新疆香鳞毛蕨药材质量研究

田 莉，施 洋， 畅 静， 王东东， 田树革

(1新疆医科大学中医学院， 2新疆名医名方与特色方剂学重点实验室， 乌鲁木齐 830011)

香鳞毛蕨[Dryopterisfragrans(L.) Schott]为鳞毛蕨科鳞毛蕨属植物，系多年生草本植物，生长于海拔700～2 500 m的山地林缘和山坡石缝中，分布于我国东北、河北、内蒙古等地，新疆境内主要产于北疆的青河、富蕴、阿勒泰、布尔津、哈巴河等县，国外西伯利亚、远东、蒙古、朝鲜、日本以及北美各地亦有分布[1-2]。

香鳞毛蕨具有驱虫、杀菌、抗炎和抗肿瘤等药理活性，民间流传用其水煎液涂擦患处可治疗牛皮癣、皮疹、皮炎、痤疮等各种皮肤病且无毒副作用，水提液洗头可去头屑、止痒，被黑龙江省北部居民视为“皮肤病的克星”，尤其治疗牛皮癣疗效显著[3]。香鳞毛蕨具有显著的抗炎镇痛作用，张彦龙[4]研究发现其乙醇提取物治疗类风湿性关节炎的疗效优于雷公藤多苷片；张莹莹[5]分离获得了具有抗肿瘤活性和免疫调节活性的提取物。目前对东北产香鳞毛蕨的研究主要为临床疗效和化学成分，尤其对牛皮癣和关节炎疗效的研究较多。该植物资源在新疆分布广泛，但未作为药用植物使用，也未见相关研究报道。本研究在参考相关文献[6]的基础上对新疆产香鳞毛蕨的质量控制方法进行研究，并评价其质量，为该植物资源的进一步研究和开发利用提供依据。

1 材料与仪器

1.1材料3批香鳞毛蕨样品分别采自新疆布尔津、哈巴河、青河县，均系野生，经新疆维吾尔自治区中医医院李永和主任中药师鉴定为香鳞毛蕨[Dryopterisfragrans(L.) Schott.]。将药材阴干，去除根茎及叶柄残基以外的其他部分，粉碎，备用；绵马贯众素ABBA对照品(成都瑞芬思生物科技有限公司，纯度98%，批号：M-040-111008)，坚牢蓝BB盐(上海阿拉丁试剂有限公司，批号：F106955)，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。

1.2仪器Mikroskope Primo Star X2005型数码显微镜(德国麦克奥迪实业有限公司)，XS105型电子天平(德国梅特勒-托利多仪器有限公司)，AK-1000A摇摆式中药粉碎机(温岭市奥为中药机械有限公司)，KQ3200DE型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，CS101型鼓风干燥箱(中华人民共和国重庆试验设备厂)，GBCCinira-40型紫外可见分光光度计(澳大利亚GBC科学仪器公司)。

2 方法与结果

2.1原植物形态[1-2]植株高15～30 cm，根状茎粗短，直立或斜升，密被三角状披针形棕褐色鳞片。叶簇生，革质，两面被金黄色腺体；叶柄长5～10 cm，禾秆色，连同叶轴和羽轴密被卵形或披针形、边缘具细齿、先端尾状尖、密被金黄色腺体的鳞片；叶片倒披针形，长10～20 cm，宽2.5～3.5 cm，二回羽状全裂；羽片20～25对，互生，相距4～8 mm，披针形，中部者最大，长12～15 mm，宽约5 mm，先端钝，基部楔形，一回羽状；小羽片5～7对，长约3 mm，宽约1.5 mm，长圆形，先端钝圆，基部下延成狭翅，边缘具钝圆锯齿，向下各对羽片逐渐缩小，基部1～2对呈耳状；叶脉羽状分枝。孢子囊群圆形，生侧脉中下部；囊群盖圆肾形，灰白色，膜质，边缘缺刻状。孢子椭圆形，周壁具瘤状突起，见图1。植物略具香味，故有香鳞毛蕨之称。

