TLCS 法测定菊花七味胶囊中胆酸的含量

刘德旺 蔡 敏* 岳秀峰

(1.内蒙古医科大学，内蒙古 呼和浩特 010057； 2.呼和浩特市环境保护科学研究所，内蒙古 呼和浩特 010018)

菊花七味胶囊为蒙成药，蒙文名为乌达巴拉-7。收载于《卫生部药品标准》蒙药分册。按照《药品注册管理办法》(试行)中有关提高质量标准的要求，参照《中国药典》2000 年版一部、卫生部部标准等文献资料，对处方中人工牛黄所含的活性成分胆酸进行了含量测定的试验摸索，结果满意。

1 仪器与试药

1.1 仪器: CS-9301 PC 型薄层扫描仪，SPU -1 自动喷雾器，日本岛津公司。PBQⅡ自动铺板器，重庆南岸新力实验电器厂。

1.2 试药与试剂: 胆酸对照品(0078—9312 供含量测定用)中国药品生物制品检定所;菊花七味胶囊由内蒙古惠丰药业有限公司提供。所用试剂均为分析纯。

2 方法学考察

2.1 薄层板的制备: 取硅胶G 适量，加0.5%羧甲基纤维素钠水溶液(1: 3)，用电动混浆器混匀，铺成0.4mm 厚薄层板，室温干燥后，于105℃活化1 小时，置干燥器中备用。

2.2 展开剂: 异辛烷-醋酸丁酯-冰醋酸-甲酸(8: 4: 2: 1)。

2.3 显色剂: 10%硫酸乙醇溶液。

2.4 薄层扫描条件: 采用双波长反射法锯齿扫描，狭缝1.25mm×1.25mm，CH=1;SX=3，扫描速度20mm/min;灵敏度×1。

2.5 标准曲线的绘制: 精密称取胆酸对照品9.62mg，置10mL 量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，精密吸取胆酸对照品溶液1、2、3、4、5μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以异辛烷-醋酸丁酯-冰醋酸-甲酸(8: 4: 2: 1)为展开剂，展至14cm，取出，晾干，喷以10% 硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照薄层色谱法(中国药典2000 年版一部 附录ⅥB 薄层扫描法)进行扫描，测定面积积分值。以对照品量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为Y=0.700 +54.158X，r =0.9992，n=5。胆酸在0.962μg ～4.81μg 范围内呈良好线性关系。

2.6 稳定性试验: 精密吸取对照品溶液(0. 962mg/mL)3μL、供试品溶液4μL，点于硅胶G 薄层板上，依法操作，每隔30min 扫描测定1 次，结果表明胆酸在90min 内峰面积积分值稳定。

2.7 精密度试验

2.7.1 同板精密度: 取配制好的对照品溶液(0.947mg/mL)与供试品溶液，用进样器精密吸取对照品溶液3μL 和供试品溶液4μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，各点6 个点，按质量标准正文［含量测定］项下的方法测定峰积分值。胆酸对照品积分值的相对偏差为2.28%，供试品中胆酸积分值的相对偏差为2.92%，结果见表1。

表1 菊花七味胶囊中胆酸同板精密度试验结果

2.7.2 异板精密度: 精密吸取对照品溶液2μL、4μL 和供试品溶液4μL，分别点于5 块硅胶G 薄层板上，按质量标准正文［含量测定］项下的方法测定峰面积积分值，供试品中胆酸含量的相对标准偏差为2.73%，结果见表2。

表2 菊花七味胶囊中胆酸异板精密度试验结果

2.8 重复性试验: 取同一批号供试品(批号: 040401)5 份，各约0.79g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，超声处理30min，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，作为供试品溶液。分别按［含量测定］项下方法操作，测定每份含量。5 份供试品的平均含量为36.03mg/g，相对标准偏差为2.25%。

2.9 加样回收试验: 取已知含量的供试品(批号: 040401含量为36.03mg/g)5 份，各约0.4g，精密称定，分别定量加入胆酸对照品，按上述供试品制备方法和薄层色谱条件操作，测定，计算回收率，结果见表3。

表3 菊花七味胶囊中胆酸加样回收试验结果

2.10 供试品含量测定: 取本品内容物，按拟定方法处理并测定，结果见表4。

表4 菊花七味胶囊中胆酸含量测定结果

3 讨 论

3.1 本品是由人工牛黄、五灵脂、石膏、红花、麦冬、苦参、菊花等7 味组成的蒙药复方制剂，其中人工牛黄为君药。《中华人民共和国卫生部·部颁标准》规定: 人工牛黄为贝斯素、胆酸、猪去氧胆酸、胆红素等配制而成。因此，以人工牛黄中的主要成分胆酸为内在质量监控指标，采用TLCS法测定其含量，经方法学考察和3 批供试品的测定结果表明，本法简便、灵敏、准确、重现性好，可作为本品生产及成品质量控制的有效方法。

3.2 扫描波长的选择: 取未加入人工牛黄配制的模拟制剂，制成阴性供试品胶囊。分别称取人工牛黄药材、供试品、阴性供试品，同法操作，制成人工牛黄药材溶液、供试品溶液、对照品溶液、阴性供试品溶液。按薄层色谱条件依法操作，经展开后的斑点，于350 ～700nm 范围内作光谱扫描。从扫描图谱可以看出供试品中胆酸在380nm 有最大吸收，阴性供试品无吸收。因此，确定380nm 为测定波长，650nm 为参比波长。

3.3 供试品提取条件的选择

3.3.1 回流提取法［1、2］: 取供试品约0.65g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇50mL，85℃水浴中加热回流提取6h，回收溶剂，残渣加甲醇使溶解，置10mL 量瓶中，加甲醇至刻度。按拟定方法测定，结果回流提取6h 后测定的含量为32.76mg/g (n=5)。

3.3.2 超声处理法［3］: 取供试品5 份，各约0.65g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，分别超声处理10、20、30、40、50 分钟，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，作为供试品溶液。按拟定方法测定。含量分别为18.12、33.97、36.88、35.26、35.59mg/g (n=5)。结果表明超声处理30min 时含量最高。

3.3.3 加酸超声处理法: 取供试品2 份，各约0.65g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇50mL 与稀盐酸2mL(pH4～5)，密塞，称定重量，超声处理30min，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，作为供试品溶液。按拟定方法测定。加酸超声处理30min 后测定含量为32.82g/g。

试验验证，3 种提取方法中，超声处理法的胆酸含量最高，且操作简便，供试品超声处理30 分钟后即可提取完全，因此正文采用超声处理30min 的条件。

3.3.4 阴性对照试验: 取供试品约0.79g，按拟定方法制备供试品溶液;另取缺人工牛黄配制成的模拟制剂，同法制备阴性空白供试品溶液，分别点于同一硅胶G 薄层板上，按拟定的薄层色谱条件测定，结果阴性供试品在与对照品色谱相应的Rf 值处无对应斑点，试验确证处方中其他药味无干扰。

［1］周雪梅，等.一阶导数光谱法测定蒙成药喜木勒-3 人工牛黄胆酸的含量［J］.中成药，1997.11(19) ：15.

［2］荀雅书，等. 薄层扫描法测定蒙成药中胆酸的含量［J］.中国民族医药杂志，1999.7(5) ：3.

［3］国家药典委员会.中国药典［S］.附录ⅤA.中国医药科技出版社，2010.