XRCC1基因多态性与宫颈鳞癌放疗敏感性的关系*

樊晓妹 李魁秀 牛书怀 房朝辉 金 鸽

XRCC1基因多态性与宫颈鳞癌放疗敏感性的关系*

樊晓妹 李魁秀△牛书怀 房朝辉 金 鸽

目的 探讨XRCC1基因Arg194Trp、Arg399Gln单核苷酸多态性(SNP)与外生型宫颈鳞状细胞癌放疗敏感性的关系。方法选择经组织病理学确诊的外生型宫颈鳞状细胞癌患者73例。其中临床分期Ⅰ期4例，Ⅱ期36例，Ⅲ期30例，Ⅳ期3例。肿瘤直径≤4 cm 30例，肿瘤直径＞4 cm 43例；A点剂量≤80 Gy者36例，A点剂量＞80 Gy者37例。近期疗效为完全缓解者(CR组)47例，部分缓解者(PR组)26例。采用错配扩增聚合酶链式反应检测患者血液标本的XRCC1 Arg194Trp、Arg399Gln SNP的基因型频率分布，分析其与宫颈癌放疗敏感性的关系。结果XRCC1基因Arg194Trp分型中，携带Arg/Arg、Arg/Trp、TrP/Trp分别有31例（42.5%）、37例（50.7%）、5例（6.8%）；Arg399Gln分型中，携带Arg/Arg、Arg/Gln、Gln/Gln分别有26例（35.6%）、39例（53.4%）、8例（11.0%）。CR组与PR组Arg194Trp、Arg399Gln基因型分布差异均无统计学意义。影响放疗敏感性的多因素Logistic回归分析结果显示，临床分期晚为PR的危险因素。结论XRCC1基因Arg194TrpSNP、Arg399Gln SNP与外生型宫颈鳞状细胞癌放疗敏感性无相关性。临床分期越晚放疗敏感性越差。

宫颈肿瘤；癌,鳞状细胞；X-射线交错互补修复基因1；单核苷酸多态性；放疗敏感性

在我国，宫颈癌仍是最常见的女性生殖道恶性肿瘤，且呈现年轻化趋势，严重危及女性的生命与健康[1]。目前宫颈癌根治术和同步放化疗是宫颈癌患者的主要治疗方法。然而，在临床治疗中却发现，同样的病例给予同等剂量的放疗及化疗方案，不同个体对治疗反应不同，肿瘤对放化疗敏感性也有一定差别。因此寻找影响患者疗效的内在因素极为重要。有报道显示，XRCC1基因多态性与多种肿瘤的放化疗敏感性相关，如头颈部肿瘤、肺癌、乳腺癌等[2-4]，但与宫颈癌放化疗疗效关系的研究较少。本研究旨在探讨XRCC1基因Arg194Trp、Arg399Gln单核苷酸多态性(SNP)与宫颈癌放疗敏感性的关系。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选择2008年6月—2009年5月于我院妇瘤科住院初治，并均经组织病理学确诊的外生型宫颈鳞状细胞癌患者73例。临床分期采用国际妇产科联盟（FIGO）标准，其中Ⅰ期4例，Ⅱ期36例，Ⅲ期30例，Ⅳ期3例。肿瘤直径≤4 cm者30例，肿瘤直径＞4 cm者43例；A点剂量≤80 Gy者36例，A点剂量＞80 Gy者37例。近期疗效为完全缓解(CR)者47例，年龄35～72岁，中位年龄51岁；部分缓解(PR)者26例，年龄34～78岁，中位年龄52岁。标本采集均由本人知情同意。

1.2 方法

1.2.1 DNA提取 取患者静脉血5 mL，经枸橼酸钠抗凝，4℃冰箱保存。采血1周内以蛋白酶K消化-饱和氯化钠盐析法提取外周血白细胞DNA。

1.2.2 基因多态性检测 根据错配扩增聚合酶链式反应(MAMA-PCR)工作原理，每个SNP的检测均设计3条引物，包括2条上游引物和1条下游引物，其中2条上游引物均在3′端的末位根据不同的SNP碱基给予不同的错配，共用下游引物。根据NCBI网站上公布的DNA全序列信息，在Primer Designer 3.0.0.1版软件辅助下，自行设计引物，由北京赛百盛基因技术有限公司合成。XRCC1 Arg194Trp上游引物为5′-GGGGGCTCTCTTCTTCAGGC-3′,5′-GGGGGCTCTCTTCTTC AGGT-3′，下游引物为5′-CGCTGGCTGTGACTATGAAG-3′。XRCC1 Arg399Gln上游引物为5′-CGTCGGCGGCTGCCCTCCTG-3′，5′-CGTCGGCGGCTGCCCTCCTA-3′,下游引物为5′-TTACAGGCGTGAGCCACTGC-3′。MAMA-PCR反应体系：灭菌去离子水18.0 μL，1×PCR缓冲液2.5 μL，PCR染料2.0 μL，上、下游引物各0.4 μL，dNTPs 0.5 μL，Taq酶0.2 μL，模板DNA1.0 μL。反应条件：94℃预变性5 min。以后按94℃变性45 s，62℃（Arg194Trp）、69℃（Arg399Gln）退火45 s，72℃延伸45 s，35个循环后。72℃延伸10 min后4℃结束。扩增产物经2%琼脂糖电泳溴化乙锭（EB染色），紫外灯下观察结果。

