芎附散对偏头痛模型大鼠行为学、血浆CGRP和NO的影响

周金丽 章正祥 秋 超 侯 群 浙江中药大学附属第一临床医学院 杭州 310053

芎附散对偏头痛模型大鼠行为学、血浆CGRP和NO的影响

周金丽 章正祥 秋 超 侯 群 浙江中药大学附属第一临床医学院 杭州 310053

目的 观察芎附散对硝酸甘油诱发的偏头痛模型大鼠行为学、血降钙素基因相关肽（CGRP）和一氧化氮（NO）的影响。方法 将72只健康雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、盐酸氟桂利嗪组和芎附散组，每组18只，连续灌胃8天后，除空白对照组外，其余各组大鼠予以颈部皮下注射硝酸甘油复制实验性偏头痛模型。观察各组大鼠行为学变化1h，分别于1、2、4h三个时间点采集腹主动脉血测定CGRP和NO水平。结果 空白对照组、盐酸氟桂利嗪组和芎附散组大鼠1h行为学表现与模型组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。空白对照组、盐酸氟桂利嗪组和芎附散组大鼠1、2h两个时间点血CGRP水平与模型组比较差异无统计学意义（P＞0.05），但三组4h血CGRP水平显著低于模型组（P＜0.05）。三组大鼠各时间点动脉血NO水平均低于模型组（P＜0.05）。结论 芎附散可减轻由硝酸甘油诱发的偏头痛模型大鼠症状，降低其血管活性物质CGRP和NO水平。

大鼠；偏头痛；芎附散；降钙素基因相关肽；一氧化氮

芎附散出自《丹溪心法》，由川芎、香附两味药组成。川芎辛温香燥，走而不守，既能行散，上行可达巅顶；又入血分，下行可达血海。活血祛瘀作用广泛，适宜瘀血阻滞各种病症；该方祛风止痛，效用甚佳，可治头风头痛、风湿痹痛等症。昔人谓川芎为血中之气药，殆言其寓辛散、解郁、通达、止痛等功能。香附辛微苦甘、平，入肝、三焦经,具有理气解郁、调经止痛功效。芎附散临床广泛用于偏头痛治疗，但其作用机制尚不完全清楚。本实验模型观察芎附散对硝酸甘油偏头痛大鼠行为学及血浆降钙素基因相关肽（CGRP）和一氧化氮（NO）含量的影响，探讨该药治疗偏头痛的作用机制。

1 实验材料

1.1动物与分组 正常SPF级SD雄性大鼠72只，平均体质量（300±50）g，由浙江中医药大学实验动物中心提供，合格证号：SCXK（沪）2008-0016。应用随机数字表进行完全随机化分为空白对照组、模型组、盐酸氟桂利嗪组和芎附散组，每组18只，连续灌胃第8天后每组再随机分为3个亚组，各6只，每个亚组分别作为1、2、4h三个时间点取材。

1.2药品与仪器 芎附散（川芎∶香附=3∶1，阴天江药业有限公司生产，试验用剂量3.6mg/kg）；盐酸氟桂利嗪胶囊（批号120608496，西安杨森制药有限公司生产，试验用剂量0.9mg/kg）；硝酸甘油注射液（批号120709，广州白云山明兴制药有限公司生产，试验用剂量10mg/kg）；戊巴比妥钠（批号020819，北京化学试剂公司，德国进口分装，试验用剂量50mg/kg）；NO试剂盒（E1030，普利莱基因技术有限公司提供）；CGRP放免分析试剂盒（北京康源瑞得生物技术有限公司提供）；酶标测试仪（ELX808）、-70℃超低温冰箱（702型）及-20℃冰箱（均为BIOTEK公司生产）。

2 实验方法

2.1给药方法 各组均给药8天，每天灌胃1次，给药容积为1mL/100g。盐酸氟桂利嗪组和芎附散组按各自相应浓度的溶液灌胃；空白对照组和模型组均每天灌胃生理盐水1mL/100g。实验过程遵循实验动物管理条例（1988年2号令）。

2.2偏头痛模型制作 第8天给药后30min，模型组、盐酸氟桂利嗪组、芎附散组大鼠颈部皮下注射硝酸甘油0.2mL/100g（10mg/kg），复制实验性偏头痛动物模型[1]，空白对照组颈部皮下注射等量生理盐水。

