GC法测定维吾尔药阿育魏果中麝香草酚的含量

穆 建, 佟瑞敏， 苏来曼·哈力克

(新疆维吾尔自治区食品药品检验所， 乌鲁木齐 830004)

阿育魏果为伞形科植物细叶糙果芹[Trachyspermumammi(L.)Sprague.]的成熟果实，维吾尔语名称“Juwine”,音译为“居维纳”，汉语通用名称为“阿育魏果”[1-2]，是维吾尔医常用的药材品种，收载于《卫生部药品标准：维吾尔药分册》[3]。阿育魏果所含的麝香草酚对口腔、咽喉黏膜细菌和真菌有抑制作用，对龋齿有防腐、局麻作用，还可用于皮肤化脓性感染及真菌和放线菌病，此外有驱钩虫作用。阿育魏果油可毒害蚯蚓，其醇提取物(10%)对葡萄糖球菌、大肠杆菌有抑制作用，稀释后可作祛痰剂[4-5]。有关研究表明阿育魏果乙醇提取物中含有麝香草酚、槲皮素、β-谷甾醇、豆甾醇、胡萝卜苷、东莨菪内酯、山奈素、羟基桂皮酸、4-羟基薄荷-l-烯-7-酸、6-羟基麝香草酚6-O-β-D葡萄糖等[6-14]。阿育魏果中槲皮素的HPLC含量测定已见报道[15]，但未见麝香草酚含量测定的相关报道。本研究首次采用毛细管柱程序升温的分离检测方法对不同产地的阿育魏果中挥发性成分麝香草酚进行含量测定，为建立质量标准提供实验依据。

1 仪器与试药

1.1仪器Agilent 7890A气相色谱仪(美国)，KLZ-UP超纯水仪,KUDOS SK7210LHC型超声仪。

1.2试剂麝香草酚对照品(含量：99.9%，批号：100508-200902)购自中国食品药品检定研究院。乙醇为无水乙醇，甲醇等其他试剂均为分析纯。

1.3样品不同产地阿育魏果样品10批(批号分别为20130301、20120501、20121115、 20130301、20130516、20130515、20130511、20130520、20130512、20111111)，经新疆维吾尔自治区食品药品检验所苏来曼·哈力克主任药师鉴定均为伞形科植物植物细叶糙果芹[Trachyspermumammi(L.)Sprague.]的成熟干燥果实。

2 方法与结果

2.1对照品溶液的制备精密称取麝香草酚对照品适量，加无水乙醇制成每1 mL含1.20 mg的溶液，即得。

2.2供试品溶液的制备精密称取经粉碎过3号筛(50目)的阿育魏果粉末1 g,置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇20 mL,密塞，摇匀，称重，超声处理(功率350 kW，59 KHz)20 min，放冷，再称定质量，用无水乙醇补齐减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3色谱条件与系统适应性试验以Agilent HP-5(30 m×0.32 mm,0.25 μm)为色谱柱，柱温50 ℃，恒温2 min,以10 ℃/min 升温至230 ℃保持10 min。进样口温度200 ℃, 柱流速1 mL/min，进样量1 μL，采用FID检测器，检测器温度250 ℃，分流比为20∶1；载气为氮气；理论塔板数以麝香草酚计应不低于100 000，样品色谱图中麝香草酚的分离度>1.5，见图1。

A：对照品溶液； B：供试品溶液； 1：麝香草酚

2.4线性关系考察精密称定麝香草酚对照品适量，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成麝香草酚的对照品贮备溶液。精密吸取不同体积的对照品贮备溶液，稀释成不同浓度的系列溶液: 0.20、0.40、1.00、1.20、2.00 mg/mL各进样1 μL，按上述色谱条件测定峰面积。以对照品的浓度(Y)对峰面积(X)进行线性回归，得回归方程：Y=743.71X-2.41,r=0.999 9，结果表明麝香草酚在0.20～2.00 mg/mL范围内与其峰面积线性关系良好。

2.5精密度试验取同一样品(批号：20130515)，按照“2.2”项下方法制备供试品溶液。在24 h内重复进样6次，测定麝香草酚峰面积。结果峰面积的RSD为0.22%，表明日内精密度良好。

2.6稳定性试验取同一样品(批号：20130515)，按照“2.2”项下方法制备供试品溶液。分别在0、5、11、17、24 h进样，测定麝香草酚的峰面积，结果峰面积的RSD为1.38%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.7重现性试验取同一样品(批号：20130515)，按照“2.2”项下方法平行制备供试品溶液6份，测定麝香草酚峰面积，结果峰面积的RSD为1.65%，并计算麝香草酚的含量，其含量为2.58%、2.47%、2.60%、2.55%、2.55%、2.61%，平均值为2.56%，RSD=1.98%(n=6),表明方法重现性良好。