1.3 统计学方法 应用SPSS 13.0软件进行统计分析。计数资料以例（%）表示，2组间比较采用χ2检验。影响放疗敏感性的危险因素分析行Logistic多因素回归分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Arg194Trp SNP与外生型宫颈鳞状细胞癌放疗敏感性的关系 73例外生型宫颈鳞状细胞癌中XRCC1基因Arg194Trp分型中，携带Arg/Arg、Arg/ Trp、TrP/Trp分别有31例（42.5%）、37例（50.7%）、5例（6.8%）。CR组与PR组间分布差异无统计学意义，见表1。

Table1 Association between Arg194Trp/Arg399G SNP and radiotherapy response in squamous cell carcinoma of cervix表1 Arg194TrpSNP与外生型宫颈鳞状细胞癌放疗敏感性的关系 例（%）

2.2 Arg399Gln SNP与外生型宫颈鳞状细胞癌放疗敏感性的关系 73例外生型宫颈鳞状细胞癌中XRCC1基因Arg399Gln分型中，携带Arg/Arg、Arg/ Gln、Gln/Gln分别有26例（35.6%）、39例（53.4%）、8例（11.0%）。CR组与PR组间分布差异无统计学意义，见表2。

Table 2 Association between Arg399Gln SNP and radiotherapy response in squamous cell carcinoma of cervix表2 Arg399GlnSNP与外生型宫颈鳞状细胞癌放疗敏感性的关系 例（%）

2.3 影响放疗敏感性的危险因素分析 见表3。以放疗结局为因变量（CR=0，PR=1），以年龄、临床分期（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分别赋值0、1、2、3）、肿瘤大小（肿瘤直径≤4 cm=0，＞4 cm=1）、A点剂量（≤80 Gy= 0，＞80 Gy=1）、Arg194Trp基因型、Arg399Gln基因型为自变量，进行多因素Logistic回归分析，结果显示临床分期晚是PR的危险因素。

Table 3 Logistic regression analysis of factors of radiotherapy sensitivity表3 影响放疗敏感性的多因素Logistic回归分析结果

3 讨论

目前针对XRCC1基因多态性与多种肿瘤放化疗敏感性关系的研究结果不尽一致。Cheng等[5]对70例局部晚期宫颈癌患者行铂类为基础新辅助化疗，分析其外周血白细胞中XRCC1基因，结果显示，XRCC1Arg194Trp基因型分布在化疗有效组及无效组间差异无统计学意义，Arg399Gln基因型分布在化疗有效组及无效组间差异有统计学意义，携带至少1个Gln等位基因患者化疗失败风险明显高于携带Arg/Arg基因型者，提示XRCC1基因Arg399Gln SNP可能影响宫颈癌患者以铂类为基础的新辅助化疗疗效。王中华等[2]对105例接受以铂类为基础药物化疗的非小细胞肺癌患者研究发现，携带至少1个194Trp等位基因者化疗有效率（43.1%）高于携带Arg/Arg基因型者（20.3%），携带399Arg/Arg基因型者化疗有效率（41.5%）高于携带至少1个Gln等位基因者（21.2%）。本研究结果显示，XRCC1基因Arg194Trp、Arg399Gln基因型分布在CR组与PR组间差异均无统计学意义，提示Arg194TrpSNP、Arg399Gln SNP不能作为预测外生型宫颈鳞癌放疗敏感性的指标。与相关文献结果不同可能是由于宫颈癌的发生是多因素、多阶段和多基因的过程，是由于环境危险因素、行为因素和个体遗传因素交互作用的结果，仅对某一两个基因或位点进行分析具有一定的局限性[3]，另外本研究样本量较少，突变型基因频率低，不足以说明其SNP与外生型宫颈鳞状细胞癌放疗敏感性的关系。

关于临床分期对放疗敏感性的影响尚存在争议。戴钰辉等[6]研究结果显示，随着临床分期加重，肿瘤的放疗抗拒增大。国外也有研究显示，ⅣA期宫颈癌放疗局控率差，因此为提高局控率和无病间隔期可加大A点剂量[7]。而张欣欣等[8]研究认为临床分期与放疗敏感性关系不大。本研究结果显示，临床分期越晚，放疗敏感性越差。结果存在差异的原因可能是实验样本较少，可能不具备代表性，另外治疗方式不同也可直接影响治疗结果。故需进一步深入研究，为今后的个体化治疗方案提供依据。

[1]李雪,孔为民,韩超,等.首都医科大学附属北京妇产医院1992-2011年间宫颈癌发病趋势分析[J].中华妇幼临床医学杂志, 2013,9(3):310-314.