2.3行为学观察 参考朱晓凤等制定的评分标准[2]：①理毛动作：10次=1分（以10次为基数，每增加1次，加0.1分）；②围笼打转：2次=1分（每增加1次，加1分）；③爬笼：3次=1分（每增加1次，加1分）；④烦躁：往返运动1次=1分；⑤咬尾：1次=1分；⑥耳红：出现为1分。

2.4血浆CGRP和NO含量测定 硝酸甘油造模后1、2、4h大鼠予戊巴比妥钠（50mg/kg）腹腔注射麻醉。大鼠仰卧固定于手术台上，分别取两份2mL腹主动脉血，将其中一份2mL血注入含有7.5%EDTA二钠30μL和抑肽酶40μL的冰冷离心试管中，轻轻摇匀，常温离心机，3000r/min，离心5min，分离出抗凝血浆，按编号放入超低温冰箱中-70℃保存，用于CGRP检测；将另一份2mL血注入离心试管中，静置0.5h，常温离心机，3000r/min，离心10min，分离出血清，按编号放入-20℃低温冰箱中贮存用于NO检测。血浆CGRP以放免法测定，NO以可见光分光光度法测定，操作均按试剂盒说明书进行。

2.5统计学方法 应用SPSS17.0软件进行统计处理，计量资料以（） 表示，组间进行单因素方差分析、SNK多重比较。以P＜0.05为差异有统计学意义。

3 实验结果

3.1行为学变化 空白对照组、盐酸氟桂利嗪组及芎附散组1h行为学得分与模型组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 各组大鼠1h行为学评分比较（） 分

表1 各组大鼠1h行为学评分比较（） 分

注：与模型组比较，*P＜0.05

空白对照组模型组盐酸氟桂利嗪组芎附散组18 18 18 18 3.20±0.74* 40.60±6.44 12.56±5.68* 10.47±4.30*

3.2各组血浆CGRP水平比较 空白对照组、盐酸氟桂利嗪组1、2h动脉血浆CGRP水平与模型组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；芎附散组2h CGRP与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.05）；三组4h时间点血浆CGRP水平均显著低于模型组（P＜0.05），见表2。

表2 各组大鼠各时间点血浆CGRP水平比较（） pg/mL

表2 各组大鼠各时间点血浆CGRP水平比较（） pg/mL

注：与模型组比较，*P＜0.05

3.3各组血清NO水平比较 与模型组各时间点比较，空白对照组、盐酸氟桂利嗪组、芎附散组各时间点大鼠血清中NO含量明显降低（P＜0.05），见表3。

表3 各组大鼠各时间点血浆NO含量（） μmol/L

表3 各组大鼠各时间点血浆NO含量（） μmol/L

注：与模型组比较，*P＜0.05

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4 讨 论

偏头痛发病机制迄今尚不完全清楚。目前认为它是一种对于体内或体外环境的突然变化发生的神经血管反应，与体内多种血管活性物质如降钙素基因相关肽、一氧化氮、5-羟色胺（5-HT）、去甲肾上腺素（NA）、多巴胺（DA）、P物质及神经肽A等密切相关[3]，神经源性炎症使血管扩张、血浆成分外渗、肥大细胞脱颗粒和血小板激活。感觉传入纤维进一步兴奋，加重神经源性炎症，并兴奋脑干、下丘脑和大脑皮质等高级中枢引发头痛。

硝酸甘油动物偏头痛模型方法简单、经济，可在短期内复制[4-5]，其代谢产物NO兼有内源性血管扩张剂和神经递质的双重功能，可促进三叉神经伤害感觉器的中枢致敏作用，并可诱导三叉神经节细胞合成和分泌降钙素基因相关肽（CGRP）。CGRP广泛分布于中枢神经系统、外周神经系统以及心血管、消化、呼吸和内分泌等系统，是迄今为止发现的最强血管扩张药物，而其对脑、心血管的作用更为显著。近年研究发现，CGRP是偏头痛的一个重要因素[6]，CGRP和P物质是支配脑血管的三叉神经感觉纤维中两种主要的神经肽。三叉神经感觉纤维释放CGRP，CGRP扩张血管并使毛细血管通透性增加、血浆蛋白渗出，增强P物质在外周的扩血管、血浆渗出、刺激各种炎症介质释放和聚集作用，共同形成神经源性炎症，引起剧烈疼痛反应[7]。