2.8加样回收率试验取麝香草酚对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，制成12.63 mg/mL的溶液。精密称定同一样品(批号：20100515)粉末过3号筛(50目)约0.5 g，称取6份，置具塞锥形瓶中，分别精密加入1 mL对照品溶液，再精密加入无水乙醇19 mL，称定重量，超声处理(功率350 kW，59 KHz)20 min，放冷，再称定重量，用无水乙醇补齐减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。照“2.3”项下色谱法测定，计算加样回收率，结果麝香草酚平均回收率为100.47%，RSD为1.60%，见表1。

表1 麝香草酚加样回收率结果

2.9样品含量测定取不同产地的10 批样品，按“2.2”项下方法制备供试品溶液。按“2.3”含量项下色谱条件测定样品麝香草酚的峰面积，代入回归方程，计算样品中麝香草酚的含量。结果表明10 批阿育魏果麝香草酚含量较为接近，10批样品麝香草酚含量为1.884%～3.311%,平均含量为2.444%,见表2。

表2 10批阿育魏果药材麝香草酚含量测定结果

3 结论

本实验尝试利用不同色谱柱(Agilent HP-5型及Agilent HP-Innowax型气相色谱柱)、不同检测方法(200 ℃恒温及程序升温)来检测分离麝香草酚，最终确定的方法虽然空白有噪声干扰，但并不影响麝香草酚与其他成分的分离及测定，而其他方法均达不到分离的目的。因此，本研究最终选择了程序升温的色谱条件并将阿育魏果挥发油中含量较高、药理活性明确、对照品容易分离纯化的麝香草酚作为含量控制指标，对阿育魏果药材的质量进行量化。

供试品溶液制备溶液分别采用无水乙醇和无水乙醇为提取溶剂、并分别采用不同提取时间(10、20、30 min)以及不同提取溶剂用量(20、40 mL)进行了样品提取方法考察，结果以加入20 mL无水乙醇为溶剂，超声处理20 min提取效果最佳。

参考文献:

[1] 新疆植物志编辑委员会.新疆植物志[M].乌鲁木齐:新疆科学技术出版社,2011,3:521-524.

[2] 中国医学百科全书编辑委员会.中国医学百科全书维吾尔医学 [M].上海:上海科学技术出版社,2005:235.

[3] 卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准维吾尔药分册[S]. 1998:45.

[4] 刘勇民,沙吾提·伊克木.维吾尔药志 [M],乌鲁木齐:新疆人民出版社，1985:201.

[5] 新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所.中华本草维吾尔药卷[M].上海:上海科学技术出版社,2005:201.

[6] 马庆东,李国玉,王航宇,等.维吾尔药阿育魏实化学成分的分离与鉴定[J].沈阳药科大学学报,2011,28,(7):29-33.

[7] 李国玉,王庆慧,马庆东.阿育魏实挥发油成分的GC-MS研究[J].中国现代中药,2009,11(5):21-23.

[8] 刘力,张惠,宋铁珊,等.阿育魏实挥发油成分的GC-MS分析[J].分析测试学报,2004,23(3):100-102.

[9] 吴霞,杨峻山/阿育魏实的化学成分研究[J].中国中药杂志,2005,30(13):1028-1029.

[10] 吴霞,杨峻山.阿育魏实的化学成分的研究[J].中国药学杂志, 2006，41(14):1058-1059.

[11] 张慧,曾玲力,王晓文等.阿育魏种子中脂肪酸含量的测定[J].新疆医科大学学报,2003,26(5):488.

[12] 张慧，牙克浦江·莫民，胡君萍，等，阿育魏实的化学成分的预试验研究[J].新疆医科大学学报，2012，35(3):306-309.

[13] 张慧，岳少磊，龚灿，等，电感耦合等离子光谱法测定阿育魏实中的微量元素[J].新疆医科大学学报，2010，33(12):1422-1423.

[14] 马庆东，李国玉，王金辉，等，维吾尔药阿育魏实药理活性研究进展[J]. 农垦医学，2011，33(2):180-184.

[15] 祖里皮亚·塔来提，艾尼娃尔·艾克木.HPLC测定维药阿育魏实中槲皮素的含量[J].新疆中医药，2008,26(3):52-53.