[2]王中华,缪小平,谭文,等.单核苷酸多态与晚期非小细胞肺癌对铂类药物化疗敏感性的相关性[J].癌症,2004,23(8):865.

[3]彭小波,张军宁.XRCC1单核苷酸多态性与含铂类药物化疗对肝肾功能影响相关性分析[J].实用癌症杂志,2011,26(2):147.

[4]Przybylowska-Sygut K,Stanczyk M,Kusinska R,et al.Association of the Arg194Trp and the Arg399Gln polymorphisms of the XRCC1 gene with risk occurrence and the response to adjuvant therapy among Polish women with breast cancer[J].Clin Breast Cancer, 2013,13(1):61-68.doi:10.1016/j.clbc.2012.09.019.

[5]Cheng XD,Lu WG,Ye F,et al.The association of XRCC1 gene single nucleotide polymorphisms with response to neoadjuvant chemotherapy in locally advanced cervical carcinoma[J].J EXP Clin Cancer Res,2009,28(1):91.doi:10.1186/1756-9966-28-91.

[6]戴钰辉,李小娟.宫颈癌不同临床分期放疗抗拒与缺氧诱导血管新生的关系[J].河北医药,2011,33(16):3416-3418.

[7] Páez D,Salazar J,Paré L,et al.Pharmacogenetic study in rectal cancer patients treated with preoperative chemoradiotherapy:polymorphisms in thymidylate synthase,epidermal growth factor receptor,GSTP1,and DNA repair genes[J].Int J Radiat Oncol Biol Phys, 2011,81(5):1319-1327.doi:10.1016/j.ijrobp.2011.01.025.

[8]张欣欣,盛修贵,燕玉凤.影响宫颈癌放疗敏感性的临床病理因素分析[J].中华肿瘤防治杂志,2011,18(15):1204-1207.

（2013-11-04收稿 2014-03-13修回）

（本文编辑 陈丽洁）

Correlation of XRCC1 Polymorphism with Radiotherapy Response in Squamous Cell Carcinoma of Cervix

FAN Xiaomei,LI Kuixiu,NIU Shuhuai,FANG Zhaohui,JIN Ge
Department of Gynecologic Oncology,Hebei Medical University Fourth Hospital,Shijiazhuang Hebei 050011,China

ObjectiveTo investigate the correlation of XRCC1 Arg194Trp Arg399Gln Single nucleotide polymorphism(SNP)with radiotherapy response of squamous cell carcinoma of cervix.MethodsPatients with exogenous type cervical squamous cell carcinoma confirmed by histopathology were selected for our study.These include:patients in stageⅠ(4 cases),patients in stageⅡ(36 cases),patients in stageⅢ(30 cases),patients in stageⅣ (3 cases).There are 30 patients with tumor diameter less than 4 cm and 43 patients with tumor diameter over 4 cm in our test.There are 36 cases with dose point A less than 80 Gy and 37 cases with dose point A over 80 Gy.Radiotherapy outcomes showed 47 cases of complete remission and 26 cases of part remission.Polymorphisms Arg194Trp,Arg399Gln of XRCC1 gene in 73 cervical cancer patients were analyzed by mismatch amplification polymerase chain reaction(MAMA-PCR).ResultsArg/Arg,Arg/Trp,TrP/ Trp of Arg194Trp genotype distribution were 31(42.5%),37(50.7%),5(6.8%)respectively.Arg/Arg,Arg/Gln,Gln/Gln of Arg399Gln distribution were 6(35.6%),39(53.4%),8(11.0%)respectively.The response to radiotherapy was not statistically significant in three genotypes,Arg/Arg,Arg/Trp,TrP/Trp of XRCC1 at codon 194(P＞0.05).Neither was XRCC1 at codon 399.Multivariate analysis showed that late clinical stage was a risk factor of part remission.ConclusionSNP of XRCC1 gene at codon 194 and codon 399 could not predict clinical response of patients with squamous cell carcinoma of cervix to radiotherapy.The patients with advanced cervical cancer had poor response to radiotherapy.

uterine cervical neoplasms;carcinoma,squamous cell;X-ray repair cross-complementing gene 1；single nucleotide polymorphism；radiotherapy sensitivity

R737.33

A

10.3969/j.issn.0253-9896.2014.06.022

*河北省科技计划项目（项目编号：12277767）

河北医科大学第四医院妇瘤科(邮编050011)

△通讯作者 E-mail：lkxdr@sina.com