制备取母菊1.0 g精密称定后置一装有回流冷凝器和搅拌器的烧瓶中，加80 mL甲醇，搅拌下加热回流l h。冷至室温，过滤，收集滤液于100 mL量瓶中。用3.0 mL甲醇冲洗烧瓶，冲洗液过滤后并入容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀并过滤。取25.0 mL上述溶液置一装有回流冷凝器和搅拌器的圆底烧瓶中，加5.0 mL氢氧化钠溶液(0.4g氢氧化钠溶于5.0 mL水)，加热回流25 min。冷却，用盐酸调该溶液pH至5.0～6.2。定量转移此溶液于50 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，混匀并过滤，弃去10 mL初滤液，取续滤液作为供试品溶液。

2.3色谱条件流动相A：0.005 mol/L的磷酸二氢钾溶液，流动相B：乙睛和甲醇(65∶35)。色谱柱BEHC18，2.1 mm×50 mm，1.7 μm；流速：0.3 mL/min；检测波长：350 nm；温度为37℃；进样量1.5 μL；流动相A-B为70%～52%进行线性梯度洗脱(图1)。

1: 木犀草苷; 2: 芹苷元-7-葡萄糖苷; 3: 甲氧基香豆素; 4: 木犀草素; 5: 为芹菜素图1 洋甘菊典型UPLC色谱图

2.4线性与范围精密吸取芹苷元-7-葡萄糖苷对照品溶液适量配置芹苷元-7-葡萄糖苷对照品溶液系列浓度分别进样，以对照品浓度X(μg/mL)为横坐标，峰面积Y为纵坐标计算标准曲线回归方程，在0.658 5～72.435 0 μg/mL范围内:Y=17149X-422.28，相关系数为0.999 9。

2.5精密度试验

2.5.1 日内精密度:取同一供试品溶液连续进样6次，测得含量的RSD为1.56%。

2.5.2 日间精密度:取同一供试品溶液连续进样6 d，测得芹苷元-7-葡萄糖苷素含量的RSD为0.83%。

2.6稳定性试验取同一批供试品溶液适量，连续在0、1、2、4、8、12、24 h分别进样，考察其稳定性。结果显示，芹苷元-7-葡萄糖苷峰面积的RSD=1.35%(n=7)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.7重复性试验精密称取洋甘菊样品粗粉适量，共6份，分别按“2.2”项下方法制成供试品溶液，按上述色谱条件测定峰面积。结果，RSD=1.54%(n=6)，表明方法重复性良好。

2.8回收率试验精密称取已知含量的样品约0.5 g，共9份，分为3组，按低、中、高浓度分别加入芹苷元-7-葡萄糖苷对照品储备液，制备供试品溶液，进样测定，计算加样回收率,结果见表1。

2.9样品测定样品2批，每批样品取3份进行测定，按供试品溶液制备法进行样品处理并进行测定，计算样品中含量(表2)。

表1 加样回收率试验结果(n=9)

表2 洋甘菊中芹苷元-7-葡萄糖苷含量测定(n=2)

3 讨论

洋甘菊在欧洲、美国及日本等地早被广泛利用，具有消炎、抑制真菌、解痉等药理作用[3]，洋甘菊中含母菊内酯、母菊内酯酮、芹菜素、芸香苷、金丝桃苷、豆甾醇和豆甾醇-3-葡萄糖苷等成分[1]。芹菜素(5,7,4-三羟基黄酮)和其葡萄糖苷是洋甘菊中主要的黄酮类化合物。

本实验参照美国药典收载的HPLC方法，适当调整流动相，采用梯度洗脱测定洋甘菊中芹苷元-7-葡萄糖苷含量，同时指认了木犀草苷、甲氧基香豆素、木犀草素和芹菜素，但未检测到顺式螺醚和反式螺醚，两批洋甘菊样品中芹苷元-7-葡萄糖苷含量分别为5.2(0.519%)、5.8(0.586%) mg/g。采用UPLC法可在15 min内完成5个成份的测定和指认，适用于洋甘菊药材的质量控制。

洋甘菊因产地不同、功效不同而分为罗马甘菊和德国甘菊[4]，据国家卫生部药品标准(维吾尔药分册)记载具有补益神经、止痛消肿、发汗通便、利尿通经的功效。用于机体异常腐败体液，头痛久治不愈，大便秘结，汗出不畅，小便不利，月经不通等病症[5],但标准中对洋甘菊只做了生药显微的要求，未对洋甘菊中的活性成分做含量测定的要求。而美国药典[2]规定了HPLC测定芹苷元-7-葡萄糖苷的含量，同时要求有其他四个化合物的特征图谱，采用多指标对洋甘菊药材进行质量控制，标准明显高于国家卫生部药品标准(维吾尔药分册)。

芹菜苷为洋甘菊中的一种活性黄酮类物质[6]，可作为平滑肌的解痉剂，醛糖还原酶抑制剂和镇静剂。USP药典中测定芹苷元-7-葡萄糖苷的含量不少于0.3%，策勒县出产的洋甘菊中芹苷元-7-葡萄糖苷含量符合美国药典的规定。

参考文献:

[1] 新疆卫生厅.维吾尔药标准(上册)[S].乌鲁木齐:新疆科技卫生出版社，1993:255.

[2] 徐莉. 美国药典24版母菊(Chamomiles)[J].国外医药：植物药分册，2002，17(2)：82-83.

[3] 郑金臣,全山丛,张虹,等.值得重视的归化药用和香料植物-母菊(洋甘菊)[J].中草药,1996,27(9):568-571.

[4] 韩松林，李新霞，勉强辉，等.薄层生物自显影技术比较新疆 2种洋甘菊抗氧化活性[J].中国中药杂志，2013,38(2)：193-197.

[5] 中华人民共和国卫生部药典委员会编.中华人民共和国卫生部药品标准维吾尔药分册[S].乌鲁木齐:新疆科技卫生出版社，1999:76.

[6] 贾佳，谢静莉，许学书.芹菜苷体外活性的研究[J].食品科学，2008，29(12)：99-101．