尽管偏头痛中医临床诊断标准不一[8]，但是根据中医传统经验开发的一些中药，如天麻素、芎附散在实践中大量运用。芎附散中的川芎对中枢神经具有镇痛作用，其所含成分能改善微循环，抑制血小板聚集，有较强的镇痛、解痉、软化血管作用，而且能通过血脑屏障，对急、慢性脑血管疾病有肯定疗效[9]。本研究结果表明，模型组血管活性物质CGRP、NO含量明显升高，这与国内外实验结果基本一致[10]，芎附散能明显减少动物的阳性反应次数，降低模型大鼠各时间点血CGRP和NO的含量，提示该药物能通过影响神经递质的释放，减少致痛致炎物质、血管活性物质的释放，降低神经细胞、脑血管的进一步损伤，缓解神经源性炎症，提高机体痛阈值，缓解或预防偏头痛的发生。

［1］Tassorelli C，Joseph SA.Systemic nitroglycerin induces Fos immunoreactivity in brainstem and forebrain structures of the rat［J］.Brain Res，1995，682（1-2）：167-181.

［2］朱晓凤，韩月臣，熊文萍，等.热凝脑膜中动脉对硝酸甘油致偏头痛大鼠三叉神经尾核c-fos基因表达的影响［J］.山东大学耳鼻喉眼学报，2010，24（1）：61-64.

［3］刘若卓，于生元.偏头痛发病机理的研究进展［J］.中国疼痛医学杂志，2002，8（4）：225-228.

［4］郭琳，洪治平.硝酸甘油型实验性偏头痛模型原理与研究现状［J］.中国疼痛医学杂志，2004，10（6）：357-359，364.

［5］李佳川，孟宪丽，曾勇.偏头痛动物模型研究现状［J］.中药与临床，2010，1（4）：56-60.

［6］Hargreaves R.New migraine and pain research［J］.Headache，2007，47（Suppl 1）：S 26-43.

［7］Perini F，D'Andrea G，Galloni E，et al.Plasma cytokine levels in migraineurs and controls［J］.Headache，2005，45（7）：926-931.

［8］马壮壮，梁茂新.偏头痛中医辨证存在问题与对策［J］.中华中医药杂志，2012，27（2）：412-414.

［9］黄力强.川芎对心脑血管疾病活血化瘀药理作用的探讨［J］.辽宁中医杂志，2000，27（10）：469-469.

［10］齐广平.桂枝去桂加茯苓白术汤对实验性偏头痛动物模型NO、CGRP含量的影响［J］.吉林医学，2010，31（35）：6419-6420.

Influence of Xiongfu Powder on Behavioral Manifestations and Plasma Calcitonin-gene Related Peptide and Nitric Oxide Levels in Migraine Rats Triggered by Nitroglycerin

ZHOU Jinli,ZHANG Zhengxiang,QIU Chao,HOU Qun. The First Affiliated Clinical Medical College,Zhejiang University of Traditional Chinese Medicine,Hangzhou (310053),China

Objective To observe the influence of Xiongfu powder on the behavioral manifestations and blood calcitonin-gene related peptide（CGRP）and nitric oxide（NO）levels in migraine rats.Methods Seventy-two SD rats were randomly divided into four groups:blank control group,model group,flunarizine hydrochloride group,and Xiongfu powder group.By intragastric administration for 8 consecutive days,the rats were injected subcutaneously with nitroglycerin to trigger migraine except for blank control group on day 8 and then abdominal aorta blood from the rats was drawn at 1,2,and 4 h after drug intervention to detect CGRP and NO levels.One-hour behavioral manifestations were observed after drug intervention.Results One-hour behavioral manifestations were significantly different in blank control,flunarizine hydrochloride,and Xiongfu power groups compared with the model group（P＜0.05）.The CGRP level in blank control,flunarizine hydrochloride,and Xiongfu powder groups was markedly lower than that of model group at 4 h after drug intervention（P＜0.05）,but no statistical difference was found between the three groups and model group at 1 and 2 h（P＞0.05）.The No levels in the 3 groups were much lower than that in model group at each time point（P＜0.05）.Conclusion Xiongfu powder may relieve symptoms of rats following nitroglycerin infusion,meanwhile may reduce the CGRP and NO levels.

rats;migraine;Xiongfu powder;calcitonin-gene related peptide;nitric oxide

2013-06-11

侯群，Tel：13588887283；E-mail：houqun168@163.com