布洛肾素片中抗氧剂焦亚硫酸钠的含量测定

苏琳琳，王俊锋，赵美玲，李亚璟，杨 震，丁平田*

（1.沈阳药科大学 药学院，辽宁 沈阳 110016；2.山东威高药业股份有限公司，山东 威海 264200 ）

布洛肾素片中抗氧剂焦亚硫酸钠的含量测定

苏琳琳1，王俊锋2，赵美玲1，李亚璟1，杨 震1，丁平田1*

（1.沈阳药科大学 药学院，辽宁 沈阳 110016；2.山东威高药业股份有限公司，山东 威海 264200 ）

目的建立紫外分光光度法测定布洛肾素片中抗氧剂焦亚硫酸钠的含量。方法 采用比色法，焦亚硫酸钠与甲醛和碱性品红反应产生紫红色化合物，室温放置25 min后，在557 nm波长处测定紫外吸光度值，按外标法计算焦亚硫酸钠含量。 结果 焦亚硫酸钠在0.100～1.603 mg·L-1（r=0.999 9）内线性关系良好，重复性RSD为0.29%，平均回收率为101.6%，RSD为0.31%。结论 该方法能够有效测定布洛肾素片中焦亚硫酸钠的含量。

药剂学；药物分析；含量测定；比色法；抗氧剂；焦亚硫酸钠；布洛肾素片

布洛肾素片是由布洛芬（ibuprofen）与盐酸去氧肾上腺素（phenylephrine hydrochloride）组成的复方药物，用于缓解普通感冒与流感症状。其中盐酸去氧肾上腺素是一种拟交感神经胺类药物，主要通过直接影响α-肾上腺素能受体起作用。该药易于发生理化降解[1]，在许多条件如氧气、水分、还原糖、酸碱以及高温下会发生一定的降解反应。因此布洛肾素片在处方中加入了抗氧剂焦亚硫酸钠，用于缓解盐酸去氧肾上腺素的氧化过程。测定焦亚硫酸钠的含量可以确定抗氧剂在制剂中的作用情况，同时，由于焦亚硫酸钠的残留物亚硫酸盐可能对人体造成损害，为提高产品安全性，应对其进行质量控制。《中华人民共和国药典》2010版[2]作为药用辅料对焦亚硫酸钠的测定采用的是滴定法，该法适用于辅料纯品的检测，由于本药为复方片剂，其他成分对滴定法有所干扰，故该法无法准确测定其含量。目前国内外暂无文献报导测定复方片剂中焦亚硫酸钠含量的方法。本文作者采用比色法[3]测定了布洛肾素片中焦亚硫酸钠的含量，结果表明比色法能有效地测出布洛肾素片中焦亚硫酸钠含量。

1 仪器与材料

UV2000紫外分光光度仪(尤尼科上海（仪器）有限公司)，KQ-50B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

布洛肾素片（自制），乙二胺四乙酸二钠（沈阳医药股份有限公司化玻公司），甲醛（沈阳市东陵区红日化工厂），碱性品红（天津市恒兴化学试剂制造有限公司），焦亚硫酸钠样品1（天津博迪医药化工有限公司），焦亚硫酸钠样品2（成都华邑药用辅料有限责任公司），其他所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1反应原理

焦亚硫酸钠在强酸性溶液中反应产生二氧化硫，溶于水生成亚硫酸，后者与碱性品红及甲醛溶液发生加成反应产生紫红色化合物[4]。反应为两步反应，第一步反应中，由于碱性品红的溶液为盐酸溶液，焦亚硫酸钠的亚硫酸根在强酸性溶液中产生二氧化硫溶于水形成的亚硫酸与品红发生亲核加成反应，使品红的红色褪去，反应式如图1。

图1 品红与亚硫酸的第一步亲核加成反应Fig.1 The first step in nucleophilic addition of fuchsin and sulfurous acid

在第二步反应中，由于溶液中甲醛的存在，使第一步产生的产物1在遇到甲醛的情况下迅速发生第二步亲核加成反应，甲醛中具有碳氧双键的羰基，由于氧的电性大，吸引电子的能力强，使羰基成为一个极性基团，具有一个偶极矩。由于氧的诱导效应，使和氧原子直接相连的碳原子带正电性，空间位隔小的硫原子能与之发生反应。因此在溶液中迅速产生加成产物2，溶液呈紫红色。反应式如图2。

图2 加成产物1与甲醛的第二步亲核加成反应Fig.2 The second step in nucleophilic addition of addition product 1 and formaldehyde