2.2药材性状根据实际药材样品观察：药用根茎，呈圆柱形略弯曲，长10～25 cm，粗1～3 cm，所被叶柄基部呈扁圆形，稍弯曲，长2～5 cm，粗0.5～0.8 cm，表面呈棕褐色或灰棕色，有纵脊纹和粗槽纹，内呈棕色。根茎周围密生叶柄和丛生红棕色鳞片(图1)。气特异，味甘而苦辛，有不愉快感。

2.3显微特征

2.3.1 叶柄基部横切面 表皮细胞1列，外壁稍厚；厚壁细胞数列，多角形，棕色；基本组织中有分体中柱3～7个，每一分体中柱具周韧维管束，外围以内皮层，见图2。

图1香鳞毛蕨[Dryopterisfragrans(L.)Schott]

图2香鳞毛蕨叶柄基部横切面

2.3.2粉末特征 内皮层碎片甚多，黄棕色；孢子囊环带，由14～20个增厚细胞组成；气孔环式；梯纹管胞，见单个纤维或纤维束；非腺毛由单细胞组成，弯曲或笔直；鳞片细胞排列紧密；两面型孢子，孢子表面观与赤道面观不易看清楚。薄壁细胞呈多角形或类圆形，含淀粉粒；周壁具有褶皱，褶皱形成瘤状突起，有时孢子沿褶皱处裂开，外壁厚度约为2.5μm，外层厚于内层。管胞孔纹、梯纹，偶有网纹，有的薄壁细胞和木栓细胞具孔纹。偶见草酸钙簇晶，见图3。

2.4水分、灰分、浸出物测定分别采用《中国药典》(2010年版)一部附录Ⅸ H烘干法测定水分；附录Ⅸ K方法测定灰分和酸不溶性灰分；附录Ⅹ A方法测定水浸出物；附录Ⅸ A方法测定醇浸出物，分别采用了热浸法和冷浸法；附录ⅨE 方法测定重金属。结果显示3批香鳞毛蕨水分为9.46%～10.22%，灰分为8.46%～9.52%，酸不溶性灰分为2.89%～3.56%，水溶性浸出物为15.77%～20.34%，采用热浸法的醇溶性浸出物远高于冷浸法，浸出物含量为24.53%～32.33%，重金属与砷盐检查结果均符合《中国药典》规定的限量检查要求，见表1。

2.5薄层鉴别[7]取本品粉末0.5 g，加环己烷20 mL，超声处理30 min，滤过，取续滤液10 mL，浓缩至5 mL，作为供试品溶液。另取香鳞毛蕨对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述2种溶液各4 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上[取硅胶G 10 g、枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液(pH 7.0)10 mL、维生素C 60 mg、羧甲基纤维素钠溶液20 mL，调匀，铺板，室温避光晾干，50℃活化2 h后备用]，以正己烷-三氯甲烷-甲醇(30∶15∶1)为展开剂，薄层板置展开缸中预饱和2 h，展开，展距15 cm以上取出，立即喷以0.1%坚牢蓝BB盐的稀乙醇溶液，在40℃放置1 h。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，见图4。

图3 香鳞毛蕨粉末

1～3: 供试品; S: 对照药材

2.6总间苯三酚含量测定

2.6.1 对照品溶液的制备 精密称取绵马贯众素ABBA对照品适量，用95%乙醇制成浓度为0.08 g/L的溶液，备用。

2.6.2 供试品溶液的制备 精密称定香鳞毛蕨药材粉末(60目)约1 g，加入95%乙醇100 mL，称重，回流提取1 h，冷却至室温，称重，补足减失重量，混匀，过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液2 mL置于10 mL量瓶中，用95%乙醇稀释并定容至刻度，摇匀，即得。

2.6.3 测定方法[8]精密量取对照品溶液或供试品溶液2 mL，置于10 mL磨口具塞刻度试管中，精密加入0.5%坚牢蓝BB盐溶液5 mL，混匀，室温放置20 min，采用比色法在476 nm波长处测定吸光度，计算总间苯三酚含量，结果总间苯三酚含量为5.16%～8.10%，RSD=7.14%，见表1。

