不同开窗方法对种蛋孵化率的影响

李 鑫，邓 缘，燕海峰，高凤仙，※

（1.湖南农业大学动物科学技术学院，湖南长沙410128；2.湖南省畜牧兽医研究所，湖南长沙410131）

为了对种蛋中的囊胚细胞进行操作，且操作后种蛋需要能成功孵化出小鸡，需对种蛋进行开窗处理，据报道[1]，目前普遍采用赤道面开窗不换壳后的培养技术，经研究开窗未注射和开窗注射组的孵化率无显著性差异，但开窗组与正常对照组差异极显著，开窗组孵化率大幅度下降的原因主要与开窗有关。因为开窗会导致鸡蛋内环境变化,导致鸡胚发育畸形和致死，特别在胚胎发育早期，情况特别明显。因此本研究主要对种蛋开窗方法进行了改善，以期提高种蛋开窗后的孵化率。

1 实验方法

1.1 实验材料

种蛋来源：白莱航鸡的种蛋。

1.2 不同种蛋开窗方法对孵化率的影响

1.2.1 种蛋开窗技术。将试验种蛋用70%酒精表面进行擦拭消毒。在无菌操作台上，用开蛋器在鸡蛋赤道面的壳面切出边长约为5mm的三角形，先只切开外壳，其中一头边缝宽为其它缝宽的双倍，便于翻开，同时在该宽缝下边粘上约1mm2的双面胶，用于割开切块内壳膜后，切块能倒粘在双面胶上。

开窗操作时，用10号解剖刀，划开切缝较窄的两边的内壳膜，用刀片将切块挑起，通过双面胶固定到种蛋壳上，以便于通过窗口对胚胎进行操作。

1.2.2 种蛋的封口。 种蛋开窗后的封口设计了3种方法：

（1）方法I（粉+胶法）：沿切槽内均匀填充聚乙烯粉，再使用液体胶（如502胶等）从槽中注入，并扩散覆盖到整个切槽。

（2）方法II(贴膜封口法)：使用医用贴膜，以切块为中心进行粘贴，然后用解剖刀片刮平。

（3）方法III（膜+胶法）：先用医用贴膜进行封口，再沿膜边沿用液体胶粘合。

1.2.3 种蛋的孵化。使用小型全自动孵化仪，孵化温度为37.7℃，相对湿度为65%，每2h翻蛋1次，每次转1角90°。孵化至19d，温度调节到37℃，湿度调节到70%。孵化期间，分3个阶段（6d、11d和17d）照蛋，孵化后收集不同时期胎胚死亡数、孵化数，并对数据进行统计分析。

1.3 不同操作者进行种蛋开窗对孵化率的影响研究

选取操作熟悉程度不同的两名操作者进行种蛋开窗，均采用以上三种操作方法，并观察不同操作者应用不同封口方式对种蛋孵化率的影响。

1.4 开窗后通过添加不同溶液对种蛋孵化率的影响研究

种蛋开窗后，分3组进行操作，分别为添加PBS溶液组、添加稀蛋清组和对照组，添加PBS溶液组和添加稀蛋清组尽可能完全排除空气。封口办法采用膜+胶的方法，统计添加不同组别对种蛋孵化率的影响。

1.5 数据处理

试验数据采用Excel软件进行处理，显著性差异采用SPSS15.0进行卡方检验。

2 结果与分析

2.1 不同封口方式对鸡胚发育的影响

不同封口方式对种蛋孵化率的影响结果见表1。3种不同封口方式的孵化率均高于传统封口方法的孵化率（32%），且均高于42.5%。3种不同封口方法的孵化率差异均不显著（P＞0.05），但以膜+胶法的孵化率最高，为47.5%。但3种封口方式与对照组相比均差异极显著(P＜0.01)，说明种蛋开窗后严重影响鸡胚的发育，大幅度降低了种蛋的孵化率。

2.2 不同熟练程度的操作者进行种蛋开窗后孵化率的影响

从表2看，熟练操作者A通过赤道面开窗的孵化率普遍高于不熟练操作者B，说明操作熟练程度可以影响种蛋孵化率，但熟练操作者的孵化率与未开窗的对照组相比，孵化率明显较低，说明种蛋开窗对孵化率影响较大。

2.3 开窗添加液体排除空气对鸡胚孵化率的影响

从表3看，通过补充液体来排除空气，以期提高孵化率的效果不明显，且比不补液的组别孵化率稍低，但无显著性差异（P>0.05）。而且在操作中，通过注射液体的方式，很难将空气排尽，在封口时大部分种蛋中有小气泡，但气泡的大小以及气泡的有无对孵化率的影响无显著差异。

3 讨论

种蛋开窗后导致孵化率下降的原因较多，主要有以下原因：

（1）开窗和贴膜后可导致种蛋内气体和水分蒸发。实验过程中对孵化期中死亡的种蛋进行解剖发现，很多种蛋窗口内表面形成浓蛋清粘连，主要因为种蛋开窗处理后，开窗处蛋清水分蒸发加快，从而形成粘连，影响了鸡胚羊膜以及尿囊膜的发育，从而影响种蛋孵化率。

（2）开窗后进入种蛋的空气泡对胚胎发育有害[2]。开窗会导致鸡胚发育畸形和致死，特别对胚胎早期影响较大。开窗时容易使种蛋内容物暴露于空气中，开窗产生的空气泡明显对鸡胚有害，尽管在封口前采取排除气泡的措施，但大部分死亡的胚胎中仍然存在气泡，从而证实气泡对种蛋孵化的损伤作用[3]。

[1]邓缘. 鸡X 期胚盘细胞的冷冻保存及复苏后嵌合体鸡制备的研究[D].湖南农业大学硕士论文,2009.

[2]燕海峰，文 平，邓 缘,等. 种蛋开窗技术及其对鸡胚发育影响的研究[J]. 激光生物学报，2008,17（6）:834-839.

[3]贾存灵，张旭华，李旭博等. 种蛋开窗部位及封口方法对鸡胚发育的影响[J].黑龙江畜牧兽医，2009,(10):38-39.