2.2 显色溶液配制

碱性品红溶液：称取碱性品红0.05 g，加5 mL盐酸溶解，并用水稀释至100 mL。甲醛溶液：精密量取甲醛0.8 mL，加水稀释至100 mL。

2.3 检测方法

取10片布洛肾素片研磨，精密称取220 mg（约含焦亚硫酸钠0.5 mg）置于100 mL量瓶中，加适量水超声溶解，定容，滤过，制成约含焦亚硫酸钠5 mg·L-1的溶液。精密称取该溶液5 mL，至25 mL量瓶中，加入碱性品红溶液2 mL，甲醛溶液3 mL，加水溶液稀释至刻度，混匀后室温放置25 min。同时，将上述过程中焦亚硫酸钠溶液更换为水溶液，同法配制，作为参比溶液。此外，精密称取焦亚硫酸钠适量，加水溶解并稀释成浓度约为5 mg·L-1的溶液。精密量取该溶液5 mL，至25 mL量瓶中，加入碱性品红溶液2 mL，甲醛溶液3 mL，加水稀释至刻度，混匀后室温放置25 min，作为对照溶液。

2.4 检测波长选择

精密量取5 mg·L-1的焦亚硫酸钠对照溶液5 mL至25 mL量瓶中，加入碱性品红溶液2 mL，甲醛溶液3 mL，加水溶液稀释至刻度，混匀后室温放置25 min，参比溶液同“2.3”条，在200～800 nm波长范围内扫描，扫描图见图3。同时称取一定量的不含焦亚硫酸钠的处方研磨粉末，按“2.3”条方法配制不含焦亚硫酸钠的空白溶液，在200～800 nm波长范围内扫描，扫描图见图4。结果表明显色溶液最大吸收波长为557 nm，空白溶液在557 nm处无吸收。

图3 样品溶液紫外扫描图Fig.3 The UV spectrum of sample solution

图4 空白溶液紫外扫描图Fig.4 The UV spectrum of blank solution

2.5 显色时间选择

本反应为显色反应，需要一定的反应时间。按“2.3”条方法配制焦亚硫酸钠对照显色溶液，分别于5、10、15、20、25、30、35、40、50、60、90、120 min测定吸光度。结果见表1。

表1 不同时间溶液的吸光度Table 1 The absorbances of the solution at different time points

结果表明在10～120 min内溶液吸光度稳定，最终选择25 min作为显色时间，并且为保证结果准确性，在显色后1 h内测完。

2.6 显色剂加入量的确定

实验中，显色反应显色剂为品红-甲醛溶液，固定甲醛加入量为3 mL，改变品红加入量分别为0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mL，按“2.3”条方法测定吸光度，结果见表2。吸光度结果显示当品红加入量为1.5～2.0 mL时反应已经完全，吸光度稳定。因此采用了甲醛3 mL，品红2 mL作为该反应的显色剂。

表2 不同品红加入量测得溶液的吸光度Table2 The effect of different amount of fuchsin on absorbance of the solution

2.7 专属性试验

精密称取一定量的不含焦亚硫酸钠的复方布洛肾素片研磨粉末，按“2.3”条方法配制成阴性对照溶液。参比溶液同“2.3”条，分别于5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60 min测定其吸光度，结果表明在5～60 min内溶液吸光度值始终为0，表明处方中其他成分不干扰焦亚硫酸钠的测定。

2.8 线性关系试验

分别精密量取5 mg·L-1的焦亚硫酸钠对照品储备液0.5、1.0、2.0、5.0、6.0、8.0 mL置于25 mL量瓶中，加入碱性品红溶液2 mL，甲醛溶液3 mL，加水溶液稀释至刻度，配制成质量浓度为0.1、0.2、0.4、1.0、1.2、1.6 mg·L-1的显色溶液，混匀后室温放置25 min，在557 nm测定吸光度。以吸光度与浓度进行线性拟合，结果表明焦亚硫酸钠在0.100～1.603 mg·L-1内线性关系良好，回归方程为A=0.450 5 ρ-0.032 7，r=0.999 9。

2.9 重复性试验

按“2.3”条方法配制6份质量浓度为1.0 mg·L-1的供试显色溶液，放置25 min后测定吸光度，计算RSD值为0.29%，表明该法重复性良好。

2.10 收率试验

精密称取焦亚硫酸钠适量，相当于标示量的80%、100%、120%，加入处方量辅料，按“2.3”条方法配成高、中、低3个浓度的显色溶液，参比同“2.3”条，在557 nm测定吸光度并按标准曲线计算回收率，结果见表3。

2.11 样品含量测定

分别采用天津博迪医药化工有限公司以及成都华邑药用辅料有限责任公司生产的焦亚硫酸钠，各制备了3批样品，每批取2片，测定每片中焦亚硫酸钠的含量。对6批布洛肾素片样品中焦亚硫酸钠的含量进行了测定，结果见表4。