表1 香鳞毛蕨药材水分、灰分、浸出物、含量测定结果

3 讨论

新疆产香鳞毛蕨主要分布于新疆北部天山和阿尔泰山，资源丰富。现有研究主要集中于东北产香鳞毛蕨的化学成分、药理作用和临床应用，而对质量控制的研究很少。香鳞毛蕨的同属植物绵马贯众(DryopteriscrassirhizomaNakai.，即粗茎鳞毛蕨)是《中国药典》收载品种，其质量标准包括性状、TLC鉴别、检查(水分、灰分、酸不溶性灰分、醇浸出物)，参照其项下内容建立香鳞毛蕨的质量控制方法。

香鳞毛蕨主要含间苯三酚类、萜类和黄酮类等成分[9]，而间苯三酚类是其特征性化学成分，也是主要的药理活性成分。香鳞毛蕨根茎含多种间苯三酚化合物，已分离得到的单体成分有Aspidin AB(绵马素AB)、Aspidin BB(绵马素BB)、Aspidinol(绵马酚)、AspidinPB(绵马素PB)，Dryofragin(香鳞毛蕨素)[10]。因此，测定香鳞毛蕨中总间苯三酚的含量对控制其质量具有代表性和合理性。本研究增加了香鳞毛蕨中总间苯三酚的含量测定。

根据不同地区3批药材质量研究结果，并考虑药材来源差异的实际情况，可以初步确定水分不超过12.0%，总灰分不超过10.0%，酸不溶性灰分不超过5.0%，醇溶性浸出物不少于20.0%，总间苯三酚含量限度为不低于6.0%。新疆不同产地的香鳞毛蕨中总间苯三酚含量有较大差异，此种差异可能与药材的生长环境、生长年限有关，有待进一步的研究。香鳞毛蕨尚无人工栽培品，本实验所用均为野生采集，有害重金属砷(As)和铅(Pb)含量均不超标，铅(Pb)≤5 μg/g，砷(As)<1 μg/g，说明没有其他无机物污染和掺杂。

本研究对薄层鉴别方法中各个环节进行了确定，考察了不同的薄层板，如国产的预制板、进口预制板，效果均不理想，因此采用自制板；确定了展开溶剂种类和比例，间苯三酚类化合物与坚牢蓝BB盐呈特征性颜色反应，故确定0.1%坚牢蓝BB盐为显色剂。

本研究较全面地考查了新疆产香鳞毛蕨药材的各项指标，在实验结果和数据分析的基础上制定了相关限度。所建立的方法简便、快速、可靠，适用于该药材的质量控制，而与其他产地香鳞毛蕨的质量对比还有待进一步研究。

参考文献：

[1] 新疆植物志编辑委员会. 新疆植物志[M]. 乌鲁木齐:新疆科技卫生出版社,1992:45-46.

[2] 中国植物志编辑委员会. 中国植物志[M]. 第5(1)卷.北京:科学出版社, 2000:152.

[3] 李博. 香鳞毛蕨的研究进展[J]. 黑龙江医药, 2006,17(6):494-496.

[4] 张彦龙.香鳞毛蕨治疗类风湿性关节炎有效部位的药理作用和化学成分的研究[D].哈尔滨:,黑龙江中医药大学, 2006:72.

[5] 张莹莹.香鳞毛蕨中生物活性物质的筛选[D]. 哈尔滨：黑龙江大学，2008:38-52.

[6] 李伟, 赵翡翠. 倒提壶药材质量标准研究[J]. 新疆医科大学学报, 2010,33(9):1036-1038.

[7] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S]. 北京：中国医药科技出版社，2010:310.

[8] 高增平,苏雨雷.商品贯众中总间苯三酚含量测定方法研究.北京中医药大学学报[J]. 2009, 32(4):259-262.

[9] 沈志滨，罗文英，严优芍, 等. 香鳞毛蕨中间苯三酚衍生物的研究[J]. 中药材, 2006, 29(6):560-561.

[10] Hideyuki I，Takashi M，Kazuko M, et al.Ichthyotoxic phloroglucinol derivatives from dryopteris fragrans and their antitumor promoting activity[J]. Chem Pharm Bull, 2000, 8(48):1190-1195.