黄白通气颗粒质量标准研究

宋文惠, 王 康, 李亚男, 刘春梅

(1陕西省人民医院药剂科， 西安 710068； 2西安新通药物研究有限公司， 西安 710077)

黄白通气颗粒由大黄、厚朴等4味中药制成，临床中主要用于腹部外科术后排气、胃肠功能恢复。其中，君药大黄所含蒽醌类成分可促进肠蠕动而导致泻下，为本制剂主要活性成分[1]。为了有效地控制本制剂质量，本研究采用薄层色谱法对方中大黄进行定性鉴别，同时采用高效液相色谱法对大黄蒽醌类成分中含量较高的大黄素和大黄酚进行定量测定，现报道如下。

1 仪器与试药

1.1仪器岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪，SPD-10Avp紫外检测器，LC Solution Lite色谱工作站。赛多利斯 CP225D电子天平。

1.2试药大黄对照药材(批号0902-9805，供鉴别用),大黄酸对照品(批号0757-9804，供鉴别用),大黄素对照品(批号0756-200110，供含量测定用),大黄酚对照品(批号796-200107，供含量测定用),以上均购自中国药品生物制品检定所。甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯；硅胶G薄层板(烟台江友硅胶开发有限公司)。

1.3样品黄白通气颗粒(批号110501、110502、110503)及缺大黄阴性样品均由本单位自制。

2 方法与结果

2.1大黄鉴别[2-3]取本品3批样品各6 g，分别加乙酸乙酯30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯3 mL使溶解，作为供试品溶液。取缺大黄阴性样品，同法制成大黄阴性样品溶液。另取大黄对照药材1.0 g，同法制成对照药材溶液。再取大黄酸对照品，加乙酸乙酯制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(12∶3∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照不显斑点，结果见图1。

1: 黄白通气颗粒(批号110501)； 2: 缺大黄阴性样品； 3: 大黄酸对照品； 4: 大黄对照药材； 5: 黄白通气颗粒(批号110502)； 6: 黄白通气颗粒(批号110503)

2.2大黄素和大黄酚含量测定[4-6]

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取大黄素对照品、大黄酚对照品适量，加甲醇制成每1 mL含大黄素12 μg、大黄酚15 μg的混合溶液，摇匀，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本制剂细粉约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-盐酸(35∶1)的混合溶液25 mL，密塞，称定重量，置80℃水浴中加热回流1 h，放冷，若瓶壁有黏附物，超声处理去除，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液溶液5 mL，蒸干，残渣用甲醇溶解，转移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性溶液的制备 取阴性样品细粉，采用“2.2.2”项下方法制备成阴性样品溶液。

2.2.4 色谱条件 色谱柱：Diamonsil C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：甲醇-0.1%磷酸水(85∶15)；检测波长：254 nm；流速：1.0 mL/min；进样量：20 μL；柱温：30 ℃；理论塔板数以大黄素计算不得少于3 000。

2.2.5 系统适应性实验 在“2.2.4”色谱条件下检测，阴性样品溶液在大黄素和大黄酚对照品色谱峰的相应位置上，没有色谱峰出现，表明本制剂中的其他成分及辅料对大黄素和大黄酚的含量测定不产生干扰，见图2。

图2 黄白通气颗粒高效液相色谱图

2.2.6 线性实验 精密称取大黄素对照品、大黄酚对照品适量，加甲醇制成每1 mL含大黄素25 μg、大黄酚30 μg的混合溶液；分别进样5、8、10、12、15 μL，依法测定，以进样量对峰面积A进行回归，得大黄素线性回归方程为Y=3 494 173X+57 043，r=0.999 9；大黄酚线性回归方程为Y=4 322 035X+81 498，r=0.999 9。结果大黄素在0.125～0.374 μg范围内与峰面积线性关系良好；大黄酚在0.150～0.451 μg范围内与峰面积线性关系良好。

2.2.7 精密度试验 精密吸取对照品溶液20 μL，重复进样6次，依法测定，结果大黄素峰面积RSD为0.42%，大黄酚峰面积RSD为0.47%。

2.2.8 重复性试验 取110501批样品6份，同“2.2.2”项下方法制备，依法测定。结果大黄素的峰面积/称样量的值RSD为1.38%，大黄酚的峰面积/称样量的值RSD为1.58%，表明重复性良好。

2.2.9 溶液稳定性试验 取”2.2.8”项下第一份样品溶液分别于0、2、4、8、10 h依法测定,结果大黄素峰面积RSD为0.98%，大黄酚峰面积RSD为1.22%，表明供试品溶液在10 h内稳定。

2.2.10 加样回收率试验 精密称取110501批样品6份，每份约0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别加入用甲醇-盐酸(35∶1)配制的混合对照品溶液5 mL(大黄素浓度为61.2 μg/mL，大黄酚浓度为78.8 μg /mL)，再精密加入甲醇-盐酸(35∶1)的混合溶液20 mL，同“2.2.2”项下方法制备，依法测定，计算回收率，结果大黄素平均回收率为97.9%,RSD=1.31%;大黄酚平均回收率为48.2%,RSD=1.35%,见表1、2。

表1 大黄素加样回收率试验结果

表2 大黄酚加样回收率试验结果

2.2.11 样品含量测定 分别取110501、110502、110503样品，依照“2.2.2”项下方法制备，依法测定，结果见表3。

表3 样品含量测定结果(n=3)

3 讨论

展开剂选择时，首先考查《中国药典》(2010年版)一部大黄项下鉴别项中选用的石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液，但考虑到石油醚为混合物，且沸点较低，可能会影响实验的稳定性，最终选择环己烷-乙酸乙酯-甲酸(12∶3∶0.1)为展开剂。实验中样品分别与大黄对照药材、大黄酸对照品、阴性样品进行对照，结果阴性没有干扰，斑点清晰，专属性强，重现性好，表明本方法可以用于黄白通气颗粒中大黄的定性鉴别。

流动相选择时，采用《中国药典》(2010年版)一部大黄项下含量测定中所用的甲醇-0.1%磷酸水(85∶15)为本品含量测定流动相，实验表明色谱系统分离度好，无干扰，因此确定该流动相作为本制剂含量测定的流动相。

大黄相关制剂在含量测定时，供试品溶液制备多采用甲醇回流提取→盐酸水解→三氯甲烷提取的方法，考虑到该方法操作步骤多，未知因素较多。本实验选用操作较为简便的甲醇-盐酸回流提取的制备方法[6]，结果表明该方法重现性好，稳定性高，可以用于本制剂的含量测定。

由于样品仅测定3批，需积累数据后确定其含量限度，才可用于本制剂的质量控制。

参考文献：

[1] 唐大轩, 谭正怀, 梁媛媛，等. 大黄蒽醌致泻作用及其机理的初步研究[J]. 时珍国医国药, 2007, 8(6):1312-1314.

[2] 郑奕辉, 周泽清, 张寓云，等. 胃疏散中大黄薄层鉴别方法的研究[J]. 中国中医药科技, 2005, 12(6):390-391.

[3] 高春华, 张亚秋, 袁子明，等. 降糖丸中红参、大黄、葛根的薄层定性鉴别[J].锦州医学院学报, 2004, 25(4):74-75.

[4] 谢巧娥, 彭建梅, 罗燕. HPLC法测定肝脂清胶囊中大黄素、大黄酚的含量[J].中国药师, 2007, 10(7):725-726.

[5] 金鑫, 曲佳, 李时放. HPLC法测定麻仁胶囊中大黄素及大黄酚的含量[J]. 天津药学, 2011, 23(4):17-18.

[6] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010:1115.