表3 布洛肾素片中焦亚硫酸钠的回收率结果Table 3 Recoveries of sodium metabisulfite in ibuprofen-phenylephrine hydrochloride tablets

表4 6批布洛肾素片中焦亚硫酸钠的测得量Table 4 The measured values of sodium metabisulfite in six batches of tablets

3 结论与讨论

3.1 方法学结果与含量测定结果

方法学结果表明焦亚硫酸钠在0.100～1.603 mg·L-1（r=0.999 9）线性关系良好，重复性RSD为0.29%，平均回收率为101.6%，RSD为0.31%，显色溶液在2 h内吸光度稳定。6批布洛肾素片中测得焦亚硫酸钠平均含量为每片494 μg，RSD为0.93%。

3.2 拟交感神经类药物与亚硫酸盐的反应

许多拟交感神经类药物如肾上腺素与亚硫酸盐类抗氧剂可以发生反应生成烷基磺酸，导致药物降解。本次实验中的主药盐酸去氧肾上腺素与肾上腺素同为拟交感神经类药物。盐酸去氧肾上腺素与肾上腺素相比缺少对位的酚羟基基团。实验证明[5]肾上腺素与亚硫酸盐反应的活性基团是对羟基苯甲醇结构，由于缺少对位酚羟基，盐酸去氧肾上腺素不会发生磺化反应，因此加入抗氧剂焦亚硫酸钠不会对盐酸去氧肾上腺素产生影响。

3.3 焦亚硫酸钠对照品的选择

由于国内无焦亚硫酸钠对照品，而参考文献[3,6-7]均采用焦亚硫酸钠分析纯产品作为对照品，因此本文作者最终采用了焦亚硫酸钠的分析纯试剂作为对照品，纯度质量分数≥96.0%。

文献[6-7]报导采用褪色法测定焦亚硫酸钠含量，应用二氧化硫使品红褪色的原理测定吸光度值，但该法需要采用标准曲线法测定，并且采用吸光度倒数与浓度回归的方法，与作者的研究方法相比灵敏度低，准确度差。

[1] MICHAL D, PETR G, JAROSLAV H, et al. Drug-excipient compatibility testing—identif i cation and characterization of degradation products of phenylephrine in several pharmaceutical formulations against the common cold[J]. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2011, 55: 949-956.

[2] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典: 二部[M]. 北京: 中国医药科技出版社, 2010: 1238-1239.

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[4] 王礼琛. 有机化学[M]. 北京: 中国医药科技出版社, 2006.

[5] TAKERU H, LOUIS C. Reactivity of bisulfite with a number of pharmaceuticals[J]. Journal of The Amercican Pharmaceutical Association, 1959, XLVⅢ(9): 535-540.

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Abstrat: ObjectiveTo establish a method to determine antioxidant sodium metabisulfite in ibuprofen-phenylephrine hydrochloride tablets. Methods The colorimetry method was applied based onreaction of sodium metabisulfite with formaldehyde and basic fuchsin. After reaction for 25 minutes under room temperature, the product of a purple compound was formed and absorbance of the solution at 557 nm was determined to calculate the content of sodium metabisulfite. Results This determination method of sodium metabisulfite was developed with good linearity over the concentration range of 0.100～1.603 mg·L-1(r=0.999 9), precision RSD of 0.29% and average recovery of 101.6%. Conclusions This established colorimetry method is sensitive, simple and convenient, which can be used to determine the content of sodium metabisulfite in the preparations.

Determination of the antioxidant sodium metabisulfite in ibuprofen-phenylephrine hydrochloride tablets

SU Lin-lin1, WANG Jun-feng2, ZHAO Mei-ling1, LI Ya-jing1, YANG Zhen1, DING Ping-tian1*
(1. School of Pharmacy, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016, China; 2. Shandong Weigao Pharmaceutical Co., Ltd. , Weihai 264200, China)

pharmaceutics; pharmaceutical analysis; content determination; colorimetry; antioxidant; sodium metabisulfite; ibuprofen-phenylephrine hydrochloride tablets

R 917

A

（2014）01–0018–07

(本篇责任编辑：吕向一)

2013–12–24

苏琳琳（1989-），女（满族），辽宁锦州人，硕士研究生，E-mail jadesu421@hotmail.com；＊通讯作者：丁平田（1969-），男（汉族），山东临朐人，教授，博士，硕士生导师，主要从事药物新剂型研究，Tel. 024-23986305，E-mail dingpingtian@qq.com。